用台盼蓝拒染法计数活细胞

1. 彻底混合细胞悬液，取100礚样本至一支试管中.

2. 台盼蓝染色有两种方法。一是首先用细胞培养液稀释细胞样本，然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）。或者直接用台盼蓝溶液稀释样本。

例如：1/40稀释样本

加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释)，混合，然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。

3. 涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。

4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。

5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室。

6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。

7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室。不要过满或不足。

8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞。分别死细胞和活细胞。死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏，细胞吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。 

9. 活细胞计数按以下方法计算：

每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL

10.活细胞百分比计算方法如下：

活细胞数÷(活细胞数+死细胞数)x100 =活细胞百分比