常用试剂和培养基

Sterile water bottles 

200 ml, 500 ml, or 950 ml water.

Autoclave.

0.05 M CaCl2 (per 200 ml) 

CaCl2·2 H2O    1.5 g

Add 198 ml water.

Autoclave.

0.5 M CaCl2 (per 200 ml) 

CaCl2·2 H2O    15.0 g

Add 188 ml water.

Autoclave.

0.1 M MgSO4 (per 200 ml) 

MgSO4 (anhydrous)    2.4 g

Add 200 ml water.

Autoclave.

10% MSG (for 200 ml) 

Glutamic acid (Na)    20.0 g

Add 188 ml water.

Autoclave.

40% Glucose (per 200 ml) 

Glucose(dextrose)    80.0 g

Add water to 200 ml

(~145-150 ml).

Autoclave.

10% CAA (per 200 ml) 

Casein Acid Hydrolysate    20.0 g

Add 186 ml water.

Autoclave.

10% Yeast (per 200 ml) 

Yeast extract        20.0 g

Add 150-160 ml water. Autoclave.

Add 150 ul ß-mercaptoethanol

after autoclaving.

20X Tryptone/NaCl (per 200 ml) 

Tryptone        40.0 g

NaCl            20.0 g

Add 190 ml water. Autoclave.

Add 150 ul ß-mercaptoethanol

after autoclaving.

10X M9 stock (for 200 ml) 

Na2HPO4 (anhydr.)    12.0 g

KH2PO4             6.0 g

NaCl             1.0 g

NH4Cl             2.0 g

Add 196 ml H2O. Autoclave.

Note: leave out NH4Cl to prepare 10X M9-N.

10X M9 - N stock (for 200 ml) 

Na2HPO4 (anhydr.)    12.0 g

KH2PO4             6.0 g

NaCl             1.0 g

Add 196 ml H2O. Autoclave.

Note: leave out NH4Cl!

100X P (for 200 ml) 

KH2PO4            18.1 g

K2HPO4             5.0 g

pH to 6.3 with 10 N KOH!

Add 192 ml H20. Autoclave.

1X SM (for 200 ml) 

NaCl            1.16 g

MgSO4            0.20 g

Gelatin (2%)        1.00 ml or 20 mg

Add 190 ml H2O, then add:

Tris (1 M, pH 7.5)    10.0 ml

Autoclave.

2% Gelatin (per 500 ml) 

Gelatin            10 g

Add 500 ml water.

Autoclave.

20% Succinate (for 500 ml) 

Succinic acid        100 g

KOH             90 g

Add to 400 ml ice cold water.

Measure pH to 6.4, filter sterilize.

10X TBE (electrophoresis buffer) 

Tris base        108.0 g

Na2EDTA              9.3 g

Boric Acid         55.0 g

Bring volume to 1 L with water.

Use double distilled water.

pH should be 8.3; if not adjust dropwise with conc. NaOH.

Water agar stock (for 190 ml) 

Agar            3.0 g

Add 190 ml H2O.

Autoclave, store in 60C water bath.

R agar stock

            200 ml    500 ml

Tryptone........      2.0 g      5.0 g

NaCl............      1.0 g      2.5 g

Agar............      3.0 g      7.5 g

Add H2O.........    194.0 ml 485.0 ml

Autoclave, store in 60C water bath.

LB agar 200 ml 1000 ml 

Tryptone ......          2 g     10 g

NaCl ..........       1 g      5 g

Yeast extract .          1 g      5 g

Agar ..........          3 g     15 g

Add H2O ......        193 ml    990 ml

Autoclave, store in 60C water bath. LB agar can also be made by

adding 10 ml 10% yeast extract and 10 ml 20X Tryptone/NaCl to

190 ml WA.

NZ 200 ml 500 ml 

NZ amine ....        2.0 g    5.0 g

NaCl ........        1.0 g    2.5 g

MgSO4 (anhydrous)..    0.2 g    0.5 g

Add 10 M NaOH (1 drop/100 ml) after adding water.

Autoclave.

For agar media:

Agar ........        2.4 g    6.0 g

Stir before and after autoclaving.

GYPC to WA stock: 200 ml 1000 ml 

Glucose (40%) .....    2.0 ml    10.0 ml

Yeast extract (10%)    4.0 ml    20.0 ml

100X P ............    2.0 ml    10.0 ml

CAA (10%) .........    4.0 ml    20.0 ml

Succinate (20%)....    1.0 ml     5.0 ml

Add appropriate antibiotics.

