| 溶剂 | 沸点 | 解电常数 | 比重 | 一般精制处理 | 备注 |
| 石油醚 | 30～60℃ 60～90℃ 90～120℃ | 工业石油醚1公斤用工业硫酸80毫升充分振摇,放置,分出下层,可根据硫酸层颜色的深浅,酌情振摇二到三次,石油醚用少量稀氢氧化钠洗,再用水洗至中性,无水氯化钙干燥,重蒸,按沸程收集. | 一般国外沸程30~70℃称为石油醚Petrolcum ether 50~70℃称Petroleum bonyino 75~120℃ 称Ligroin | ||
| 苯 | 80.1℃ | 2.3℃ | 0.879 | 处理同上 | |
| 乙醚 | 34.8℃ | 4.5℃ | 0.710 | 工业乙醚用硫酸亚铁或10%亚硫酸氢钠溶液振摇(除去过氯化物和水溶性杂质)1~3次,无水氯化钙干燥,重蒸. | |
| 氯仿 | 61.2℃ | 5.2℃ | 1.439 | 以稀氢氧化钾洗涤,再用水洗2~3次,以无水氯化钙干燥,重蒸. | 氯仿不能用金属钠干燥,用容易引起爆炸. |
| 乙酸乙酯 | 77.1℃ | 6.1℃ | 0.902 | 工业用乙酸乙酯用50%碳酸钠洗至2次 ,以无水氯化钙干燥,重蒸. | |
| 丙酮 | 56.2℃ | 21.5℃ | 0.790 | 工业丙酮加0.1%高锰酸钾,摇匀,放1~2天(或回流4小时,至高锰酸钾颜色不褪,以无水硫酸钠干燥,重蒸) | 不宜用金属钠,五氧化二磷脱水,不宜用于处理氧化铝.经高锰酸钾处理后,重蒸时务必小心,蒸至小体积即可,不得蒸干.因有时候能产生过氧化物,引起爆炸. |
| 乙醇 | 78.8℃ | 26.8℃ | 0.794* | 工业酒精加生石灰回流2~4小时,重蒸. | |
| 甲醇 | 54.6℃ | 31.2℃ | 0.742 | 一般重蒸即可,如含有醛酮,可以用高锰酸钾大致测定醛酮含量,加过量的 盐酸羟胺回流4小时后,重蒸. | 重蒸 |
| 吡啶 | 115.4℃ | 0.787* | 用氢氧化钾干燥重蒸 |
附录5 共沸混合溶剂
| 序号 | 溶剂 | ％（重量比） | 沸点 ℃ 770mmHg | 介电常数 ±0.0525℃ |
| 1 | 乙酸乙酯 环己烷 | 46.0 54.0 | 71.6 | 3.95 |
| 2 | 异丙醇 二异丙醚 | 16.3 83.7 | 66.2 | 5.75 |
| 3 | 乙酸甲酯 环乙烷 | 83.0 17.0 | 54.9 | 5.80 |
| 4 | 乙醇 氯仿 | 8.0 92.0 | 59.4 | 6.05 |
| 5 | 乙醇 四氯化碳 | 16.0 84.0 | 65.0 | 6.30 |
| 6 | 乙醇 苯 | 31.70 68.3 | 68.0 | 7.50 |
| 7 | 乙醇 庚烷 | 48.0 52.0 | 72.0 | 9.50 |
| 8 | 甲醇 氯仿 | 12.6 87.4 | 53.4 | 9.80 |
| 9 | 甲醇 二氯甲烷 | 7.3 92.7 | 37.8 | 10.50 |
| 10 | 乙醇 苯 环己烷 | 30.4 10.8 58.8 | 65.05 | 6.56 |
| 11 | 甲醇 乙酸乙酯 环己烷 | 17.8 48.6 33.6 | 50.8 | 8.35 |
| 12 | 甲醇 丙酮 环己烷 | 16.0 43.5 40.5 | 51.1 | 13.25 |
| 13 | 甲醇 乙酸乙酯 | 17.7 82.3 | 53.9 | 10.75 |
| 14 | 丁酮 庚烷 | 73.0 27.0 | 77.0 | 10.75 |
| 15 | 甲醇 苯 | 39.1 60.9 | 57.5 | 13.40 |
| 16 | 丙酮 环己烷 | 67.5 32.5 | 58.0 | 13.75 |
| 17 | 乙醇 甲苯 | 68.0 32.0 | 76.5 | 17.25 |
| 18 | 丁酮 氯仿 | 83.0 17.0 | 79.9 | 17.30 |
| 19 | 丙酮 四氯化碳 | 87.4 12.6 | 56.0 | 19.30 |
| 20 | 甲醇 丙酮 | 12.0 88.0 | 56.4 | 22.05 |
| 21 | 水 乙醇 | 4.0 96.0 | 78.2 | 25.40 |
| 22 | 甲醇 乙酸甲酯 氯仿 | 21.6 27.0 51.4 | 56.4 | 13.65 |
| 23 | 乙醇 丙酮 氯仿 | 10.4 24.3 65.3 | 63.2 | 13.90 |
| 24 | 甲醇 丙酮 氯仿 | 23.0 30.0 47.0 | 57.5 | 19.30 |
| 化合物类型 | 溶剂系统 | 显色剂 |
| 脂肪酸及其酯类 | 乙醚－乙烷－甲醇(25:74:1) 乙醚－乙烷(30:100) 二乙醚－石油醚(5:95) 己烷－苯(65:35) 己烷－苯(5:5) | 50%硫酸 5%邻铂酸的4%盐酸醇溶液 |
| 蜡酯类 | 二乙醚－乙醚(5:95) | |
| 胆固醇类 | 石油醚－二乙醚(4:1) 二乙醚－ | 5%硫酸 |
| 含氧脂肪酸 | 二乙醚－石油醚(4:1) | |
| 甾醇类 | 异丙醇－氯仿(1.5:98.5) 氯仿 己烷－乙醚(4:1) 己烷－苯(5:3) 石油醚－苯(5:3) 石油醚－氯仿－醋酸(75:25:0.5) | 50%硫酸 |
| 五环三萜 | 苯－5%盐酸 醋酸乙酯 苯 | 5%硫酸和5%醋酸 |
| 单甾烃类 | 己烷 苯 | 五氯化锑氯仿溶液 |
| 萜醇类 | 己烷－乙醚(4:1) 己烷－苯(5:3) 石油醚－氯仿－醋酸(75:25:0.5) | " 50%硫酸三氯化锑氯仿溶液 |
| 挥发油 | 己烷－醋酸－氯仿(6:2:2) 甲苯－醋酸乙酯(7:3) | " 1%香英兰醛浓硫酸溶液 |
| 内酰胺衍生物 | 醋酸乙酯 | 碘 |
| 雌性激素 | 异辛烷－氯仿－乙醇(40:70:10) | 50%硫酸……. |
| 吡啶同系物 |
| 溶剂名称及结构 | 沸点 | 介电常数 | 溶解度(20~25℃) | |
| 溶剂在水中 | 水在溶剂中 | |||
| 正己烷C6H14 | 30~65℃ | 1.80 | 不溶 | 不溶 |
| 石油醚 | 69℃ | 1.58 | 0.00095% | 0.0111% |
| 环己烷 | 81℃ | 2.02 | 0.010% | 0.0055% |
| 二氧六环 | 101℃ | 2.21 | 任意混溶 | |
| 四氯化碳CCL4 | 77℃ | 2.24 | 0.077% | 0.010% |
| 苯 | 80℃ | 2.29 | 0.1780% | 0.063% |
