纯化水的微生物限度检查方法验证

——纯化水的微生物限度检查方法验证

验证方案制定人：            部门：         日期：           

验证方案审核人：            部门：         日期：           

验证方案批准人：            部门：         日期：           

1验证目的：当建立纯化水的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌和酵母菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于纯化水的细菌、霉菌和酵母菌检查。

2验证方案：

照《中国药典》2005版二部附录Ⅺ J 方法。

2.1仪器与试药

2.1.2仪器：STV3无菌检查薄膜过滤器（浙江宁海白石药检仪器厂），微孔滤膜（孔径0.45um,直径50mm）。

2.1.3试药：

2.1.4培养基：营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基。

来源：北京三药科技开发公司生产  中国药品生物制品检定所监制

2.1.5试液：生理盐水，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

（均按照《中国药典》2005版二部附录Ⅺ H、J要求配制）

2.1.6对照菌株：大肠埃希菌[CMCC(B) 44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501]、白色念珠菌[CMCC(F) 98 001]、黑曲霉 [CMCC(F) 98 003]。

来源：广州药物研究中心

2.2对照菌液的制备：

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面新鲜培养物各1环分别接种于15ml 营养肉汤培养基内，于30～35℃培养18～24小时后，稀释至1：105～1：107，取1ml注入平皿中，注入约45℃的营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置30～35℃培养48h，进行活菌计数。取白色念珠菌的玫瑰红钠琼脂斜面新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内，于25～28℃培养24～48小时后稀释至1：105～1：106，取1ml注入平皿中，注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置25～28℃培养72h，进行活菌计数。取黑曲霉的玫瑰红钠琼脂新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内斜面中，于25～28℃培养5～7天后，用3～5ml0.9%的无菌氯化钠溶液洗脱。然后，用管口带有无菌薄棉花的无菌吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%的无菌氯化钠溶液稀释至1：105～1：106，取1ml注入平皿中，注入约45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置25～28℃培养72h，进行活菌计数。

2.3试验过程：

2.3.1供试液的制备：取原液作为供试液。 

2.3.2细菌、霉菌及酵母菌计数：

2.3.3试验组：  取供试液1ml直接过滤，取适宜稀释级试验菌1ml（含菌量为50～100cfu）加入到50mlpH7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液中，过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上，每株试验菌制备1个平皿，按薄膜过滤法测定其菌落数。

2.3.4供试品对照组：  取供试液1ml，直接过滤，用50mlpH7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液分两次冲洗，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上，每种培养基制备一张滤膜。

2.3.5稀释剂对照组：  以稀释剂代替供试品同试验组做法测定其菌数。

2.3.6菌液组：  见对照菌液的制备。

3验证数据：

样品名称：                   取 样 点：                试验用量：              

试 验 人：                   试验日期：                报告日期：              

         ×100%

4数据分析：

5结论及评价：

6审批结论：

本方案适合于              的微生物限度检查法的验证，               的微生物限度检查使用本方案提供的方法。

结论批准人：            部门：         日期：