Pour plates.

ORS minimal 200 ml 1000 ml 

10X M9 .........     10 ml     50 ml

Succinate (20%).      2 ml     10 ml

MSG (10%) ......      2 ml     10 ml

Glucose (40%) ..      1 ml      5 ml

MgSO4 (0.1 M) ..      1 ml      5 ml

CaCl2 (0.5 M) ..    200 ul      1 ml

1000X vitamins .    200 ul    1 ml

Water ..........    184 ml    920 ml

Omit succinate and add 10 ml glucose for storage medium.

E. coli minimal 200 ml 1000 ml 

10X M9 ..........    20 ml    100 ml

MgSO4 (0.1 M) ...     2 ml     10 ml

CaCl2 (0.5 M) ...     0.2 ml      1 ml

1000X vitamins ..     0.2 ml      1 ml

Glucose (40%) ...     2 ml     10 ml

XC minimal 200 ml 1000 ml 

10X M9 ..........    5.0 ml    25 ml

MgSO4 (0.1 M) ...    1.0 ml     5 ml

CaCl2 (0.5 M) ...    0.2 ml     1 ml

200X 7 aa stock..    0.2 ml     1 ml

Glucose (40%) ...    0.5 ml     2.5 ml

Glycerol (50%) ..    4.0 ml    20 ml

Nif plates 

10X Nif buffer        100 ml

10X trace elements    100 ml

1000X vitamins          1 ml

Sterile dd H2O        799 ml

Agarose              6 g

Succinate (20%)         20 ml

(Succinate is already 0.4% from that in 10X nif buffer)

10X Nif buffer 1000 ml 

K2HPO4             34.02 g

KH2PO4             57.06 g

Succinate (20%)        200.00 ml

pH should be 6.4 after 10X dilution.

1000X ORS vitamins 

Nicotinic acid        2.0 mg/ml

Pantothenate        1.0 mg/ml

Biotin            0.2 mg/ml

Stir, filter sterilize.

Trace elements 

MgSO4 (0.1 M)         25 ml

CaCl2 (0.5 M)          5 ml

Na2MoO4 (1 mg/ml)      5 ml

FeCl3 (1 mg/ml)          5 ml

Water            460 ml

YEM (per 500 ml) 

K2HPO4             0.5 g

MgSO47 H2O         0.2 g

NaCl             0.1 g

Mannitol        10.0 g

Yeast extract         0.4 g

Agar            15.0 g

pH to 6.9

YEM substitute (per 200 ml) 

To 180 ml WA stock:

10X M9             8.0 ml

Mannitol (20%)        20.0 ml

Yeast extract (10%)     1.6 ml

SM10 selective media (for storage) 

10X versatile Mg    100 ml

Thiamine          5 ml

Threonine          5 ml

Leucine              5 ml

Glucose (40%)         10 ml

Water            875 ml

Amino acids 

SM10 stocks:        Thiamine (0.337%)

            Threonine (0.71%)

            Leucine   (0.79%)

Klebsiella:        Histidine (0.31%)

10X versatile Mg (for 200 ml) 

MgSO4            2.0 ml

Thiamine (1 mg/ml)    2.0 ml

CaCl2            0.2 ml

200X PLT (for 200 ml) 

Proline            9.20 g

Leucine            1.60 g

Thiamine        0.67 g

Autoclave.

Mg PLT 

10X versatile Mg    100 ml

200X PLT          5 ml

40% glucose         10 ml

Water            885 ml 

Z buffer (lacZ assays) 

            200 ml    1000 ml

Na2HPO47 H2O ....    3.22 g    16.10 g

NaH2PO4H2O ......    1.10 g     5.50 g

KCl ..............    0.15 g     0.75 g

MgSO4 (0.1 M) ....    1.00 ml     0.20 ml

ß-mercaptoethanol.    2.70 ml     0.54 ml

Filter sterilize.