| 甲苯 | 111℃ | 2.37 | 0.1515% | 0.0334% |
| 间二甲苯 | 137℃ | 2.38 | 0.0176% | 0.5402% |
| 二硫化碳CS2 | 46℃ | 2. | 0.294% | <0.005% |
| 乙醚C2H50C2H5 | 35℃ | 4.34 | 6.04% | 1.468% |
| 醋酸戊酯CH3COOC5H11 | 149℃ | 4.75 | 0.17% | 1.15% |
| 氯仿CHCL3 | 61℃ | 4.81 | 0.815% | 0.072% |
| 醋酸乙酯CH3COOC2H5 | 77℃ | 6.02 | 8.08% | 2.94% |
| 醋酸CH3COOH | 118℃ | 6.15 | 任意混溶 | |
| 苯胺 | 184℃ | 6. | 3.38% | 4.76% |
| 四氢呋喃 | 66℃ | 7.58 | 任意混溶 | |
| 苯酚 | 180℃ | 9.78(60℃) | 8.66% | 28.72% |
| 1,1－二氯乙烷CH3CHCL2 | 57℃ | 10 | 6.03% | <0.2% |
| 1,2－二氯乙烷CH2CLCH2CL | 84℃ | 10.4 | 0.81% | 0.15% |
| 吡啶 | 115℃ | 12.3 | 任意混溶 | |
| 叔丁醇(CH3)3COH | 82℃ | 12.47 | 任意混溶 | |
| 正戊醇NC5H11OH | 138℃ | 13.9 | 2.19% | 7.41% |
| 异戊醇(CH3)2CH2CH2OH | 131℃ | 14.7 | 2.67% | 9.61% |
| 仲丁醇CH3CHOHC2H5 | 100℃ | 16.56 | 12.5% | 44.1% |
| 正丁醇N－C4H9OH | 118℃ | 17.8 | 7.45% | 20.5% |
| 环己酮 | 157℃ | 18.3 | 2.3% | 8.0% |
| 甲乙酮CH3COC2H5 | 80℃ | 18.5 | 24% | 10.0% |
| 异丙醇(CH3)2CHOH | 82℃ | 19.92 | 任意混溶 | |
| 正丙醇N－C3H7OH | 97℃ | 20.3 | 任意混溶 | |
| 醋酐(CH3CO)2O | 140℃ | 20.7 | 微溶 | |
| 丙酮CH3COCH3 | 56℃ | 20.7 | 任意混溶 | |
| 乙醇C2H5OH | 78℃ | 24.3 | 任意混溶 | |
| 甲醇CH3OH | ℃ | 33.6 | 任意混溶 | |
| N,N－二甲基甲酰胺HCON（CH3）2 | 153℃ | 37.6 | 任意混溶 | |
| 乙腈CH3OH | 82℃ | 37.5 | 任意混溶 | |
| 乙二醇CH2OHCH2OH | 197℃ | 37.7 | 任意混溶 | |
| 甘油CH2OHCHOHCH2OH | 390℃ | 42.5 | 任意混溶 | |
| 甲酸HCOOH | 101℃ | 58.5 | 任意混溶 | |
| 水 | 100℃ | 80.4 | 任意混溶 | |
| 甲酰胺HCOONH2 | 211℃ | 101 | 任意混溶 | |
| 干燥剂 | 容量 | 速率 | 注 |
| CaSO4 | 1/2H2O | 极快（1） | 以商品名Drieritt出售，加或不加颜色指示剂；非常有效，干时，指示剂（CoCL2）呈兰色，吸水后变成粉红色（容量CoCL2.6H2O）；适用的 温度范围为－50～＋86度。某些有机溶剂能使CoCL2沥出或改变颜色（如丙酮，醇类，吡啶等） |
| CaCL2 | 6H2O | 极快（2） | 不是很有效；只用于烃或卤代烃（与含氮和含氮化合物形成溶剂化物，络合物，或发生反应）。 |
| MgSO4 | 7H2O | 极快（4） | 出色的 通用干燥剂；非常惰性单可能呈弱酸性(避免用于对酸极敏感的化合物),可能溶于某些有机溶剂. |
| 4A分子筛 | 高 | 块（30） | 非常有效;建议先用普通干燥剂后用此物(见下述有关分子筛的详情)3A分子筛也是出色的干燥剂 |
| NaSO4 | 10H2O | 慢（290） | 非常温和,非常有效,便宜,高容量;很适于初步干燥,但不可以使溶剂受热. |
| K2CO3 | 2H2O | 快 | 对于酯腈酮,特别是醇,是良好的干燥剂,不可以用于酸性化合物. |
| NaOH ,KOH | 极高 | 快 | 高效 但只适用于不会使他们溶解的惰性溶液;特别适用于胺. |
| H2SO4 | 极高 | 极快 | 极为有效,但只限于用来干燥饱和烃或芳香烃或卤代烃(硫酸会与烯或其他碱性化合物作用二使之损失) |
| 氧化铝或硅胶（SiO2） | 极高 | 极快 | 特别适用于烃,应该研细;用过后加热(SiO2为300度，Al2O3为500度)就可以重新活化。 |
*每摩尔干燥剂吸收的水摩尔数（最大量）
**相对速率，前五行中夸号内的数字是指苯的相对干燥速率――数字小的表示干燥块；溶剂改变时候，吸水率低的干燥剂的次序会发生变化。
附录7 萃取水溶液用的溶剂*
| B.P.（℃） | 可燃性** | 毒性** | 注 | |
| 苯 | 80.1 | 3 | 3 | 易成乳浊液***;很适宜从缓冲液中提取生物碱及酚类 |
| 2－丁醇 | 99.5 | 1 | 3 | 高沸点;很适宜从缓冲液中提取水溶性物质 |
| 正丁醇 | 118.0 | 1 | 3 | 水饱和后使用,为常用从水中萃取中等极性物质的浓剂. |
| 四氯化碳 | 76.5 | 0 | 4 | 易干燥;很适宜非极性物质 |
| 氯仿 | 61.7 | 0 | 4 | 能形成乳浊液 易干燥 |
| 二乙醚 | 34.5 | 4 | 2 | 能吸收大量水; 优良的通用溶剂 |
| 二异丙醚 | 69 | 5 | 2 | 长期储存后能形成爆炸性过氧化物;很适宜从磷酸盐缓冲的溶液中提取羧酸 |
| 乙酸乙酯 | 77.1 | 3 | 1 | 吸附大量水;很适宜极性物质 |
| 二氯甲烷 | 40 | 0 | 1 | 会形成乳浊液,易干燥 |
| 正戊烷 | 36.1 | 4 | 1 | 烃类易于干燥 |
| 正己烷 | 69 | 4 | 1 | 对于极性物质均为不良溶剂 |
| 正庚烷 | 98.4 | 3 | 1 |
**4代表毒性最大或最易燃.4>3>2>1;0代表不燃.
***用有机溶剂萃取水溶液时会形成乳浊液,即使有可能分离也会变得很困难.溶液呈碱性时,这种乳浊液更易形成;加烯硫酸(如果可以的话)可以破坏这种乳浊液;将水相用盐饱和(NaCL,Na2SO4等);加几滴醇或醚(尤其当有机层是CHCL3时);将混合物经行离心,这是最成功的方法之一.
