荧光分光光度计操作规程

1、开机顺序

（1）开启计算机。（按图中圆圈按钮）

（2）开启仪器主机电源。按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。（按下图中圆圈按钮）

（3）观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示黄绿色。Xe LAMP灯先亮，RUN灯后亮。

2、打开运行软件。

（1）双击桌面图标 （FL Solution 2.1 for F-7000）。主机自行初始化，扫描界面自动进入。

（2）初始化结束后，须预热15-20分钟(若要进行定量分析，须预热30分钟以上，按界面提示选择操作方式。

3.点击右上角Method,进行方法设置。

若要预扫描，可选择3-D scan（如下图）.设置好方法后（见下图），再点击右上角Pre Scan（如上图），

在Instrument Monitor菜单(见下图)的Data mode中选择Fluorescence, 在EX Start WL中输入激发波长200，EX End WL中输入激发波长500,在EM Start WL中输入发射波长210(有利于保护检测器)，在EM End WL中输入700(nm)，为节约扫描时间，扫描速度Scan speed可设置为30000。点击update,可知扫描需要多少时间。EX slit和EM slit一般选择5.0（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT Voltage （电压）中可选择700（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT Voltage 0-1000v前面的方框打勾后，可在上面的PMT Voltage中随意填写电压值。在Response 中选择Auto。

在Processing菜单中(见下图)的 Y Axis中的Max中填5000或10000，Min中填0。Contour中填写10，在open data processing window after data acquisitior前打勾。

再点击右上角Pre Scan（如下图），进行预扫描。

然后选择图谱中颜色最浓、最深、纵坐标最高的漩涡中心点，点击这个中心点，即可出现最佳激发波长、最佳发射波长及强度。

若中心点太密，看不出（如上图），可点击右键，选择scale，将contour由10.00改为100。再点击确定。

即可出现下图情况：

点击纵坐标最高的漩涡中心，如上图和下图，在左上角即可出现最佳激发波长（EX）、最佳发射波长(EM)及强度。

待预扫描结束后，可再次点击Method, 进行重新设置，在General菜单的Measurement中选择Wavelength scan（如下图）； 

在Instrument Monitor菜单(见下图)的scan mode中选择Emission, Data中选择Fluorescence, 在EX WL中输入预扫描中得到的最佳激发波长，在EM Start WL中输入比最佳激发波长大10nm的数据(有利于保护检测器)，在EM End WL中输入700(nm)，Scan speed中选择240或1200，EX slit和EM slit一般选择5.0（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT Voltage （电压）中可选择700（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT Voltage 0-1000v前面的方框打勾后，可在上面的PMT Voltage中随意填写电压值。在Response 中选择Auto, 在Replicates中选择1，在Cycle time中填0。

在Processing菜单中(见下图)的 Y Axis中的Max中填1000或2000或10000（可根据预扫描结果的荧光强度值填写Y轴荧光强度的最大值），Min中填0。Contour中填写10，在open data processing window after data acquisitior前打勾。

4.点击右上角Sample ABC,进行数据存储模式及途径设置（见下图）。

5.点击上图右上角Measure,即可对样品进行测试，测试完后在图谱右上角点击report，再点击文件菜单“另存为”，可将图谱数据另存为excel格式。

6. 96微孔板的操作，先安装相关装置，安装后（见下图）图中画圆圈的支架突出部分要压住它边上按钮。

开机后在空白图谱上面可见MPR菜单(见下图)，点击该按钮。

出现下图情景 

点击Data save,可设置数据格式及存储路线（如下图）。

点击上图中的Exchange position，放微孔板的支架会跳出来，然后可放入装有样品的微孔板，左下角为A1位置（见下图）。

选择图中有样品的比色皿，如下图，点击Sample set,可出现黄色背景，若点击Reset,可取消设置，黄色背景消失。可选择某一个样品进行预扫描（设置方法同上面叙述过的方法一样），根据预扫描结果，再对方法进行设置（设置方法同上面叙述过的方法一样），对批量样品进行测试。

