实验四 葡萄糖的测定

一．实验目的

1. 掌握葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定血糖；

2. 学习使用分光光度计；

3. 学习微量移液器的使用

二．实验原理

葡萄糖氧化酶(GOD)

葡萄糖+O2                    葡萄糖酸+ H2O2

过氧化物酶(POD)

H2O2 + 酚 +  4-氨基安替比林           醌+ H2O+O2

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比，在505nm有吸收峰

三．试剂

1. 试剂1：

      磷酸盐缓冲液        70mmol/L

      酚                  10.6mmol/L   pH 7.0

2. 试 剂2：

      磷酸盐缓冲液       70mmol/L

      4-氨基安替比林     0.8mmol/L

      葡萄糖氧化酶        >10U/ml

      过氧化物酶          > 1U/ml     pH 7.0

3. 标准葡萄糖溶液     5.55mmol/L

4. 兔子血清

四．操作步骤

1.配制工作液：取等量试剂1和试剂2混合均匀

2.按下表加入有关试剂

4. 实验结果计算：

葡萄糖（mmol/L）

=[样品管吸光度（A样）/标准管的吸光度（A标）]×标准液浓度

五．实验数据及结果

1.数据记录

葡萄糖=0.4/0.237*5.55mmol/L=11.45mmol/L=206.35mg/dl

思考题

哪些方法可增加血糖测定的准确性？

答：1.增加测定的重复次数

    2.加样的准确，如在使用微量移液器量取液体时要称量准确，向试管中加液的顺序要正确

3.可根据所得数据绘制标准曲线，并通过标准曲线求出浓度

4.在使用分光光度计时注意操作准确

以上的这些方法都可以增加血糖测量的准确性