DNA和蛋白银染步骤(独门绝技--有图)

一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)

1、固定液：50ml乙醇

2、前处理液（敏化液）：5ml HNO3

3、染色液：0.5g 银（避光配制）

4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml

5、终止液：50ml 冰醋酸

二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）

1、准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中在摇床上轻摇1min；

2、凝胶固定：倒掉盒中的水，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动10min；

3、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次30S；

4、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化6min；

5、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗2次每次10S；

6、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；

7、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗1次10S；

8、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；

9、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇2-3min；

10、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次1min。

三、变性聚丙酰胺凝胶的配制（两块、使用1.0BioRad胶板）

1.2%的凝胶可以跑微卫星，和基因组DNA

1、尿素：7.2g

2、30%聚丙酰胺，4.68ml

3、10×TBE，1.5ml (Tris碱108g；硼酸55g；EDTA 40ml 0.5mol/L,Ph=8.0；加水至1L)

4、30%AP，35ul

5、TEMED,4ul

四、下图：左为果蝇正常基因组DNA与损伤后基因组DNA；右为果蝇微卫星电泳

12h Treatment24h Treatment

M

CT 0 5 10 200 5 10 20

Protein银染

一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)

1、固定液：200ml甲醇，50ml冰醋酸

2、前处理液（敏化液）：150ml 乙醇，34g醋酸钠，1g硫代硫酸钠（使用前加入）

3、染色液：1.25g 银（避光配制）4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml

5终止液：2g甘氨酸

二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）

1、凝胶固定：准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动30min；

2、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次1min；

3、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化30min；

4、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗3次每次5min；

5、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；

6、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗2次每次5min；

7、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；

8、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇10min；

9、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次5min。