附录9 用于有机液体较强的去水剂
| 试剂* | 与水形成的化合物 | 注 |
| Na** | NaOH,H2 | 用于烃和醚的去水很出色;不得用于人和卤代烃 |
| CaH2 | Ca(OH)2 , H2 | 最佳去水剂之一;比LiALH4缓慢但效率高相对较安全.用于烃,醚,胺,酯,C4和更高级的 醇(勿用于C1,C2,C3醇),不得用于醛和活泼羧基化合物 |
| LiALH4*** | LiOH,AL(OH)3,H2 | 只使用于惰性溶剂[烃基,芳基卤(不能用于烷基卤),醚];能与任何酸性氢和大多数功能团(卤,?基,硝基,等等)反应.使用时要小心;多余者可慢慢加入乙酸乙酯加以破坏. |
| BaO或Cao | Ba(OH)2或Ca(OH)2 | 慢而有效;主要适用于醇类和醚类,但不易用于对强碱敏感的 化合物 |
| P2O5 | HPO3,H3PO4,H4P2O7 | 非常快而且效率高,高度耐酸,建议先预干燥.仅用于惰性化合物(尤其适用于烃,醚,卤代烃,酸,酐) |
*最佳的去水剂应是能和水反应且是不可逆的(且不与溶剂溶质反应);他们也是极其危险的,故先经不太好的去水剂(见下)粗略干燥后才准使用这类去水剂，这类去水剂几乎总是在蒸馏溶剂之前或在蒸馏过程中对他经行去水。尽管MgCLO4是一种最有效的干燥剂之一，但不推荐，因为操作时会爆炸［参考下列文献：D.R.Burfield，K.H.Lee，and R.H Smither,J.Org.Chem,42,3060,(1977),以了解干燥剂的效率］
**J.T.Baker公司出售一种称为Dri-Na的合金,含Na10%,Pb90%;这种干的,粒状试剂只与空气慢慢反应,但其干燥醚等溶剂的效率和Na相同.参考L.F.Fieser and M.Fieser,Reagents，Vol.2（Wiley,New York，1969），P，385。
***另一种危险性较小,但效率相当的干燥剂是Na(CH3OCH2O)2ALH2,称为Vitride(RealcoChemica)Campany出品,可自Eastman Kodak公司购得.
附录
附录1 薄层层析及纸层析常用显色剂配制及显色方法
通用试剂
(1)重络酸钾-硫酸:检查一般有机物.
喷洒剂:5克重络酸钾溶于100毫升40%硫酸中.
薄层检查:喷洒后加热到150℃至班点出现
(2)荧光素-溴:检查不饱和化合物
喷洒剂:0.1克荧光素溶于100毫升乙醇中
溴试剂:5%的溴的四氯化碳溶液
喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检查荧光,荧光素与溴化和成曙红(Eosin)(无萤光),而不饱和化合物则成溴加成物,保留了原有荧光;若点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色.
(3)碘:检查一般有机物.
方法:a 层析谱放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕色斑点。
B 层析谱放碘蒸气中5分钟（或喷5％碘的氯仿溶液）取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后，喷1％淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。
（4）硫酸：通用
喷洒剂：5％的浓硫酸乙醇溶液，或15％浓硫酸正丁醇溶液，或浓硫酸－醋酸（1：1）
喷洒后处理：空气中干燥15分钟，再热至110℃直至出现颜色或荧光。
（5）银－氢氧化铵（Tollen-Zaffaroni）试剂：检查还原性物质。
溶液I : 0.1%N银; 溶液II: 5N氢氧化铵
喷洒剂: I和II以1:5混合(临用前混合)
喷洒后处理: 105℃加热5~10分钟,至深黑色斑点出现.
(6)磷钼酸或磷钨酸,硅钨酸:检查还原性物质,类脂体,生物碱,甾体
喷洒剂: 5~10%磷钼酸或磷钨酸或硅钨酸乙醇溶液
喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现.
沉淀试剂: 1克硅钨酸溶于20毫升水中,加10%盐酸至强碱性.
生物碱
(7)硫酸=硫酸:检查生物碱及含碘化合物
喷洒剂: 0.1克硫酸?混悬于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓硫酸至澄清.
喷洒后处理: 110℃加热数分钟至斑点出现.
(8)碘化铋钾(Dragendorff)试剂:检查生物碱及其他含氟化合物.
溶液I: 0.85克次铋溶于10毫升冰醋酸40毫升水中
溶剂II: 8克碘化钾溶于20毫升水中.
制备液I+II,等体积混合.可用于棕色瓶中保存较长时间,一般制备液可作沉淀试剂用.
喷洒液: 制备液1毫升与2毫升醋酸,10毫升水混合即得
(9).碘化汞钾(Mayer)试剂: 检查生物碱.
制备液: 13.55克氯化汞和49.8克碘化钾各溶于20毫升水中,等体积混合并用水稀释至1000毫升.
喷洒液: 制备液加1/10体积的17%盐酸.
喷洒后处理: 观察斑点,并于紫外线荧光分析灯下检出.
(10) ?酸纳-浓硫酸(Mandelin)试剂:检查生物碱.
1%>酸纳的浓硫酸溶液.与多种生物碱呈不同颜色.
(11)碘－碘化钾(Wagner)试剂:检查生物碱.
1克碘及10克碘化钾,溶于50毫升水中,加热,加2毫升醋酸,再用水稀释至100毫升.
可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂.
酚类,鞣质
(12)三氯化铁:检查酚类及酸.
喷洒剂:1~5%三氯化铁的水溶液或乙醇溶液.并加盐酸少许.酸呈红色斑点,酚类称蓝色或绿色斑点.
(13)铁-三氯化钾:检查酚类,芳香胺类及还原性物质.
喷洒剂: 1%铁水溶液,2%三氯化铁水溶液.临用前等体积混合.
喷洒后处理: 喷洒后酚性物质呈蓝色斑点.再喷2N盐酸,能使颜色加深,纸谱可用烯盐酸洗去喷洒液.
(14) 4-胺基安替比林-铁(Emerson反应): 检查酚类.
喷洒剂: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液;
II. 8%铁水溶液.
或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁水溶液
方法: 先喷洒I,再喷洒II,即显色,或再放入密闭缸中,缸内放25%氢氧化铵,即产生橙色至深红色.
(15) 对氨基苯磺酸,重氮盐(Pauly试剂): 检查酚类,芳香胺类及能偶合的杂环化合物.
