实验四 硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验

实验四硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验

由长沙达尔锋生物科技有限公司整理

细胞生化功能的改变也可以间接地反映有关细胞的非特异免疫功能，本次实验进行中性粒细胞的硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验。

【文章介绍】

实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。

BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。

【实验原理】

细菌感染时给你正常的中性粒细胞能量消耗剧增，耗氧量增加，糖代谢活跃。有氧化还原反应，糖氧化过程中所脱的氢可被吞噬的或渗透到中性粒细胞胞质内的NBT染料接受，使淡黄色的NBT还原成蓝黑色的甲臢，以折光性强的点状或斑块状颗粒沉积于细胞内。镜下检查NBT阳性细胞数量，便可推知中性粒细胞的杀菌功能。

【实验用品】

1. NBT染液：取0.28gNBT加入100ml生理盐水，用超细玻璃滤器过滤，分装，4℃保存。

2. 0.77%沙黄O染液。

3. 肝素：用无菌生理盐水配制25U/ml肝素溶液。

4. 培养液：取0.5ml正常人血清加入0.3ml无菌生理盐水和0.6mlNBT染液。

5. 甲醇、无菌生理盐水等。

6.碘酒与酒精棉球、温箱、凹玻片、湿盒、注射器、吸管等。

【操作方法】

1. 取肝素抗凝外周静脉血0.1ml和培养液0.1ml加于凹玻片孔中混匀，置湿盒37℃20min，中间摇动一次，再置室温15min。

2. 取一滴混悬液于载玻片一端推成薄片，空气中快速干燥。

3. 甲醇固定1-2分钟。

4. 用0.77%沙黄O染液5min，水洗，干后油镜下检查。

【结果判断】

凡中性粒细胞胞质内含有斑点状或块状的甲臢颗粒沉积者为NBT阳性细胞，计数100～200个中性粒细胞，计数NBT阳性百分率。

【实验讨论】

1. 注意事项：①NBT染液应过滤，不要残留颗粒。②所用器皿应洁净，避免玻璃表面因素参加NBT的还原作用。③单核细胞还原NBT的能力很强，在计算NBT阳性细胞时应除外。

2. 方法评价：该实验简便、快速、便于重复，但特异性差，易出现假阳性和假阴性结果。

3. 临床意义：正常人参考值应在10% 以下；全身细菌感染病人NBT阳性细胞在10% 以上；病毒感染、无菌血症的局部感染或循环中无细菌产物（如内毒素）时，NBT值正常。慢性肉芽肿等吞噬细胞功能缺陷病无NBT阳性细胞，故可作为诊断该病的指标。