实验二食用菌原种的制作与培养

1、实验的目的和要求

学会原种培养基的配制方法，掌握原种的接种技术，了解食用菌原种与制作的工艺流程和制作的基本技能。

2、实验内容或原理

（1）原种培养基配制

工艺流程：培养基配料    装瓶（或装袋）    灭菌    冷却     接种

（2）掌握原种与栽培种的接种操作技术

     接种箱消毒     器械消毒     无菌接种      菌丝培养 

3、仪器或试剂等

仪器：接种箱、高压灭菌锅、750毫升广口瓶、酒精灯、接种勾等。

试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉、棉花等。

4、实验步骤

  配方一：麦粒（玉米等）1000克，石膏粉13克，碳酸钙4克。

a．称量  根据用量和灭菌锅的容量计算后称量，算出各种原料的用量，然后称量按比例称料。用500毫升的菌种瓶时，一般每瓶用小麦（干）0.2千克左右。

b．漂洗  用清水将麦粒漂洗2－3遍，除去灰尘、麦糠等杂物，同时也减少培养基中杂菌的基数。 

c．浸泡 在制种的前一天下午，用1％的石灰水浸泡小麦，夏天一般浸泡10－12小时，春秋季气温低时浸泡15－20小时。

d．煮沸  小麦捞出后在煮麦锅内煮沸，水沸腾后再煮20分钟左右，当麦粒达到“无白心，不开花”的标准后及时捞出，沥干多余水分。煮麦时加水不可偏少，麦粒成熟度是关系麦粒菌种制作成败的关键。

e．晾晒  将麦粒摊开，晾去表面水分，麦粒不沾手时及时收起。

f．加辅料  把石膏、碳酸钙按比例加入，搅拌均匀。

g．装瓶、加棉塞。麦粒装至瓶肩即可，棉塞大小、松紧度要适宜。

h．灭菌。采用高压灭菌，将菌种放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热,当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时(灭菌所需压强)开始计时,继续维持该压强30min。，不过，由于麦粒培养基中杂菌基数大，培养基体积大，热不易穿透，控温灭菌时间应保持在1.5kg、2－2.5小时，才能保证灭菌彻底。灭菌是否彻底是影响制种成功率的关键。

（本次采用全自动高压灭菌锅：121℃，30-60min）

i．冷却。灭菌结束后，自然冷却，当压力回复到0时，打开锅盖，利用锅体余热烘干棉塞，当培养基温度降低到50℃左右时取出，放到干净的地方冷却到常温后才能接种。如果温度很高时就取出培养基，瓶内麦粒上会有大量的冷凝水，对菌丝生长不利。

j．、将冷却后的培养基移入接种室接种。（后略） 

k．接种  将灭菌后原种培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后,再开始进入接种室内进行接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。无菌条件下挑取母种培养基一小块，置于原种培养基孔边，随即按原样封口。

l.菌丝培养  接种后的原种，置于25℃的培养室培养。3-5天后菌丝即可恢复生长。5-7天菌丝开始伸入培养基内。当菌丝长满瓶后，即可直接分移栽培种， 

m．观察记载

观察原种菌丝的表面形态特征。

5、实验的报告要求

要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。

6．作业：总结制作原种过程中应掌握哪些基本技能？

实验准备：

实验分组：全班分三大组，每大组分3小组。

实验准备：安排写板书1人，

实验任务：每瓶0.2-0.3斤料，每小组按配方称料、配料，每组制作原种5瓶。

准备材料：1人，购小麦种子12斤、石膏5斤。

准备用具：1人，原种瓶或袋。

接种用具：接种铲、锄。

配方二了解：

配方二：棉籽壳78%，麦麸或米糠20%，过磷酸钙1%，蔗糖1%。

   a．称料：先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量按比例称料。

b.拌料：混合，加水拌料。混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在一起，过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中。拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。

c.含水量的测定  拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为62%-%。

d.装瓶  将拌好的培养料装入原种瓶或塑料袋，边装边压实（但不得过紧），一直装到瓶肩处为宜。

e.擦瓶  将瓶口和瓶外粘的培养料擦掉，以免接种后污染杂菌。

f.封口  用棉塞塞住瓶口或用透气膜包住瓶口，再包一层防潮纸（或牛皮纸），用线绳将瓶口扎好，准备灭菌。

g.灭菌  灭菌方法同母种的灭菌方法，压强为1.4-1.5Kg/cm2,1.5-2.0h

h.接种  挑取母种培养基一小块，置于原种培养基孔边，随即按原样封口。

i.菌丝培养  接种后的原种，置于25℃的培养室培养。3-5天后菌丝即可恢复生长。5-7天菌丝开始伸入培养基内。当菌丝长满瓶后，即可直接分接栽培种。

j、观察记载

观察原种菌丝的表面形态特征。