喷洒剂: 4.5克对氨基苯磺酸,加热溶于45毫升12N盐酸中,用水稀释至500毫升,取10毫升稀释液用冰冷却,加10毫升冷4.5%亚钠水溶液,0℃放15分钟(此试剂于0℃可保存3天),用前加等体积1%碳酸钠水溶液.
一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等.
(16) 对甲苯磺酸: 检查甾体,黄酮,鞣质.
喷洒剂: 20%对甲苯磺酸氯仿溶液.
喷洒后处理: 100℃加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点.
含氧杂环及蒽醌类*
(17) 三氯化铝: 检查黄酮体.
喷洒1%三氯化铝乙醇液于紫外线荧光分析灯下检示,呈黄色荧光
(18)碱式醋酸铅: 检查黄酮体.
喷洒剂: 饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅)水溶液.
于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点.
(19)醋酸镁: 检查蒽醌甙,甙元及黄酮体
喷洒剂: 0.5%醋酸镁甲醇溶液
方法: 90℃加热5分钟,呈红色至紫色斑点.
(20)氢氧化钾: 检查香豆素,蒽醌甙及甙元
喷洒剂: 5~10%氢氧化钾的甲醇溶液.
于日光及紫外线荧光分析灯下检示斑点.
萜类,甾体
(21) 三氯化锑(Carr-Price试剂): 检查甾体,萜类,皂类.
喷洒剂: 25克三氯化锑溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的饱和溶液).
喷洒后处理: 100℃加热5分钟,于紫外线荧光分析灯下检示荧光.
(22) 五氯化锑: 检查甾体,萜类,皂甙.
喷洒剂: 五氯化锑-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鲜配制.
喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现,并于紫外线荧光分析灯下检示.
(23)香兰醛-硫酸: 检查高级醇类,酚类,甾体,萜类,芳香油.
喷洒剂: 1克香兰素溶于100毫升浓硫酸,或0.5克香兰醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中.
喷洒后处理: 室温或120℃加热观察显色斑点.
(24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.试剂): 检查? Azulene 及?前体 Proazulene.
喷洒剂: 0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存数月)
?:烃室温即成蓝紫色斑点,>前体于80℃加热10分钟出现蓝紫色斑点.
(25) 氯胺T－三氯醋酸: 检查强心甙.
喷洒剂: I. 3%氯仿T水溶液新鲜制备.
II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存数天).
10毫升I加40毫升II,用前混合.
喷洒后处理: 110℃加热7分钟,紫外线荧光分析灯下检示呈蓝色或黄色荧光.
(26) 亚基铁-氢氧化钠(Legal试剂): 检查不饱和内酯;甲基酮或活性次甲基,常用于强心甙
喷洒剂: 1克亚硝基铁溶于100毫升2N氢氧化钠-乙醇(1:1)的水溶液.
显红色或紫色斑点.
(27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal试剂): 检查强心甙,α,β-不饱和内酯.
喷洒剂: 1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氢氧化钾50毫升.
强心甙呈紫红色斑点.
糖类
(28) 邻苯二甲基苯胺: 检查还原糖.
喷洒剂: 0.93克苯氨,1.66克邻苯二甲酸溶于100毫升水饱和的正丁醇中.
喷洒后处理: 105℃加热10分钟.
(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：检查还原糖及其他还原物质。
溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液； 溶液II：1N氢氧化钠。
喷洒液：I，II，临用前等体积混合。
喷洒后处理：100℃加热5～10分钟，得红色斑点。
（30）Keller-Kiliani试剂：检查α－去氧糖，常用于强心甙。
试液：100毫升冰醋酸加三氯化铁试液0.5毫升混合均匀.
试样1毫克加试液2毫克溶解后,沿试官管壁滴入浓硫酸2毫升,接触面即显棕色,渐变浅绿,蓝色.最后冰醋酸层全部燃呈蓝色.
(31) 1,3-二羟基萘-磷酸: 检查糖类.
喷洒液: 0.2%1,3-二羟基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,与10毫升85%磷酸混合.
(32) 费林溶液(Fehling): 检查还原糖.
溶液I: 69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中.
上述二溶液如不清可滤过.临用前等体积混合.
氨基酸
(33) 茚三酮: 检查氨基酸及氨基糖.
喷洒剂: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).
喷洒后处理: 110℃加热至斑点出现.
(34) 吲哚醌: 检查氨基酸和一些肽.
喷洒剂: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.
喷洒后处理: 100~110℃加热10分钟.
(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin试剂): 检查氨基酸.
喷洒剂: 新鲜制备0.02克1,2-萘醌-4-磺酸钠,溶于100毫升5%碳酸钠中.
喷洒后处理: 室温放于,不同氨基酸出现不同颜色.
有机酸
(36) 酸碱指示剂: 检查有机酸.
喷洒剂: 0.05%溴酚蓝(或溴甲酚绿,或溴麝香草酚蓝)的乙醇溶液.
(37) 氧化还原显色剂: 检查有机酸.
喷洒剂: I. 0.075%溴甲酚绿及0.025%溴酚蓝的无水乙醇液.
II. 0.5%高锰酸钾及1%碳酸钠.10H2O的蒸馏水液.临用前,取I和II按1:1混合后喷酒.
喷酒后处理: 稳定时间为5~10分钟.对不同的有机酸在纸谱上呈现不同颜色.
(38) ? (Acridine): 检查酸.
喷洒剂: 0.005%的乙醇溶剂.
紫外线分析灯下呈黄色荧光.
(39) 芳香胺-还原糖: 检查酸.
喷洒剂: 芳香胺(如苯氨5克)和还原糖(如木质糖5克)溶于50%含水乙醇中.
喷洒后处理: 125~130℃加热出现棕色斑点.
实验16 氧化苦参碱的提取和鉴定
中药苦参是豆科植物苦参(Sophors Flavescens Ait)的干燥根,味苦,性寒,有清热燥湿,杀虫等作用.临床上用于治疗痢病,黄胆和皮肤瘙痒症.近年还发现具有抗肿瘤,升白,抗病毒性肝炎等药理作用,苦参中主要含生物碱,此外还有黄铜类成分.
一, 苦参中主要已知生物碱的结构和性质
1.氧化苦参碱（oxymarrine）C12H24N2O2，白色棱晶，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，不溶于乙醚，苯。溶点：207～208℃（不含结晶水）162～163℃（含一个结晶水）77～78℃（含多个结晶水）结晶水可在145～150℃／0。002mmHg下除去，可于许多金属离子如Fe2＋ Cu2+ Cr3+等生成沉淀，［α］？？＋47.7℃(乙醇).