ONPG stock 

4 mg/ml in phosphate buffer (pH 7)

Phosphate buffer (pH 7.0) per 100 ml: 

Na2HPO47 H2O         1. g

NaH2PO4H2O         1.38 g

0.2 M Na2CO3 (100 ml) 

Na2CO3 (anhydr.)    10.6 g

Jensen's Medium (Sesbania) 

10X Macro nutrients (1000 ml):

 K2HPO43 H2O         2.6 g

 NaCl             2.0 g

 MgSO4             0.97 g

 CaCl2            10.0 g

 FeCl36 H2O         1.4 g

 KNO3             3.0 g

Jensen's Medium (Sesbania) 

1X solution (1000 ml):

 K2HPO43 H2O        0.20 g

 NaCl            0.20 g

 MgSO47 H2O        0.20 g

 CaHPO4            1.00 g

 FeCl36 H2O        0.10 g

 or Fe EDTA        0.26 g

 KNO3 .(only for 10X)    3.00 g

Jensen's Medium (1942) 

see Vincent 1970 p. 75.

per Liter:

 K2HPO43 H2O        0.2 g

 NaCl            0.2 g

 MgSO47 H2O        0.2 g

 CaHPO4            1.0 g

 FeCl36 H2O        0.1 g

  or Fe-EDTA        0.26 g

Dilute 1:5 when used.

15 ml diluted medium/pouch.

1000X Micronutrients (200 ml) 

H3BO3           572 mg

MnCl2            406 mg

ZnSO4H2O         44 mg

CuSO45 H2O         16 mg

NaMO4BH2O        18 mg

Co2+            20 mg

Ni2+            20 mg

Nodule grinding buffer (500 ml)

50 mM KH2PO4 (pH 7.6), 0.15 M NaCl 

K2HPO4 (1M)     3.25 ml

KH2PO4 (1M)    21.75 ml

NaCl         4.38 gm

Add to 450 ml distilled water, pH to 7.6, and adjust volume to 500 ml.

Rapidyne germicide 

For working solution:

Dilute concentrated stock at 0.6ml/L.

1 M Tris-Cl (500 ml) 

To 400 ml, add:

Tris base    60.5 g

Add conc. HCl to pH

bring to volume.

Tris buffer mixtures for pH 

pH    Tris HCl    Tris base

7.0    .923        .077

7.1    .905        .095

7.2    .90        .10

7.3    .865        .135

7.4    .84        .16

7.5    .82        .18

7.6    .78        .22

7.7    .74        .26

7.8    .67        .33

7.9    .63        .37

8.0    .50        .50

Southern Transfer solutions 

I. 0.25 N HCl:

    21.5 ml conc. HCl (11.6N) to 1 liter volume.

II. 0.5 M NaOH, 1.5 M NaCl:

    87.7 g NaCl, 20.0 g NaOH to 1 liter volume.

III. 1.0 M Tris, 1.5 M NaCl:

    121.1 g Tris base, 87.7 g NaCl, pH to 8.0 with conc. HCl (~50

    ml), adjust to 1 liter volume.

IV. 20X SSC:

    175.3 g NaCl, 88.2 g Na3citrate, pH to 7.0 with conc. HCl (~1

    drop), adjust to 1 liter volume.

Random-primer oligonucleotide labelling 

Mix:

    9.00 ul DNA (not more than 200 ng)

    1.25 ul hexamers

Boil, then place on ice, then add:

    5.0  ul HEPES buffer

    5.0  ul nucleotides [in 250 mM Tris (pH 8), 25 mM MgCl2, 50 mM

    ß-mercaptoethanol]

    1.0 ul BSA (40 mg/ml)

    0.5 ul Klenow

    5.0 ul -32P CTP

Let reaction go at room temperature for at least 4 hours, or overnight.

MS MEDIUM FOR ARABIDOPSIS

To 990 ml H2O add:

Sucrose ...........    10.0  g

MOPS ..............    0.5  g

Agar ..............    8.0  g

Adjust pH to 5.7 with 1 M KOH.

Autoclave.