7、关机顺序（逆开机顺序实施操作）：

  （1）关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000。

  （2）关闭仪器主机电源。

  （3）关闭计算机。

注意事项

（1）注意开机顺序。步骤1-（2）若是未先开主机，则程序会抓取不到主机讯号。

（2）注意关机顺序。

（3）为延长仪器使用寿命，扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不宜选在高档。

（4）关机后必须半小时（等氙灯温度降下）方可重新开机。

F-7000荧光分光光度计使用操作步骤

1、开机：

（1）开启计算机。

（2）开启仪器主机电源。按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。

2、计算机进入Windows XP视窗后，打开运行软件（如图1）。

（1）双击桌面图标 （FL Solution 2.1 for F-7000）。主机自行初始化，扫描界面自动进入。

（2）初始化结束后，须预热15-20分钟，按界面提示选择操作方式。

图1   FL Solution 2.1扫描界面

3、测试模式的选择：波长扫描（wavelength scan）

（1）点击扫描界面右侧“Method”。

（2）在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelength scan”测量模式，如图2。

图2 Method--“General”选项的界面

（3）在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数，如图3。

图3  Method--- “Instrument”选项设置界面

主要参数选项包括：

1选择扫描模式“Scan Mode”：Emission/Excitation/Synchronous（发射光谱、激发光谱和同步荧光）。

2选择数据模式“Data Mode”：Fluorescence/Phosphprescence/Luminescence(荧光测量、磷光测量、化学发光)。

3设定波长扫描范围。

A、扫描荧光激发光谱(Excitation)：需设定激发光的起始/终止波长（EX Start/End WL）和荧光发射波长（EM WL）;

B、扫描荧光发射光谱(Emission)：需设定发射光的起始/终止波长（EM Start/End WL）和荧光激发波长（EX WL）;

C、扫描同步荧光（Synchronous）：需设定激发光的起始/终止波长（EX Start/End WL）和荧光发射波长（EM WL）。

！！Attention：激发光终止与起始波长差不小于10nm。

4选择扫描速度“Scan Speed”（通常选240nm/min）。

5选择激发/发射狭缝（EX/EM Slit）。

6选择光电倍增管负高压“PMT Voltage”（一般选700V）。

7选择仪器响应时间“Response”（一般选Auto）。

8选择光闸控制“□Shutter Control”打√，以使仪器在光谱扫描时自动开启，而其他时间关闭。

9选择“Report”设定输出数据信息、仪器采集数据的步长（通常选0.2nm）及输出数据的起始和终止波长（Data Start/End）。

！！Attention：Data Start/End需与“Instrument”选项中设置一致，否则所得到的数据点会逐渐减少，而无法作图。

（4）参数设置好后，点击“确定”。

4、设置文件存储路径

（1）点击扫描界面右侧“Sample”，如图4。

图4  Sample选项的界面

（2）样品命名“Sample name”。

（3）选中“□Auto File”， 打√。可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据。

（4）参数设置好后，点击“OK”。

5、扫描测试

（1）打开盖子，放入待测样品后，盖上盖子。（请勿用力）。

（2）点击扫描界面右侧“Measure”（或快捷键F4），窗口在线出现扫描谱图。

6、数据处理

（1）选中自动弹出的数据窗口，如图5。

（2）选择“Trace”，进行读数并寻峰等操作。

图5  扫描谱图窗口

（3）上传数据。

3、关机顺序（逆开机顺序实施操作）：

  （1）关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000，弹出窗口，如图6。

  （2）选中“○Close the lamp，then close the monitor windows？”，打“⊙”。

（3）点击“Yes”。窗口自动关闭。同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP指示灯暗下来，而RUN指示灯仍显示绿色。

图6  关闭运行软件

（2）约十分钟后，关闭仪器主机电源，即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。（目的是仅让风扇工作，使Xe灯室散热）。

  （3）关闭计算机。