2.苦参碱(matrine)C15H24N2O在轻石油醚中结晶时，由于温度等条件不同，可以得到αβδ三种结晶（溶点分别为76℃ 87℃ 84℃）和一种流体即γ型。通常室温下结晶得到的是α型，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，溶于苯，在乙醚中溶解度小。［α］？？＋39.11[乙醇]
3.脱氢苦参碱(槐果碱)（sophocarpine）C15H24N2O白色棱晶。溶点80～81℃，易溶于甲醇乙醇氯仿，略溶于苯和乙醚，在水中溶解度小。［α］？-29.44(乙醇)
4.槐定(sophoridine)C15H24N2O白色棱晶，溶点106～108℃，为苦参碱的一种空间异构体。
二．实验目的与要求
（1）通过苦参生物碱的提取掌握用渗滤法和离子交换法提取生物碱的方法。
（2）掌握沙氏提取器的使用方法。
（3）掌握氧化铝吸附薄层层离法和柱层层离法鉴定和分离生物碱的方法。
三．原理
氧化苦参碱为喹诺里西汀类生物碱，叔胺氮氧化合物与酸成盐溶于水与非生物碱分开，提取的生物碱盐的阳离子部分与H+型树脂发生交换生物碱吸附在柱上，吸附有生物碱的树脂，碱化呈游离生物碱，可被氯仿等有机溶剂提取。
R-SO3-Na+ ＋ H+CL- ――>R-SO3-H+ + NaCL
SO3Na + H2O
生物碱
四. 实验方法.
1 酸水提取和离子交换
（1）渗漉法
取苦参碱400克,加入适量0.5%(g/v)的盐酸湿润后放置一小时，装入渗滤液的PH值及生物碱反应，使渗滤液通过离子交换脂柱，待经过树脂柱的滤液生物碱反应或微弱的反应时，停止交换，将树脂倒入烧杯中，酮蒸馏水洗涤几次，滤干，树脂放入搪瓷盘中自然晾干。
（2）浸提法
300克？？0.5HCL(g/v) 6倍量浸泡48小时，浸出浸液。在处理1～2次，2次浸液全体合并。
2 总生物碱的洗脱
将晾干的树脂放入烧杯中，加14％氨水，搅匀，使温度适宜（树脂充分膨胀，但又无过剩的水）约用氨水30～60毫升，静置20分钟后，装入沙氏提取器中，用400毫升95％的乙醇回流洗脱4～5小时（或用氯仿回流提取5～8小时）回收溶剂至干，所得浸膏用70～80毫升氯仿溶解，并转入分液漏斗，充分静置后，弃掉上层油状物，过滤氯酚溶液后用无水硫酸钠干燥，回收氯仿至干，残留物用2～3倍量丙酮处理，即析出固体粉末，放置，过滤，得生物碱粗品，丙酮重结晶一次得浅黄色产品。
3 苦参生物碱的氧化铝薄层鉴定。
样品：氧化苦参碱标准品，粗品，母液
溶剂系统：氯仿：甲醇＝19：1（二次展开）
石油醚：乙醚：甲醇＝9：9：1
显色剂：改良碘化铋钾（改良Dragendorff）
4 氧化苦参碱的分离与纯制
（1）取0.2克氧化苦参碱粗品用少量氧化铝搅伴,30克氧化铝(80~120目,I~III)装柱(1＊45),先加30毫升氯仿洗脱,再用氯仿和甲醇(99:1)混合溶剂洗脱.速度控制在1毫升/分左右,每10毫升收集一份,经薄层检识,将氧化苦参碱的流份合并,回收溶剂至干,用少量丙酮溶解,放置吸晶,得氧化苦参碱纯品,薄层检识后,干燥,侧溶点.
（2）苦参总碱0.1克进行低压柱层析
吸附剂:薄层用硅胶15克(已用NH4OH减活)
洗脱剂:CHCL3 50毫升,CHCL3-MeOH(98:2)100毫升,(95:5)100毫升,MeOH100毫升
流速1毫升/分 10毫升收集一份.
5. 氧化苦参碱的还原
取氧化苦参碱粗品1.0克,溶于15毫升10%盐酸水溶液中,放入1.0克锌粉,室温放置,不时摇动,放置24小时后过滤,浓度调到PH=9~10,用500毫升乙醚分多次提取.合并乙醚溶液,无水硫酸钠干燥过夜,回收乙醚淡黄色粘稠体放置于冰箱中,得浅黄色固体,石油醚重结晶后得白色结晶,测熔点.
薄层检识
氧化铝干板(120目以上)
样品:苦参碱标准品,氧化苦参碱标准品,苦参碱
溶剂系统:氯仿:甲醇=8:2
显色剂:改良碘化铋钾溶液
附:阳离子交换树脂的处理
(1)预处理及转型:
将100克聚苯乙烯磺酸钠型树脂(交联度1~7%粒度范围16~50目)放入烧杯中,用80℃蒸馏水温热使之充分膨胀1小时,后加入2N盐酸300毫升洗,水洗至PH5~7,5%NaOH浸泡1H?浸泡过夜(注意开始要搅动几次).次日把树脂装入层离柱,并使全部酸液流过树脂柱,用蒸馏水洗至中性至无氯离子反应为止,可用于无生物碱交换.
(2)再生
将已洗去生物碱的树脂,置渗滤筒中,加2倍的2N盐酸浸泡过夜,次日树脂上面的盐酸慢慢流过树脂,用水洗至中性,然后用5%的氢氧化钠浸泡1~2小时,时常搅伴,倾倒出上层碱液,用馏水洗至中性,在空气中晾干,留作下一次使用.
四. 思考题
1.酸水法及离子交换树脂法提取分离生物碱的原理.
2.应如何检查 (1)渗滤液中是否含有生物碱?
(2)渗滤液中生物碱是否可以被交换在树脂上?
(3)离子交换树脂是否已达到饱和?
3.氧化铝薄层层析的原理是什么?适用于什么成分的分离鉴定?
4.当用硅胶薄层板层析时应如何操作?
五. 参考文献.
1.江苏中医学院:中药大辞典 上海人民出版社 1977年
2.张宁芳: 中草药通讯1977(1):38 1977(2):39. 1977
3.中国医科院第五研究室: 放射医学 1977(1):1.1977
4.白世泽等: 中草药 13(4);8.1982
5.Shigenobu Okuda : Chem Pharm Bull 13:485.1965
实验13 芦丁的提取,分离及鉴定
芦丁(Rutin)亦称芸香苷（Rstinoside），广泛存在于植物界中，其中以槐米和荞麦叶的含量较高，可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物，Sophora japonica的花蕾，自古作为止血药。槐花米中所含主要成分芸香苷有减少毛细血管的通透性作用，临床上主要为防止高血压病的辅助治疗药物。此外，芦丁对于放射性伤害所引起的出血症亦有一定作用。
一．实验的目的和要求
1．以芦丁为实例学习黄酮类成分的提取分离方法。
2．掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，甙元和糖部分的鉴定方法。
3．通过？皮素紫外吸收光谱的测定及应用化学位移确定黄酮类烃基位量的方法。
4．通过？皮素与其五乙酰化合物的红外光谱测定该化合物的功能团并与标准谱对照。
二．槐花米中已知主要成分的理化性质：
槐花米中芦丁的含量可高达20％，另含少量的皂苷，皂苷水解后，可得到桦皮醇（Betulin C30H50O2）及槐二醇（Sophoradiol，C30H50O2）。
1．芦丁（芸香苷 Rutin）
本品为淡黄色细小针状结晶，C27H36O16。3H2O，MP为177～178℃，无水物MP190℃（不完全），214～215℃发泡分解。芦丁溶于热水（1：200），难溶于冷水（1：8000）；溶于热乙醇（1：7），冷乙醇（1：100）；热乙醇（1：30）。冷乙醇（1：300），难溶于乙酸乙酯，丙酮，不溶于苯，氯仿，乙醚，及石油醚等溶剂。易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。
2．？皮素（Quercettin）
即云香苷苷元，为黄色结晶，C13H10O7，MP313～314℃，无水溶点316℃。？皮素溶于热乙醇（1：23），冷乙醇（1：300）。可溶于冰醋酸，吡啶，乙酸乙酯，丙酮等溶剂。不溶于石油醚，苯，乙醚，氯仿和水中。
3．皂苷
易溶于水，吡啶，能溶于甲醇。经酸水解后得桦皮醇及槐二醇，均溶于苯，乙醚，氯仿，丙酮，乙酸乙酯，乙醇，甲醇。
三．自槐花米中提取芦丁：
1．提取方法：
方法1 ：取槐花米40克（完整），置于100毫升烧杯中，用冷水快速清洗去泥沙等杂质沥干水，加0.4％硼砂水沸熔液400毫升,直火加热微沸,即时侧PH值,当PH数值改变成微酸性时,以石灰乳调至PH8,继续加热微沸30分钟,随时补充水份,同时保持PH8,静置约5~10分钟,倾出上清液,用尼龙布过滤,重复提取一次,合并滤液,将滤液用盐酸调至PH3左右,再加泥泊金,放置过夜,抽滤用水洗3~4次,空气自然干燥得粗芦丁.
