生化实验报告 胰蛋白酶活力测定

一、实验原理

1、福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钼蓝）。

2、蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。

二、实验仪器

1、试管

2、7220分光光度计

3、恒温水浴锅

三、实验试剂

1、福林试剂B：见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分(冰箱中)

2、0.55mol/L碳酸钠溶液：58.3g无水碳酸钠溶于蒸馏水，稀释并定容至1000ml

3、10%三氯乙酸溶液

4、0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)：

5、0.5% 酪素溶液：称取0.5g酪素，以0.5mol/L氢氧化钠1ml湿润，再加少量0. 2mol/L磷酸缓冲液稀释。在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml，冷藏在(冰箱)里。

6、500ug/L酪氨酸溶液

7、胰蛋白酶溶液(冰箱中)

四、实验步骤

1、标准曲线的制作：按下表加入试剂：

以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线。

2、样品测定：取干燥的试管2支，按下表加入试剂

样品中含酶活力单位=A/15 ╳F

A—样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数

F—酶液稀释倍数

五、实验结果

由上可知，样品的吸光度y=0.993，则x=0.8μg，即A=0.8μg

故根据公式样品中含酶活力单位=A/15 ╳F

A—样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数

F—酶液稀释倍数

胰蛋白酶活力为：0.8 /15 ╳13=0.69

六、实验分析

1.  测定胰蛋白酶活力的原理?

答：蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。

2.  胰蛋白酶的最适PH值多少? PH值对胰蛋白酶稳定性有何影响?

答：胰蛋白酶的最适PH值为8.1。胰蛋白酶的活性在一定的PH值范围内随着PH值的升高而升高，超过最适的PH值时酶活性降低。