1. 样品制备:将待检测的样品进行适当的处理,如溶解、过滤、稀释等,以确保样品能够顺利进入色谱柱并获得准确的检测结果。
2. 色谱柱选择:通常会选择适合分离尿素的色谱柱,如反相色谱柱。
3. 流动相配制:常用的流动相可能包括水、甲醇、乙腈等有机溶剂的组合,并添加适当的缓冲盐来调节 pH 值和离子强度,以优化分离效果。
4. 检测波长确定:通过对尿素的光谱特性进行分析,确定合适的检测波长,一般在紫外或可见光区域。
5. 仪器参数设置:设定合适的流速、柱温、进样量等参数。
6. 标准曲线绘制:使用已知浓度的尿素标准溶液进行检测,绘制浓度与峰面积的标准曲线。
7. 样品检测:将处理好的样品注入 HPLC 系统进行检测,根据峰面积对照标准曲线计算样品中尿素的含量。
在实际操作中,具体的检测条件和方法可能会根据仪器型号、样品特性等因素进行适当的调整和优化。