全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响

表２总ＲＮＡ一８０℃保存１周前后浓度和Ａ２６０／２８０值结果

三、ＲＮＡ提取液一８０℃保存时间的影响

７３例总ＲＮＡ样本在一８０℃保存１周前后的测定数据的配对ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ—ｔｅｓｔ结果（表２），提示总ＲＮＡ标本在一８０℃保存１周后由于冻融而略有降解。

图１总ＲＮＡ样本的琼脂糖凝胶电泳结果

组别：Ａ一新鲜全血，Ｂ一冻融１次全血，Ｃ一冻融２次全血

讨论

组问ＡＮＯＶＡ方差分析结果提示．使用新鲜全血进行总ＲＮＡ提取效果最佳：由于细胞内源的ＲＮａｓｅ在细胞破坏时才会释放并完全发挥作用１５１．故４℃下保存１周内的未溶血标本也可用。由于一８０℃保存３个月的标本中获取的ＲＮＡ浓度要远远高于一２０ｃｃ保存２个月的标本ｆ表１），所以当全血标本保存需超过２个月时，一８０。Ｃ条件更佳。一８０℃保存４个月的标本和一２０℃保存２个月的标本中的总ＲＮＡ的浓度已无显著性差异ｆ表１１。尽管低温可以抑制酶的活性．但即使在－２００Ｃ甚至一８０℃中．ＲＮａｓｅ还可以缓慢发挥功能。所以．如果不能在新鲜血标本获取１周内完成ＲＮＡ的提取．无论全血标本保存时间长短．都应保存在一８０℃，但即使保存在一８０℃，需要进行ＲＮＡ提取的全血标本保存时间最好不要超过４个月。

紫外吸光值Ａ２６０／２８０比值代表了总ＲＮＡ的纯度１６１．其范嗣在１．８～２．０时，表示ＲＮＡ的纯度较好。从全血标本中获取的总ＲＮＡ标本纯度相对较低．本研究中８８．８３％的实验样本Ａ２６０，２８０比值＜１．８．其原因为：①总ＲＮＡ直接溶于水，低离子浓度可增加Ａ２８０ｎｍ吸光值同，致Ａ２６０／２８０值下降。②红细胞裂解过程中，红细胞内的蛋白会影响总ＲＮＡ纯化，导致Ａ２８０ｎｍ值的升高网。文献报道，ＮＨ４Ｃｌ裂解法在分离淋巴细胞过程中有去除红细胞的作用１９１．提示在总ＲＮＡ提取中．可对标本进行红细胞二次裂解处理。从而减少红细胞碎片的量。

本研究选用变性琼脂糖凝胶电泳判断ＲＮＡ完整性．此法快速、操作简便。在总ＲＮＡ中，２８ｓ和１８ｓｒＲＮＡ片断的比值代表了ＲＮＡ的完整性ＩｌＯｌ。２８ｓ和１８ｓｒＲＮＡ片断的过多降解．会造成下游研究应用的不准确。结果表明．尽管冻融会造成ＲＮＡ完整性有所下降．但全血标本冻融２次不至于对ＲＮＡ的完整性产生巨大影响。

已提取的总ＲＮＡ在一８０℃下保存ｌ周再测定结果显示，总ＲＮＡ浓度有所下降。所以逆转录过程如不能在总ＲＮＡ提取、定量后立即进行时，建议后续进行逆转录操作前．重新对一８０℃保存的总ＲＮＡ冻融标本进行再定量测定。

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ｄｅｔｅｒｍｉ－

全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响

作者：穆龙龙， 赵志英， 朱立， MU Long-long， ZHAO Zhi-ying， ZHU Li

作者单位：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院核医学科,100730

刊名：

北京医学

英文刊名：BEIJING MEDICAL JOURNAL

年，卷(期)：2010,32(10)

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引用本文格式：穆龙龙.赵志英.朱立.MU Long-long.ZHAO Zhi-ying.ZHU Li全血标本保存条件对人总RNA提取效率的影响[期刊论文]-北京医学 2010(10)