方法2：取槐花米20克,置于500毫升圆底烧瓶中,加乙醇150毫升,加热回流1小时,稍冷后抽滤,滤渣再加乙醇100毫升回流1小时,合并乙醇提取液,放冷,析出絮状沉淀.过滤,滤液浓缩至50毫升,放置过夜,析出结晶,滤去母液继续浓缩一半,放置又析出结晶.合并结晶,用乙醚30~50毫升分次洗去脂溶性成分(油脂,叶绿素等),再用丙酮10毫升洗涤一次,得粗芦丁.
2．重结晶方法
方法一：取粗芦丁2克，加乙醇50～60毫升加热溶解，呈热抽滤，将滤液浓缩至20～30毫升，放置，析出结晶，母液再浓缩一半，又析出结晶。合并结晶再用乙醇重结晶一次。
方法二：取粗芦丁2克，加去离子水或蒸馏水400毫升，加热煮沸，趁热煮沸，趁热抽滤（以滑石粉助滤）；放置过夜析晶（或放冷析晶）。抽滤。得精制芦丁。
思考题：提取芦丁工艺中影响产量和质量的因素是什么？为什么药加硼砂水溶液？
记录：粗芦丁得率多少？精制芦丁得率多少？溶点？
3．芦丁的水解
取芦丁1克，加2％H2SO4 80毫升，小火加热微沸回流30分钟至1小时。开始加热10分钟为澄清溶液，逐渐析出黄色小针状结晶，即？皮素，抽滤取结晶（保留滤液20毫升，以检查其中所含单糖），加50％乙醇（按1克90毫升量）加热回流使？皮素粗晶溶解，趁热抽滤，放置结晶，抽滤得精制品，在减压下110℃干燥可得？皮素无水物。测熔点，进行纸层析法鉴定。
思考题：芦丁水解不完全时将产生什么结果？
记录：芦丁的水解产物是什么？主要产物得率？溶点？
四．芦丁，？皮素，糖及？皮素衍生物的鉴定：
1．纸层析：
新华一号层析滤纸
样品：自制芦丁，？皮素
对照品：芦丁，？皮素
展开剂：（1）正丁醇－醋酸－水（4：1：5上层或4：1：1）
（2）25％醋酸水溶液
（3）85％醋酸水溶液
显色： （1）可见光下观察，再在紫外灯下观察
（2）经氨气熏后再观察
（3）喷三氯化铝试剂后再观察
2．芦丁和？皮素的聚酰胺薄层鉴定：
样品：同纸层析
展开剂：乙醇－水（7：3）
显色：同纸层析
3．糖的检出――纸层析法
取上述滤出？皮素时保留的水解滤液200毫升，加Ba(OH)2细粉（约2.ǚ克）
中和至PH7,滤除生成的BaSO4沉淀(可用滑石粉助滤),滤液浓缩至1毫升,供纸层析法点样用.
展开剂：正丁醇－醋酸－水（4：1：5上层或4：1：1）
对照品：葡萄糖，鼠李糖水溶液
显色剂：苯氨邻苯二甲酸试剂喷后，105℃烘10分钟，显棕色或棕红色斑点。
4．红外光谱测定：
5．？皮素五甲醚的制备：
取？皮素结晶400Mg置于150毫升三颈瓶中，加50毫升无水丙酮，装上电动搅拌器，冷凝管及温度计，加热回流搅拌，每间隔一适当时间加入无水碳酸钾0.2克和硫酸二甲醇0.2毫升,大约1.5小时后加完4克无水碳酸二甲酮,继续加热回流搅拌直至溶液黄色完全消退为止,约需4~5小时,停止加热,取下烧杯,反应液经过滤,沉淀用热丙酮洗涤数次,合并系,滤液,蒸馏回收部分丙酮,留存10~15毫升,放置,渐渐析出无色结晶,表示过?的硫酸二甲酯存在,应加5%NaOH数滴,振摇使硫酸二甲酯水解,此时又可析出一小部分结晶(检查所析出结晶对1%FeCL3的反应,甲基化完全者呈负反应),合并,以乙醇重结晶,得?皮素五甲醚(MP152~153℃).甲基化不完全者时对三氯化铁出呈正反应,主要产品为3,7,3”,4”甲醚,MP161~161.5℃.
6．？皮素的降解
取？皮素50Mg，置于50毫升的圆底烧瓶中，加水50毫升，乙醇6毫升，KOH？，置水浴上加热回流10小时，蒸去乙醇，加水50毫升溶解，用稀盐酸酸化至PH2～3，用乙醚萃取3次，合并乙醚液，回收乙醚，蒸滞小体积供薄层层析点样用。
7．？皮素降解产物的薄层层析：
硅胶－CMC－Na薄层
对照品：原儿茶酸（Protocatechuic acid），间苯三酚9Phlorogluoinol)。
展开剂：氯仿－丙酮－醋酸（8：2：0.5）
显色剂：三氯化铁试剂
思考题：
（1）芦丁和？皮素用不同展开剂系统展开层将出现什么结果？为什么？
（2）芦丁和？皮素聚酰胺薄层将出现什么结果？为什么？
（3）试比较？皮素红外光谱图和五酰基？皮素红外光谱图的差异。
记录：
（1）芦丁和？皮素的纸层析，聚酰胺薄层层析结果。
（2）糖的检出纸层析结果。
8．紫外吸收光谱测定？皮素
（一）原理
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断该化合物烃基的额位置。
（二）试剂配制
1．无水乙醇：用分析纯的甲醇，加入10％CaO，放置24小时后并加热回流1小时，回流时冷凝管顶端应安装CaCL2干燥管，然后蒸馏得无水甲醇。
2．甲醇钠溶液：取0.25克金属钠,剪碎,小心的加入无水甲醇50毫升中,放置24小时后全溶.
