用不同方法提取虎杖中白藜芦醇的比较 (1)

生 物 质 化 学 工 程B iomass Che m ical Eng i n eering

V o.l 41N o .2M a r .2007

用不同方法提取虎杖中白藜芦醇的比较

收稿日期:2006-08-20

基金项目:湖南省基金项目([2004]951)

作者简介:谢磊(1982-),男,湖南郴州人,硕士,研究方向:植物功能成分纯化与应用 *

通讯作者:李志光,男,教授,博士生导师;E -m ai:l a -08888@163.co m 。

谢磊,李志光*

,周军,黄琼

(湖南农业大学理学院,湖南长沙410128)

摘 要:以虎杖为原料用乙醇浸提法、碱提酸沉法、超声波萃取法、CO 2超临界萃取法4种方法提取白藜芦醇,采用高效液相色谱法检验虎杖中白藜芦醇含量。以白藜芦醇收率为考察标准,进行提取方法的比较。综合比较分析得出超声波萃取法是以上4种方法中最好的。

关键词:虎杖;白藜芦醇;提取方法;高效液相色谱

中图分类号:TQ91 文献标识码:A 文章编号:1673-5854(2007)02-0028-03

Co mpari son of D ifferentM et hods f or Resveratrol

Extracti on fro m Polygonu m c us p i dat u m

X I E Le,i LI Zh-i guang ,ZHOU Jun ,HUANG Q i o ng

(Co llege o f Sc ience Instit u te ,H unan A g ricu lt ura lU n i versity ,Chang sha 410128,Ch i na)

Abstrac t :Four m ethods such as ethano l extrac tion ,alka li ne ex trac ti on ,u ltrasonic ex tracti on and SFE -CO 2we re used f o r ex trac -ti on of resveratro l from Polygonu m cusp idatu m .The content o f resve ratro l i n Po l ygonu m cusp i dat um was deter m i ned by HPLC .T he extraction m et hods we re co m pared based on the y i e l d of resve ratro.l T he results show ed that the u ltrason ic ex trac ti on w as the bestm ethod f o r ex tracti on of resve ratro.l

K ey word s :P olygonum cusp i dat um ;resveratro;l ex tracti on m e t hod ;H PLC

虎杖(P olygonum cus p i d atum S ieb .et Zucc)为蓼科蓼属小灌木,为传统中药,被历版《中国药典》收载[1]

。虎杖的入药部分为干燥根和根茎,

主要含蒽醌类和芪类化合物,其中芪类成分白藜芦醇具有重要生理活性

[2]

。近几年,越来越多的

药理学试验表明,白藜芦醇具有抗菌、抗脂质过氧

化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝集、降血脂和抗诱变等作用

[3]

。目前虎杖中白藜芦醇的提取最

常见的有乙醇浸提法、碱提酸沉法、超声波萃取法、C O 2超临界萃取法4种方法,本研究探讨了4种提取方法,并比较了不同方法的提取率。

1 材料与方法

1.1 仪器

H Z221-50-06型超临界萃取装置,江苏南通华安超临界萃取有限公司;UV-1600型紫外分光

光度计,北京瑞利分析仪器公司;LC-10ATVP 型高效液相色谱仪,日本岛津公司;FY130型药物粉碎机,中国天津泰斯特仪器有限公司;KQ -160TDE 型高频数控超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;LXJ -Ⅱ型离心机,上海医用分析仪器厂;AX -200型电子天平。1.2 材料

虎杖购自老百姓大药房,产地四川,经粉碎过60目筛;白藜芦醇标准品,99%,金龙公司;CO 2,食品级;乙腈,色谱纯;薄层层析硅胶G 。无水乙醇、丙酮、甲酸、氢氧化钠、盐酸,均为分析纯;蒸馏水(一次,二次)。

2 实验

2.1 白藜芦醇标准液的制备

用万分之一的天平准确称取0.0194g 的白

藜芦醇标准样品用50%甲醇定容于50mL的容

量瓶中作标准液备用。

2.2白藜芦醇含量的检测方法

从2.1节中制备好的标准液中准确吸取

1.0mL定容到10mL的容量瓶中,在200~

400n m波长内对其进行扫描。白藜芦醇在216、

305n m处具有最大吸收峰,选择在305nm处测定

吸光度。

2.3标准曲线的制作

高效液相色谱法测定的色谱条件:YWG-C18

柱子(<4.6mm@250mm),流动相:乙腈B水=

013B0.7;流速:1mL/m i n;柱温:40e;检测波长:

305n m;进样量:20L L。从2.1节标准液中分别

移取0.1、0.25、0.5、0.75、1.0mL定容至10mL

的容量瓶中。用高效液相色谱仪测定其峰面积,

并作数据处理,绘制出标准曲线。标样溶液质量

浓度在3.88~38.8m g/L具有线性关系,白藜芦

醇以不同浓度标准溶液进样,得到相应峰面积,进

行线性回归,峰面积与浓度的线性方程为:

Y=1.316@106X+3.080@105

式中:Y)色谱峰面积;X)白藜芦酸质量浓度,

m g/L;相关系数r=0.9991。

2.4白藜芦醇收率的计算

不同提取方法的提取液,取1.0mL定容到

10.0m L,经微孔膜过滤,用HPLC法测定其峰面

积,并计算其白藜芦醇收率。

收率=C@V@106

W

@100%

式中:C)提取液体质量浓度,mg/L;V)提取液总体积,m L;W)样品粉末质量,g。

2.5提取方法

2.5.1碱提酸沉法取虎杖粉末50.0g3份,分别用p H值为8、10、12的N a OH溶液500mL浸泡24h后,再加热到40e恒温,磁力搅拌2h,过滤,将滤渣再次浸提,过滤,重复4次,合并提取液,提取液用1m o l/L的盐酸溶液调节p H值为2~3,放置10m i n,若溶液p H值无变化,则白藜芦醇沉淀完全[4]。沉淀经离心分离,真空干燥。乙醇溶解定容,经微孔膜过滤,H PLC法检测。2.5.2乙醇浸提法

