火腿肠中亚盐测定的实验报告

XX（ 2）班 第 1 组 XXX XX 号

组员： XXX，XXX

一．实验目的：

①能熟练掌握使用 722 型分光光度计的用法 ②会根据测得的数据绘制标准曲线， 并依据标准曲线计算样品中的硝 酸盐的含量

二、实验原理

亚盐采用盐酸萘乙二胺法测定，盐采用镉柱还原法测 定。样品经沉淀蛋白质、去除脂肪后，在弱酸性条件下亚盐与对 氨基苯磺酸重氮化后，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂（盐酸萘 乙二胺）偶合形成紫红色染料， 染料的颜色深浅与亚盐含量成正 比，其最大吸收波长为538nm测定其吸光度后，可与标准比较定量。

三、仪器、设备

小型绞肉机或组织捣碎机、 天平、722型分光光度计， 250ml 容量 瓶， 25ml 比色管， 50ml 烧杯

四、实验材料、试剂

样品材料：双汇鸡肉味火腿肠

试剂：

1、    亚铁溶液

称取 106.0g 亚铁，用水溶解，并稀释至 1000ml。

2、    乙酸锌溶液

称取 220.0g 乙酸锌，先加 30ml 冰醋酸溶解，用水稀释至 1000ml。

3、    饱和硼砂溶液

称取5.0g硼砂钠溶于100ml热水中，冷却后备用。

4、 0.4%对氨基苯磺酸溶液

称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100ml20%的盐酸中，避光保存。

5、 0.2%盐酸萘乙二胺溶液

称取0.2g盐酸萘乙二胺，以水定容至100ml水中，避光保存。

6、    亚钠标准溶液

精密称取 0.1000g 事先于硅胶干燥器中干燥 24h 的基准亚 钠，用重蒸馏水溶解， 移入 500ml 容量瓶中稀释至刻度线。 此溶 液每毫升相当于 200ug 亚钠。

7、    亚钠标准使用液

5ug/ml，临时用亚钠标准溶液配制。

五、样品预处理

1、 5g （精确至0.01g）制成均浆的试样（如制备过程中加水， 应按加水量折算），至于50ml烧杯中，加12.5ml饱和硼砂溶液， 搅拌均匀，以 70 度左右的水约 150ml 将试样洗入 250ml 容量瓶 中，于沸水浴加热 1 5 min ，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

（可先打浆，再称匀浆的样品）

2、 5ml 亚铁溶液，摇匀，放置 30min，

去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液 30ml，滤液备用。

六、检测步骤

1、吸取15ml样品处理液与25ml比色管中

2、    吸取 0.00ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml、1.50ml、

2.00ml、2.50ml亚钠标准使用液（相当于 0.0ug、1.0ug、2.0ug、

3.0ug、4.0ug、5.0ug、7.5ug、10.0ug、12.5ug 亚钠）分别置于 25ml 比色管中。

3、 2ml0.4%对氨基苯磺酸溶液混匀，静置

3~5m in。

4、 1ml0.2%盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min。

5、 2cm比色杯，以零管调节零点，于波长 538nm处测吸光度，绘 制标准曲线比较定量，同时作试剂空白。

七、数据记录表

y=0.021

y=0.0312x

代入公式即 C=0.0312X 0.021 =6.552X 10-4ug/ml

九，注意事项

1、实验中使用重蒸馏水可以减少试验误差

2、亚铁和乙酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂，是利用产生的亚铁 氰化锌与蛋白质共沉淀。

3、硫酸锌溶液（30%）也可以作为蛋白质沉淀剂使用

6、    当盐酸含量过高时，过量的亚盐可以使偶氮化合物氧化，生 成黄色，而使红色消失，这是应将样品处理液稀释后再做，最好是样 品的吸光度落在标准曲线的吸光度之内。

7、显色的PH以1.9~3.0为好。显色后的稳定性与室温有关。在 10 摄氏度时放置24h,吸光度值降低2%~3%; 20摄氏度时放置2h,吸 光度值开始下降；30摄氏度显色1h颜色开始变浅；40摄氏度的温度 条件下，显 45min 后吸光度值即迅速下降; 温度降低其显色时间也会 推迟。一般认为显色温度 15~30 摄氏度，在 20~30min 内比色为宜。 十、参考文献

[1] 中华人民共和国国标 .GB/T5009.33 食品中亚盐和

盐的测定 ＞第二法分光光度法。

十一、组员分工

陈 XX ：实验方案制作、样品的预处理、结果记录与计算

杨 XX ：实验方案制作、测定步骤、结果记录与计算

李 XX ：实验方案制作、所需试剂的配制、结果记录与计算