When cooled add sterile stock solutions of:

KNO3...............    20.0  ml  940 mM (95.00 g/L)

NH4NO3.............    20.0  ml 1000 mM (80.04 g/L)

KH2PO4.............    12.5  ml  100 mM (13.60 g/L)

MgSO47H2O.........    15.0  ml  100 mM (24.65 g/L)

CaCl27H2O.........    10.0  ml  300 mM (44.00 g/L)

Glycine............     2.67 ml   10 mM

Nicotinate.........     0.4  ml   10 mM

Thiamin............     0.02 ml   10 mM

PyridoxineHCl.....     0.24 ml   10 mM

Myoinositol........     5.5  ml  100 mM

FeSO47H2O ........    1.0  ml         (2.780 g/100 ml)

Na2EDTA ...........     1.0  ml  100 mM (3.720 g/100 ml)

MnSO44H2O.........     1.0  ml  100 mM (1.690  g/100 ml)

ZnSO44H2O.........     3.0  ml   10 mM (0.288 g/100 ml)

H3BO3 .............     1.0  ml  100 mM (0.618 g/100 ml)

KI.................     0.5  ml   10 mM (0.166 g/100 ml)

CuSO45H2O ........    0.01 ml   10 mM (0.170 g/100 ml)

Na2MoO42H2O ......     0.1  ml   10 mM (0.242 g/100 ml)

CoCl26H2O ........     0.01 ml   10 mM (0.238 g/100 ml)

B5 MEDIUM FOR ARABIDOPSIS

To 990 ml H2O add:

Sucrose ...........    20.0  g

MOPS ..............     0.5  g

Agar ..............     8.0  g

Adjust pH to 5.7 with 1 M KOH.

Autoclave.

When cooled add sterile stock solutions of:

KNO3...............    26.3  ml  940 mM (95.00 g/L)

NaH2PO4H2O........    11.0  ml  100 mM

MgSO47H2O.........    10.0  ml  100 mM (24.65 g/L)

(NH4)2SO3..........    10.0  ml  100 mM

CaCl27H2O.........     3.3  ml  300 mM (44.00 g/L)

Myoinositol........     5.5  ml  100 mM

Thiamine...........     3.0  ml   10 mM

Nicotinate.........     0.8  ml   10 mM

PyridoxineHCl.....     0.48 ml   10 mM

10X Micronutrients.    10.0  ml  (see below)

Sequestrene 330 Fe.    10.0  ml  (0.28 g/100 ml)

For Callus Inducing Medium (CIM) add:

2,4-D.....................    0.50 ml

Kinetin...................    0.05 ml

For Shoot Inducing Medium  (SIM) add:

IAA.......................    0.15 ml

6-dimethylaminopurine.....    5.00 ml

10X Micronutrients (per 100 ml) 

MnSO44H2O.........     0.6  ml  100 mM (1.690 g/100 ml)

ZnSO44H2O.........    10.07 ml   10 mM (0.288 g/100 ml)

H3BO3 .............     4.9  ml  100 mM (0.618 g/100 ml)

KI.................     4.5  ml   10 mM (0.166 g/100 ml)

CuSO45H2O ........     2.3  ml   10 mM (0.170 g/100 ml)

Na2MoO42H2O ......     1.0  ml   10 mM (0.242 g/100 ml)

CoCl26H2O ........     1.0  ml   10 mM (0.238 g/100 ml)

LB (Luria-Bertani) Broth 

Bacto-Tryptone        10 g

Bacto-Yeast Extract     5 g

NaCl             5 g

H2O up to 1L

If desired, adjust the pH 7.5 with NaOH.

CA (Complete Agar) 

Casein Hydrolysate    10 g

Yeast Extract         5 g

K2HPO4     4 g

Agar            15 g

H2O up to 1 L

Stab Agar 

Nutrient Broth        10 g

NaCl             5 g

Agar             6 g

H2O up to 1 L

Mix well and autoclave for 15 min at 121 C.

S.O.C. (from BRL) 

            1X 100 ml

2 % Bacto-Tryptone    2.0 g 

0.5 % Yeast Extract    0.5 g 

10 mM NaCl        2.92 g

2.5  mM KCl        3.73 g

20 mM MgCl2        20.2 g

20 mM MgSO4        24.6 g

20 mM Glucose        9.0 g

Mix above, bring to 100 ml, and filter through a sterile 0.45

µm filter.  Store the stock solution at -20 C or -70 C.

Bacillus Thuringiensis Medium 

Component        G/L

Glucose            3.0

(NH4)2SO4        2.0

Yeast Extract        2.0

K2HPO4 3H2O        0.5

MgSO4*7H2O        0.2

CaCl2*2H2O        0.08

MnSO4*4H2O        0.05

Add componenets to distilled water. Mix throughly and bring pH to 7.3.

Autoclave for 15 min at 15 psi -- 121°C