2.5.2.1不同pH值乙醇对浸提收率的影响

取虎杖粉末50.0g4份,分别用pH值为4、6、8、10的80%的乙醇(体积分数,下同)500mL浸泡24h 后,再加热到40e恒温,磁力搅拌提取2h,将粗提液离心分离,滤渣再次浸提分离,重复4次,合并提取液定容,经微孔膜过滤,HPLC法检测。

2.5.2.2不同乙醇浓度对浸提收率的影响取虎杖粉末50.0g4份,分别用35%、50%、65%、80%的乙醇500mL,并调节pH值为8,浸泡24h 后,再加热到40e恒温,磁力搅拌提取2h,将粗提液离心分离,滤渣再次浸提分离,重复4次,合并提取液定容,经微孔膜过滤,H PLC法检测。2.5.3CO2超临界萃取法称取50.0g虎杖粉末,装入萃取釜中,调节萃取釜压力为25M Pa,温度为50e;分离釜压力5.5MPa,温度为45e[5]。待各项指标稳定后开始循环,同时泵入500mL80%的乙醇,每隔1h收集分离釜的萃取物,收集4次合并萃取液,定容,经微孔膜过滤,

H PLC法检测。

2.5.4超声波提取法准确称取虎杖粉末50.0g4份,分别加入p H值为8的35%、50%、65%、80%的乙醇500mL浸泡24h后,在设定温度为40e下用超声波(功率为50%)提取15m in,将粗提液离心分离,收集上清液;滤渣再次浸提,收集上清液,重复4次,合并上清液定容,经微孔膜过滤,H PLC法检测。

3结果与讨论

3.1碱提酸沉法

碱提酸沉法在p H值为8、10、12的条件下得到的收率分别为0.223%、0.250%、0.207%。显然在p H值为10时提取效果较好,p H值为12时虽粗提物量较大,但提取出来的杂质较多,而白藜芦醇的含量并没有增加。结合表3和图1可分析得出此方法存在提取含量较低,杂质含量高,不利于后续的进一步纯化等缺点,因此不宜采用。

3.2乙醇浸提法

分析表1可知p H值为8,80%的乙醇是乙醇浸提法的最佳条件,提取得到的白藜芦醇H PLC图谱见图1。通过提高乙醇体积分数,白藜芦醇的收率增加效果甚微,溶剂消耗量大,成本高,费时,不宜工业化。

3.3CO2超临界萃取法

CO2超临界萃取得到的白藜芦醇收率为0.408%,从图1分析可得,提取物含杂质较多。CO2超临界萃取技术作为一种新的提取方法,要

30 生 物 质 化 学 工 程第41卷

提高白藜芦醇提取率,减少杂质含量,需进一步优

化提取条件。

图1 H PLC 图谱F i g .1 HPLC chroma tog ram

表1 不同条件对乙醇浸提白藜芦醇收率的影响T able 1 Effects o f different cond iti on on ethano l ex tracti on

不同条件

d iff eren t cond iti on

收率/%y i el d p H 值pH val ue

4

0.41660.46880.491100.479乙醇体积分数/%et hano l vol um e part

35

0.295500.363650.41380

0.491

3.4 超声波提取法

分析表2可知80%的乙醇是超声波提取的最佳条件。结合图1与以上3种方法比较可得到超声波提取法提取白藜芦醇收率最高,且杂质含量较少,提取时间短,耗费溶剂少,工艺简便。

表2 不同乙醇体积分数对超声波提取法的影响T ab l e 2 E ffects of ethano l vo l u me part on u ltrason i c extraction

乙醇体积分数/%ethanol vol um e part

收率/%y i el d 350.485500.603650.69580

0.757

3.5 不同提取方法的比较

以上4种提取方法在最佳条件下的收率见表3。

表3 不同提取方法的收率

T able 3 T he y i e l d of d ifferen t ex tracti on m e t hods

提取方法

extracti on m et hod s 溶剂s olven t 收率/%y i el d 碱提法

al ka li ne extraction pH 值10N a OH 0.250乙醇浸提法et h anol extraction 80%乙醇80%et h anol 0.491CO 2超临界萃取

SFE-CO 280%乙醇80%et h anol 0.408超声波提取u ltras on ic extracti on

80%乙醇80%et h anol

0.757

由表3分析可得出,碱提酸沉法提取的白藜

芦醇收率最低,只有0.250%。乙醇浸提和CO 2

超临界萃取两种方法提取得到的白藜芦醇收率相差不大,比碱提酸沉法提取的收率提高了将近一倍。超声波法是4种提取方法中白藜芦醇收率最高的方法,达到了0.757%,远远高于前面3种提取方法。

4 结论

比较4种提取方法证实,采用超声波法提取虎杖中白藜芦醇的收率最高,其收率达到了0.757%,相比其它3种提取方法,超声波法耗费溶剂少,杂质含量少,提取时间短,工艺简便,易行。

参考文献:

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化学工业出版社,2000:167-168.

[2]YOS H LY UK I K ,CHO HACH I K,M ASAYASU K .New con st-i

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[4]苏,杨磊,李燕杰,等.碱提法从虎杖中分离白藜芦醇的

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[5]曹庸,于华忠,等.虎杖白藜芦醇超临界CO 2萃取研究[J ].

湖南农业大学学报:自然科学版,2003,8(4):353-355.