实验五 水中细菌总数的测定

实验目的

l.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

2.了解水源水的平板菌落计数的原则。

基本原理

    本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。

实验器材

    l.培养基   肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。

    2.仪器或其他用具   灭菌三角烧瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管等。

操作步骤

    l.自来水水样的采取：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

    2.自来水细菌总数测定

①用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。

②分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。

③另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。

④培养基凝固后，倒置于37℃ 温箱中，培养24h，进行菌落计数。

⑤两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数。

实验报告

1.自来水

实验六   酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

目的要求

1、观察酵母菌的形态及出芽方式，学会区分酵母菌死活细胞的实验方法。

2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

实验原理

酵母菌是不运动的单细胞真核型微生物，其大小通常比细菌大。大多数酵母菌以出芽的方式进行无性繁殖，有的繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性的燃料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。

实验器材

1、菌种 酿酒酵母培养约2d的麦芽汁（或豆芽汁）斜面培养物。

2、溶液或试剂 0.1％碱性美兰蓝染色液。

3、仪器及其它用具  显微镜、载玻片、盖玻片等。

操作步骤

1、在载玻片加一滴0.1％碱性美兰蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放载染液中，混合均匀。

染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。

2、用镊子取一块盖玻片，先将一端与菌液接触，然后慢慢把盖玻片放下使其盖在菌液上。

盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。

3、将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

4、染色约半个小时后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。

实验报告

1、结果

绘图说明所观察到的酵母菌的形态特征。怎样鉴别死活细胞？分析出现这种结果的原因？

2、思考题

比较酵母菌和细菌的形态、构造和繁殖方式？