斑马鱼石蜡切片,预包埋和包埋

1.预包埋

1)准备1%的琼脂，置于60oC备用

2)将固定的斑马鱼胚胎置于PBST中洗2x5min

3)将胚胎吸到凹玻片上，加入熔化的琼脂，摆正位置，凝固后选择合适的切面，将琼脂块切成合适的形状（如：等腰三角形，底边为未来的切面）

2.脱水

4)将琼脂块梯度酒精脱水（30-50-70-90-100-100），每个梯度10min

注：脱水要完全。

3.透明 

5)吸去一半酒精，加入等体积二甲苯，混匀，室温15min

6)吸去一半体积的酒精二甲苯混合液，加入等体积二甲苯，混匀，室温15min

7)吸取所有液体，加入二甲苯，室温15min

8)换新鲜的二甲苯，70oC 15min(选做）

4.透蜡

9)吸去一半二甲苯，加入等体积的石蜡（熔点52oC的切片用石蜡），混匀，70oC 30min

10)吸去一半二甲苯石蜡混合液，加入等体积石蜡，混匀，70oC 30min

11)吸去所有液体，换纯石蜡，混匀，70oC 30min

12)换新鲜的纯石蜡，70oC 2x30min

5.包埋

13)蜡杯中抹上一层甘油，先加入少量石蜡，待其将要凝固时，将琼脂块垂直插入（切面向下，如：等腰三角形的底边在下）

14)向蜡杯中加注石蜡，没过琼脂块，待石蜡表面凝固后，将蜡杯沉入冷水中，石蜡块可能漂浮到水面。

15)捞出蜡杯，进行下一个包埋。