3．氢氧化钠溶液：取2.5克无水三氯化铝,加10毫升水溶解.
4．三氯化铝溶液：2.5克无水三氯化铝(呈黄绿色)小心的加入无水甲醇50毫升中,放置24小时后全溶.
5．醋酸钠：用水粉状醋酸钠。
6．硼酸饱和液：将无水硼酸加入适量无水甲醇，制成饱和溶液。
依照上述方法制备的贮备液可放置6个月。
(三)．测定方法：
1．酮烃基位置的测定：
精密称取黄酮样品（？皮素）约１.２mg，用无水甲醇溶解，在稀释至100毫升。
（1）黄酮光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯（1CM）中，在200～300nm波段内进行扫描。重测一次，视光谱的再现性。
（2）氢氧化钠光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯中，加入氢氧化钠溶液2～3滴立即测定。放置5分钟后，在进行测定。
（3）甲醇钠光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯中，加入甲醇钠溶液5～7滴后，立即测定。放置5分钟后，再进行测定。
（4）三氯化铝光谱：在盛有约3毫升样品溶液的石英杯中，加入三氯化铝溶液6滴，放置1分钟后进行测定。测定后，加入3滴盐酸溶液（浓盐酸：水＝1：1），再进行测定。
（5）醋酸钠光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯中，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀；杯底剩有2mm的醋酸钠后，二分内进行测定。
（三）测定结果：
？皮素加位移试剂结界表（）
| 加入试剂 | 编号 | II峰 | I峰 | 位移值 | 羟基 |
| 无水甲醇 | 1 | 256 | 371 | ||
| NaOH | 2 | 430 | I峰△59 | 4‘－OH | |
| NaOH 5‘ | 2‘ | 分解 | 分解 | 3，4‘－OH | |
| MeONa | 3 | 416 | I峰△45 | 3－OH | |
| MeONa5 | 3‘ | 分解 | 分解 | 3，4‘－OH | |
| ALCL | 4 | 270 | 450 | I峰△79 | 3，5及3‘，4‘－OH |
| ALCL，／HCL | 4‘ | 265 | 425 | I峰△54 | 3，4‘－OH |
| NaAc | 5 | 277 | 387 | II峰△21 | 7－OH |
| NaOAc／H3BO3 | 6 | 259 | 385 | I峰△14 | 3，4‘－OH |
记录：
（1）位移测定结果
（2）测定克分子吸收系数皂吸收峰前后20nm波长范围内，依次测定波长和吸收值，用方格纸作图，精确的测出吸收峰的波长和吸收值，记录测定结果。
实验三 薄层层析应用
定形点滴反应
鉴别天然产物中的化学成分,类别,纯度和异同.
薄层板上原位化学反应
一.定性点滴反应
1.样品
(1).氨基酸混合液
(2).薄荷油
(3).芦丁甲醇溶液
(4)甘草次酸乙醇液
(5)原儿茶酸乙醇液
(6)小檗碱乙醇液
2.检出试剂
(1).三氯化铁1%乙醇溶液
(2).三氯化铝1%乙醇溶液
(3).茚三酮0.2%乙醇溶液
(4).碘化铋钾(见附录I)
(5).*香草醛-硫酸 0.5%硫酸-乙醇(4:1)溶液
(6)酸5%乙醇溶液.
3.实验方法.
取硅胶CMC-Na薄层板1~2块,用软铅笔按下图划线,构成方格,将各样品先滴加于相应的格子中,再将各试剂分别自空白其5逐点点加试剂,观察并记录反应变化.具腐蚀性试剂也可用空白磁板.
| (1) | (2) | (3) | (4) | (5) | (6) | (7) | |||
| 空白 | |||||||||
| (1) | |||||||||
| (2) | |||||||||
| (3) | |||||||||
| (4) |
二.鉴别中草药中的化学成分
1. 单向展层
例一. （1） 硅胶 CMC-Na 薄层 (载玻片板)
(2) 样品 薄荷油,薄荷脑的0.1%乙醇溶液
（3）展开剂 ①石油醚
②乙酸乙酯
③石油醚－乙酸乙酯（85：15）
（4）显色剂 香草醛－硫酸（压板法）
点样展层后，稍干，后扣在一块同样大小并涂布一层（不可多加，多了会使斑点扩散）显色剂的玻璃板上，压紧稍后一下，取除玻璃片，使薄层面向上，观察层面向上，观察颜色变化。由结果判断何种展开剂最适合分离薄荷油？
例二． （1）硅胶CMC—Na薄层（载玻片板）
（2）样品四季青提取物
原儿茶碱（Protocatechuic Acid）1％乙醇溶液
原儿茶碱（Protocatechuic Acid）1％乙醇溶液
（3）展开剂 ① 石油醚
②氯仿
③甲醇
④氯仿：丙酮（8：2）
⑤氯仿：丙酮：甲醇：醋酸（7：2：0.5：0.5）
(4) 显色剂 三氯化铁 1%乙醇溶液
由展层结果判断选用何种展开剂为最合适?展开剂⑤中为何药加醋酸。
2 双向展层
（1）硅胶CMC-Na薄层板（8＊8cm），不活化。在薄层板距两边各1.5cm交点的地方点样品。
（2）样品？？氨基酸（精氨酸，脯氨酸，亮氨酸的1％水溶液）
（3）展开剂：第I向为正丁醇－醋酸－水（4：1：1）（V/V）
第II向为苯酚－水（75：25）（W/W）（苯酚需要蒸后使用）
第一向展开剂展层后，用热风吹使溶剂挥发，再将样品已展层的一向作起始线，在第II向溶剂中展开。
（4）显色剂：0.2％茚三酮乙醇溶剂，喷洒后，以电吹风见加热（110℃）显色，观察各斑点的颜色变化。最后喷洒2％硫酸》水溶液固色。
3．银－硅胶薄层
（1）银硅胶悬浮浆的制备（2.5％AgNO3制硅胶薄层）：用20克硅胶G和55毫升水中含5g银（8％）的溶液调制成，阿波常法捕薄层板（4＊7cm，约30块）。避光阴干后于105℃活化半小时避光储存备用。
（2）样品：1，龙脑 2，香橙醇 3，牛龙牛儿醇
（3）展开剂：10％的硫酸乙醇液 二氮甲烷：氯仿：乙酸乙酯：正丁醇＝45：45：4.5：4.5
（4）显色点：110℃加热
三． 薄层板上原位化学反应
