土壤铵态氮的测定

一、方法原理

    土壤铵态氮是土壤速效氮的重要组成部分，测定土壤NH4+-N 的方法主要有直接蒸馏法和浸提法两类，直接蒸馏法是在氧化镁的存在下直接蒸馏土壤，但此法在弱碱性蒸馏时仍可能使一些简单的有机氮微弱水解有NH3蒸出，易使结果偏高，同时该法操作复杂，不适合大批量分析。故在ASI法中采用氯化钾溶液提取土壤中的NH4+，提取液中的NH4+用靛酚蓝比色法，靛酚蓝比色法的灵敏度高，准确度也较高，适合于大批量样品的自动化分析。

    靛酚蓝比色法的基本原理是：土壤胶体上的NH4+被K+交换下来后，在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应，生成水溶性染料靛酚蓝，其深浅与溶液中的NH4+-N含量呈正比，线性范围为0.05～0.5mg/L之间。

二、试剂配制

1. NaOH溶液

将6.75g NaOH、0.75g EDTA二钠、1.25g 醋酸钠溶解于250ml水中，储存于250ml的容量瓶中。其中EDTA二钠作为金属离子的掩蔽剂，防止干扰。醋酸钠可增强颜色的稳定性。

2. 90%苯酚溶液

   将45g 苯酚溶解于50ml水中，注意苯酚易结块，可加热到60-70℃。

3. 碱性苯酚溶液

   测定当天，将36ml 90%苯酚溶液加到250ml 溶液中，摇匀。

4. 次氯酸钠溶液

   在400ml 的水中加入100ml 的NaClO溶液即可。

5. NH4+-N 标准溶液的配制(改进的地方)

  称取1.9105g NH4Cl（65℃烘4h），于500ml的容量瓶中，加水定容至刻度。该溶液的浓度为1000mg/L.

  用移液管吸取1ml于100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，此时容量瓶中溶液浓度为10mg/ml。再对该溶液分别取0，0.5，1，2，4，8ml于25ml的比色皿中，对应的浓度为0.0， 0.2，0.4,  0.8,  1.6，3.2 ppm(mg/L).

6. 浸提剂KCl溶液的配制

   称取74.5g KCl 溶解于500ml 水中，并加0.25g 聚丙烯酰胺至1000ml 容量瓶中。为1mol/L的溶液。

三、操作步骤

1. 样品的处理：用电子分析天平称取约为2.000g土样于锥形瓶中，加入40ml的KCl 溶液，放于振荡机上，振荡1h，将其过滤于50ml的容量瓶中，同时做空白试验。

2. 向有一定量的NH4+-N溶液中加入4ml碱性苯酚溶液，再用加液器加入10ml次氯酸钠溶液，用KCl滴至刻度线，摇匀，放置1h后，用分光光度计在630nm处比色，读取吸光度A。

3. 标准曲线的绘制：从浓度为0.0， 5.0， 10.0,  20.0,  40.0 ppm(ug/mL)的NH4+-N标准溶液中各取1.0ml 的溶液于25ml的比色管中，补加KCl溶液至10.0ml,然后按步骤2进行操作。

四、比色条件：

（1）碱性介质中反应，要求pH 10.5-11.7。

（2）显色和稳定时间：

     在室温下（20C）一般显色时间约为1小时，但要完全显色约需2-3小时，所以加入试剂后静置1小时即可比色。

      稳定时间为24小时，或24小时以上。为加速显色，也可在40C下加热，半小时即可显色。 

（3）干扰离子：

     因在碱性下显色，很多金属离子都有干扰，可用EDTA等螯合剂来掩蔽。

（4）测定范围：0.05-0.5mg/L；

（5）比色波长：625nm。

五、评价

优点：兰色稳定，比色液为真溶液，灵敏度高；准确度、精密度高；干扰离子可用EDTA掩蔽。

缺点：试剂不稳定，须冷藏，或当天配制；试剂有毒；显色时间稍长。