高效液相法测定尼莫地平片剂的含量-

摘要：目的：通过HPLC方法测定尼莫地平片剂的含量。方法:在色谱条件：选择Diamonsil C18 (200 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相：甲醇：水（68:32）,检测波长：238 nm, 进样量10μl，1.0mL/min流速,柱温为室温（25℃）条件下进行检测。结果：尼莫地平在11.07ug·mL-1 ～55.35ug·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为：Y =6921.2X-4311.6（r=0.9994）, 平均回收率为100.97%，RSD=1.5%。结论:采用高效液相色谱方法，可有效评估尼莫地平片剂中尼莫地平的含量,本法简单、灵敏度高、结果准确。

关键词：HPLC法; 尼莫地平;含量

尼莫地平(Nimodipine,NMD)为1, 4 双氢吡啶类钙通道拮抗剂,主要用于扩张脑血管及改善脑功能[1]，该药难溶于水，属脂溶性药物[2]。尼莫地平片剂测定多以紫外分光光度法为主，但因该法存在有关物质方面干扰，专属性较差[3]，本文由此出发考察高效液相法在其含量测定方面的应用效果。

1 材 料

1.1 仪器与试药

    岛津 LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；甲醇由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；尼莫地平对照品（中国药品生物制品检定所，批号：160112-160223）；尼莫地平片（牡丹江灵泰药业股份有限公司，国药准字H23022380，规格：20mg，批号为：160123、160321、160628）。

2 方法2.1高效液相色谱法

2.1.1  色谱条件

    波长选择：以流动相做空白对照，于200-400nm波长下对尼莫地平对照品溶液进行全波长扫描，结果显示在238nm处尼莫地平有最大吸收；以空气为对照，对流动相进行全波段扫描显示，其在238nm内基线平行，无干扰，故确定检测波长238nm。    

    色谱柱选择Agilent C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：甲醇：水（68∶32）,检测波长：238 nm, 进样量10μl，1.0 mL/min流速,柱温为室温（25℃）。

2.1.2  溶液的制备

2.1.2.1 供试品溶液的制备

    精密称取10片尼莫地平片，粉碎后混合均匀，精密称取上述供试品适量置于25ml容量瓶中，加入流动相适量稀释，摇匀至澄清后，稀释至对应刻度，取适量溶液经微孔滤膜（0.25um）过滤后，待用。

2.1.2.2 对照品溶液的制备

    采用十万分之一天平称取尼莫地平对照品11.07mg于100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

2.1.3   方法学验证

2.1.3.1 精密度试验

    在相同色谱条件下，取对照品重复进样6次，每次10ul，分别测定峰面积，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为 1.2%<2.0%，符合药典规定[4]，提示，本组方法精密度良好。

2.1.3.2 重复性试验

    选择同批号尼莫地平片6份，精密称定后，根据供试品“2.1.2.1”项操作制备溶液，采用“2.1.1项”下色谱条件，进样10ul，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD = 1.3% （小于2.0%），符合标准规定，提示本组方法具有较好的重复性。

2.1.3.3 稳定性试验

于2h、4h、8h、12h、24h取尼莫地平供试品溶液，采用相同色谱条件，进样10ul，根据测得的色谱峰面积，供试品组RSD为1.6%<2.0%，提示供试品溶液在24h内较为稳定。

2.1.3.4 回收率考察

    取“2.1.2.1”项供试液，保存至3个锥形瓶内，依次加尼莫地平对照品0.409mg、1.231mg和2.141mg，根据 “2.1.1”项色谱条件，进样10ul，对峰面积进行测定，得到回收率分别为：101.11%、100.84%和100.97%，平均100.97%，RSD 1.5%，与药典标准相符[4]。

2.1.4 线性关系考察

    采用移液管精密移取“2.1.2.2”的尼莫地平对照品溶液1.0ml、2.0ml、3. 0ml、4.0ml、5.0ml于10ml容量瓶中，使用流动相稀释至刻度，澄清后，采用微孔滤膜过滤，得到系列标准溶液。结合对应色谱条件，进样10ul，测定样品色谱峰面积，以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为：Y =6921.2X-4311.6（r=0.9994），提示，尼莫地平浓度在11.07ug·mL-1 ～55.35ug·mL-1范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.2 样品中尼莫地平含量测定

    结合“2.1.1项”下色谱条件，分别测定尼莫地平对照品溶液与3批尼莫地平片供试品溶液，供试品制备同“2.1.2.1”项操作，采用自身对照法对供试品内含有的尼莫地平含量进行测定。    

3  结果

    结果显示，高效液相法测定尼莫地平片中尼莫地平平均含量（与标识量比较）为（100.67±0.83）%，见下表1。

表１　尼莫地平片中尼莫地平含量测定结果（%）

    尼莫地平(C21H26N2O7)属二氢吡啶类钙拮抗剂，其在238nm和234nm的波长处均有吸收，但研究显示[5] 前者的灵敏度比后者高,故本文选择238nm作为检测波长。流动相选择方面，由于尼莫地平几乎不溶于水而溶于甲醇，美国药典33版[6]中显示其流动相为甲醇-四氢呋喃-水( 20:20:60)，考虑上述方法对四氢呋喃纯度及色谱柱要求较高，故本文尝试采用甲醇-水系统作为流动相备选，最终选择甲醇-水（68:32）作为流动相，此时尼莫地平与杂质分离度较高为4.1，且峰形较好，保留时间在7.5min左右。需注意的是尼莫地平对光敏感，故在测定过程中注意避光操作及保存。

通过本文结果我们可知，高效液相色谱法测定尼莫地平准确性高、精密度好、重现性好和相关性均符合相关要求，可通过色谱柱作用将尼莫地平及其有关物质有效分离，提高测定的专属性，值得推广使用。

参考文献

[1] 潘文, 李豫, 雷宇,等. 高效液相色谱法同时测定血清中尼莫地平和尼群地平浓度[J]. 中国药业, 2012, 21(2):25-26.

[2] 李帅, 李文莉, 廖彬,等. 高效液相色谱法测定尼莫地平固剂的溶出度[J]. 中南药学, 2012, 10(7):494-497.

[3] 郝桂明, 华莲, 唐素芳. HPLC 法测定尼莫地平软胶囊的含量及有关物质[J]. 药物分析杂志, 2012, 32(3): 4-467.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) [S].北京: 化学工业出版社,2010.附录 XIX 194.

[5] 郭利民, 李宪为. RP—HPLC法测定尼莫地平含量及含量均匀度[J]. 药学学报, 2002, 18(5):308-309.

[6] Rajani B, Mukkanti K. Optimized and validated RP-HPLC method for estimation of nimodipine in tablet dosage form[J]. Int. J. Res. Pharm. Chem, 2014, 4: 105-109.