1ml DEPC
根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。
20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris
1000ml DEPC水
用HCL调ph至7.5，高压备用。
3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA
1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)
将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。
30.2% 甘油/0.1M tris
20ml 甘油
980ml 0.1Mtris
4 20XSSC Nacl 175.3g
（ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g
DEPC水 1000ml
分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用
5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g
(ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml
6 50X Denhaldt′s 液
聚蔗糖（Ficoll 400） 0.2g
聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g
牛血清蛋白（BSA） 0.2g
DEPC 水 20ml
7 预杂交 buffer
Deinoized formanmid 5ml
20X SSC 1.5ml
1M HEPES 0.5ml
50X Denhanldt′s液 1ml
龟精DNA 0.6ml(4ug/ul)
DEPC水 1.4ml
龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。
8Washing buffer
(ph7.5) maleic acid 5.8g
NACL 4.4g
Tween（吐温） 1.5ml
定容至500ml溶质浓度最后分别为 0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween
9Maleic acid buffer
(ph7.5) Maleic acid 5.8g
Nacl 4.4g
定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl
10 Detection buffer
(ph 9.5) 0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)
0.1M Nacl 2.9g
定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl.
11 blocking reagent（封闭液）(2-8℃保存)
(bottle 5) 5g
maleic acid buffer 50ml
12 blocking solution
封闭液（新鲜配制） 1ml
Maleic acid buffer 10ml
13 抗体（AP）
10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再 稀释。
✧LB培养基
| 胰化蛋白胨 | 10g |
| 酵母提取物 | 5g |
| 氯化钠 | 10g |
| Amp（100ng/ml） | 1ml |
✧LB琼脂固体培养基
| LB | 500mL |
| 琼脂粉 | 7.5g |
✧100 mg/mL氨苄青霉素（Amp）
| Amp | 100mg |
| ddH2O | 1mL |
✧1M 30 mg/mL卡那霉素（kana）
| kana | 30mg |
| ddH2O | 1mL |
琼脂糖凝胶电泳所用试剂
✧50×TAE(电泳缓冲液)
Tris碱 242g
冰乙酸 57.1 mL
0.5M EDTA（pH 8.0） 100 mL
溶于终体积1000 mL去离子水中，使用时1：50稀释。
✧10×加样缓冲液
0.25% 溴酚兰
0.25% 二甲苯青
30% 甘油
保存于4℃。
✧10mg/mL EB 溶液
取溴化乙锭（EB）0.2g溶解于20mL去离子水中，混匀。4℃避光保存。使用时终浓度为0.5μg/mL。
✧1%琼脂糖凝胶
琼脂糖 1g
1×TAE 100 mL
微波炉加热至完全溶解，摇匀，当温度降至60℃时，即可铺制平板。
✓0.1mol CaCl2溶液：
1.1g无水氯化钙，溶于90ml三蒸水中，定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌置于灭菌试剂瓶中，4℃保
✓氨苄青霉素（Amp）选择性培养基
LB培养基中加入1.5%的琼脂（15g/L），高压灭菌20min，取出，在无菌条件下，冷却至50℃左右时（烧手但尚可忍受）加入抗生素或其他必需成分，如为氨苄青霉素（Amp）选择性培养基，则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50μg/ml的量加入，即每ml培养基加入1μl氨基苄。
✓氨苄贮存液
将氨苄青霉素钠溶于三蒸水，配成50mg/ml溶液，以0.22μm滤纸过滤，1ml一份分装，存于-20℃。
质粒的少量提取
【试剂及配制】
1．溶液Ⅰ
葡萄糖（C6H12O6·H2O） 1.982g
三蒸水 160ml
0.5mol EDTA pH8.0 4ml
1mol Tris-Cl pH8.0 5ml
以三蒸水定容至200ml，高压灭菌，4℃保存
0.5 mol EDTA pH8.0 的配制：
Na2EDTA·H2O 186.1g （如无水，则为175g）
三蒸水 700ml
边磁力搅拌边加入固体NaOH，缓慢少量加入，待充分溶解，pH接近8.0，用酸度计调节pH8.0 （HCl/NaOH）；
1mol Tris-Cl pH8.0 的配制：
Tris 碱 121g
三蒸水 800ml
充分搅拌，用浓盐酸将pH调节至8.0，酸度计测量；
2．溶液Ⅱ
配制50ml的量，现用现配。
10 mol NaOH 1ml
三蒸水 40ml
10% SDS 5ml
用三蒸水定容至50ml
10mol NaOH 的配制：
40g NaOH晶体加三蒸水至100ml；
10% SDS 的配制：
戴口罩，称10g SDS，溶于80ml三蒸水中，68℃助溶，加数滴1mol HCl，调pH7.2，定容至100ml；
1mol HCl 的配制：
于通风橱中，三蒸水91.4ml，浓盐酸8.6ml，混匀；
3．溶液Ⅲ
5mol 乙酸钾 60ml
