食品微生物检验菌落总数检验方法学验证报告

菌落总数检验方法学验证报告

一、验证目的

验证GB47.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数的测定》在本实验室的适用性。

二、验证方法

严格按照GB47.2-2016进行实验，样品采样方案依据GB47.1-2016 《食

品微生物学检验总则》的要求进行，本实验方法设计如下：

样品种类样品名称样品编号实验人员实验方法糕点xxx xxx a、b 双人双平行蜂蜜xxx xxx c、a 双人双平行汽水xxx xxx c、b 双人双平行除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对照组，对照组由标准菌株大肠埃希氏菌（CICC103），金黄色葡萄球菌（CICC10384），枯草芽孢杆菌（CICC10275）混合接种培养而成，与样品实验程序同时进行。

三、验证设备和试剂

1.冰箱：BCD-212DG/A XXX仪器公司

2.生化培养箱：LRH-70 XXX仪器公司器

3.电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01）XXX仪器公司

4.无菌均质器：SCIENTZ-04 XXX仪器公司

5.恒温振荡器：SHA-A XXX仪器公司厂

6.菌落计数仪：Scan-500 XXX仪器公司

7.天平:JE-502 XXX仪器公司

8.超净工作台:SW-CJ-2FD XXX仪器公司

培养基和试剂：

1.平板计数琼脂培养基XXX有限公司

2.无菌生理盐水见附录A配制方法1.依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌

锅的灭菌效果进行检测评价并记录；

2.依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜、超净台进行

清洁消毒灭菌并记录；

3.依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室、

生物安全柜及超净台进行沉降菌检测并记录；

4.无菌室检验：详见《xxx疾病预防控制中心检验报告书xxx》；

五、验证步骤

1.样品的稀释

1.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL生理盐水的无菌均质袋中，

用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。

1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形

瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

1.3用1 mL移液吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL生理盐

水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管使其混合

均匀，制成1:100的样品匀液。

1.4按1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。

1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体

样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，

每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内

作空白对照，分别吸取1 mL混合标准菌液加入两个无菌平皿内作阳性对照。

1.6及时将15 mL～20 mL冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基倾注平皿并混合均匀。

2.培养

待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。

3.菌落计数

严格按照GB47.2-2010的计数原则和方法进行计数，并按照该标准进行结果处理。

实验结果如下表所示，详细实验结果见《食品中菌落总数检验原始记录表》。

表1：菌落总数实验结果统计表

经过该方法的双人双平行论证，从表1可看出，糕点-A、蜂蜜-B、汽水-C的平行误差和两组人员误差无明显差异，符合要求（明显误差判定限为1个数量级）。因此可认为GB47.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数的测定》在检测糕点、蜂蜜、汽水的实验中准确可靠，可在本实验室适用，以此类推菌落总数参数的其余类型检品均可适用本标准进行检验。