冰乙酸 11.5ml
三蒸水 28.5ml
高压灭菌，4℃保存；
5mol 乙酸钾配制：200ml
乙酸钾 98.14g
三蒸水 160ml
搅拌溶解，定容至200ml;
4．3ml 乙酸钠（NaAc）pH5.2
配制：500ml
乙酸钠（CH3COONa·H2O） 201.1g
三蒸水 200ml
用冰乙酸调节pH为5.2，三蒸水定容至500ml，高压灭菌，4℃保存。
5．平衡酚
在粗酚中加入0.1% 8-巯基喹啉，然后倒入0.1mol Tris-Cl pH8.0，避光磁力搅拌4h，静置后移去水相，再加0.1mol Tris-Cl pH8.0，搅拌、去除水相，反复进行，直到水相pH>7.8时为止，装棕色瓶，4℃保存。
6．TE 缓冲液 pH8.0
配制最终使：10mmol Tris-Cl pH8.0
1mmol EDTA pH8.0
7．其它试剂：氯仿：乙戊醇（V/V=24：1）、无水乙醇、70%乙醇
✓2× SSC
先配制20× SSC贮存液，用时稀释。
NaCl 175g 3mol
枸椽酸三钠·2H2O 88g 0.3mol
三蒸水加至1000ml，用1mol HCl 调pH7.0
✓4× SSC/50%去离子甲酰胺（V/V）
去离子甲酰胺的配制：500ml 甲酰胺与25g Bio-Rad AG 501-X8(20～50目) 混合，室温避光搅拌4h，过滤，分装为50ml ，-20℃ 存放；
✓100× Denhardt液
聚蔗糖 10g
聚乙烯吡咯烷酮 10g
牛血清白蛋白 10g
消毒三蒸水定容至100ml
✓预杂交液
去离子甲酰胺 5ml
20× SSC 2.5ml
加温至50℃ ，加入硫酸葡聚糖 1g
聚合物溶解后，加入100× Denhardt 500μl
10%SDS 500μl
10mg/ml变性鲱鱼精子DNA 100μl
消毒三蒸水 400μl
充分混合；
✓杂交液
将标记好的探针用沸水浴10min，立即冰酒精冷轧，用预杂交液将探针稀释至0.5～5ng/μl 。
原位杂交缓冲液的配制：
3%柠檬酸：100ml蒸馏水中加柠檬酸（C6H8O7.H2O） 3g，PH2.0左右
2×SSC---1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠（C6H5O7Na3.2H2O，分子量294）8.8g
0.5×SSC---300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可（1：3）
0.2×SSC---270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可（1：9）
20%甘油---20ml甘油加80ml蒸馏水即可
0.5M TBS---1000ml蒸馏水加氯化钠30g，TRIS 1.2g 纯乙酸0.4-0.5ml,PH7.2-7.6
0.01M TBS(PH9.0-9.5)配法：1000ml蒸馏水中加NaCL9g, Tris 1.2g
免疫组化缓冲液的配制：
1 0.2M PB
①0.2M NaH2PO4：NaH2PO4.2H2O 31.2g（或NaH2PO4.H2O 27.6g） 加重蒸水1000ml②0.2M Na2HPO4：Na2HPO4.12H2O71.632g（或NaH2PO4.7H2O 53.6g或NaH2PO4.2H2O 35.6g） 加重蒸水1000ml
③0.2M PB：19ml①+81ml②混合即可，pH值约为7.4-7.5
2 0.01M PBS
NaCl8.5-9g, 0.2M PB 50ml,加重蒸水1000ml混匀即可
3 0.5M TBS
①0.5M Tris-HCl缓冲液:
Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g
1N HCl 约420ml
重蒸水 至1000ml
先用少量重蒸水300-500ml溶解Tris(三羟甲基氨基甲烷)，加入HCl后，用1N NaOH 或HCl将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml，此液为储备液，于4℃冰箱中保存，免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05M，用时取储备液稀释10倍即可。
主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液等
4 Tris缓冲生理盐水（TBS）
0.5M Tris-HCl缓冲液 100ml
NaCl 3.5-9g(0.15M)
重蒸水 至1000ml
先以重蒸水少许溶解NaCl，再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水1000ml，最终浓度为0.05M。
电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置
电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
100 mmol/L EDTA
水 242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）
200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水 54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18％聚蔗糖（400型）
0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF
水 300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
15％聚蔗糖（400型）
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF
15％聚蔗糖（400型）
水 2.5ml 1％溴酚蓝
2.5ml 1％二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
50％甘油
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
40％聚蔗糖
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝
0.2％二甲苯青FF
200 mmol/L EDTA
0.1％SDS
50％甘油
水 20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
100ul 10％ SDS
5ml
补足到10ml
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