本法使直接在薄层板上进行的化学反应，又称原位反应薄层。先将样品滴加在薄层板上，然后滴上适当的溶剂展开反应物。有时先在试官内进行反应，而后在薄层板上进行层析检识。根据原化合物的Rf值再联系产物的层析行为，Rf值，可供鉴别一个化合物或者提供鉴定一个化合物有价值的线索。应用这些特殊反应只消耗未知物极微量的样品却提供了有关结构鉴别的信息，操作简便。如氧化，还原，脱水，水解，卤代，酶的催化作用，酯化，硝化，衍生物的制备，混合反应等均可在薄层板上进行。例：
1．酯化反应
（1）取原儿茶酸乙醇溶液，在一薄层板上点两个相同的样点，其中一份样点的原点上，再点加试剂：醋酸－吡啶（3：1），待溶剂挥发后，再重复点加试剂几次，干后，以氯仿－丙酮（8：2）展开。（用点蒸气熏显色，可见其中点加醋酐吡啶试剂的样点已展来在前，而未加试剂的样点仍在起始线）。两者Rf值不同的理由是：？
（2）取原儿茶醛乙醇，在同一薄层上点加两个相同的样点，其中一分样点的原点上，在点加酸酐－吡啶（3：1），待试剂挥散后，在重复点加试剂数次，用氯仿－丙酮（8：2）展层。用2，4二硝基苯肼显色，可显示加酰化剂前后样品点有什么变化。
2．成盐反应
取原儿茶醛乙醇溶液，在同一薄层板的起始线上点加2个相同样点，其中一份样点的原点上，再点加10％碳酸氢钠溶液（另一份不加），以氯仿－丙酮－甲醇（8：2：1）展层，并用三氯化铁乙醇溶液喷雾显色，可见其中点加碳酸氢钠的样点Rf值已有变化，未加碱的样点照常展开。为什么？
3．苯氨反应
取原儿茶碱乙醇溶液，在同一薄层上点两个相同的样点，其中一份样点的原点上，在点加2，4二硝基苯肼试剂，给以热风以促使呈腙反应，然后以氯仿－丙酮（8：2）展层，可见出现两个棕红色斑点。在红棕色斑点下，再喷以三氯化铁试剂，又出现紫蓝色斑点。上面的红棕色斑点是原儿茶碱与2，4－二硝基苯肼所形成的胺，下面紫蓝色斑点是剩下的部分未成腙的原儿茶醛。2，4－二硝基苯肼的斑点呈黄色，Rf值最大。
由原位反应的结果判断原来化合物的结构上有何集团特征。并绘制出薄层层析图谱。
4 化合物纯度的检测：
（1）化合物纯度的检查，可采用的方法测溶点，对纯品而言，溶点距1～2℃之间
（2）HPLC法显示一个主降 按面积归一法，应.>95％
（3）薄层层析法，按药典规定制备薄层点样100μg 展距17cm 未见杂质斑点，操作同上，只是需配制一定浓度的检测液定量点样。
实验四 纸层析的应用
鉴别天然产物中的糖类,氨基酸等极性化学成分常被采用.
多缓冲溶液和碱性纸层析法的应用(原理属分配分离)
一. 混合单糖的PC
(1). 层析滤纸按纤维长丝方向(纵向)切成适当大小的纸条,在一端2cm处用铅笔划一条线为起始线，在起始线上点样，点样斑点的直径小于0.3cm，点间距1～1.5cm。
（2）样品：2.5％葡萄糖 鼠李糖混合溶液
（3）展开剂：正丁醇－醋酸－水（4：1：1或4：1：5上层）
（4）显色剂：邻苯二甲酸－苯氨试剂*喷雾后于105℃加热10分钟。呈现桃色或棕色。
记录：贴PC滤纸条
葡萄糖Rf：
鼠李糖Rf：
二．混合氨基酸的PC－阿胶水解液
（1）层析滤纸5*20cm一张，点样同上。
（2）样品：阿胶酸水解液，猪阿胶酸水解液
（3）展开剂：正丁醇：甲醇：水（15：3：2）
（4）显色剂：0.2％茚三酮乙醇液
记录：贴PC滤纸条
比较二种阿胶所含氨基酸是否一样
三．多缓冲液和碱性纸层析法
（一） 蒽醌衍生物的分离
＊ 苯氨－邻苯二甲酸试液为苯氨0.93克和邻苯二甲酸1.66克溶于100毫升正丁醇（用水饱和）中。
（1）缓冲滤纸的制备：取新华滤纸（3*12cm）一张，距下端2cm处划一起始线，向上面每隔1.5cm划一平行线按右图在各条带上图布PH缓冲液和碱液，然后将其夹在两片滤纸中吸至半？使润湿指数为1.5倍）备用。
（2）样品：大黄素（Emodin） 大黄素甲醚（Physcion） 芦荟大黄素（Aloe-emodin）
大黄酸（Rhein）的氯仿溶液。
（3）点样：每隔2cm点样。
（4）展开剂：氯仿
（5）显色剂：荧光检出
（6）结果：记录图谱，并说明这些化合物的酸度。
［附］ PH缓冲液的配置：
PH3：取0.2M磷酸氢二钠溶液4.1ml加0.1M柠檬酸15.毫升配成。
PH5：取0.2M磷酸氢二钠溶液10.30ml加0.1M柠檬酸9.70毫升配成。
PH8：取0.2M磷酸氢二钠溶液19.45ml加0.1M柠檬酸0.55毫升配成。
PH9.9：取0.1M NaCO3 5ml加0.1M NaHCO3 5毫升配成。
0.2M Na2HPO4 溶液含35.61克／升
0.1M柠檬酸溶液含21.01克／升
0.1M NaCO3溶液含28.62克／升
0.1M NaHCO3溶液含8.40克／升
（二） 叔胺碱的分离：
（1）缓冲滤纸的制备：操作同上，配置五种不同的PH值的缓冲液，PH值分别为6.0，5.4，5.0，4.6，4.0。
（2）样品：粉防己甲素（Tetrandrine） 粉防己乙素（Fangchinoline），轮环藤酚碱（Cyclonoline），粉防己总生物碱乙醇液。
（3）展开剂：氯仿
（4）显色剂：改良碘化铋钾
（5）结果：记录图谱，并说明这些生物碱的碱度强弱。
［附］ PH缓冲液的配制：
PH4.0：取0.2M Na2HPO4 溶液7.71毫升加0.1M柠檬酸溶液12.29毫升配成。
PH4.6：取0.2M Na2HPO4 溶液9.35毫升加0.1M柠檬酸溶液10.65毫升配成。
PH5.0：取0.2M Na2HPO4 溶液10.30毫升加0.1M柠檬酸溶液9.70毫升配成。
PH5.4：取0.2M Na2HPO4 溶液11.15毫升加0.1M柠檬酸溶液8.85毫升配成。
PH6.0：取0.2M Na2HPO4 溶液12.63毫升加0.1M柠檬酸溶液7.37毫升配成。
实验五 柱层析的应用
常压柱层析在中草药化学成分分离上的应用
低压柱层析在中草药化学成分分离上的应用
减压柱层析在中草药化学成分分离上的应用
干柱柱层析在中草药化学成分分离上的应用
一．常压柱层析：
1．四季青中酚性化合物（原儿茶酸，原儿茶醛）的分离
原儿茶酸（Protocatechuic acid C7H6O4，3,4－二羟基苯甲酸）无色针晶，溶点198～200℃。易溶于水 乙醇 乙醚 丙酮 醋酸乙酯 ，难溶于苯 氯仿。
原儿茶醛（Protocatechuic aldehyde C7H6O3 ，3,4－二甲基苯甲醛）；植物体内存在量少，不稳定，易氧化，熔点153～154℃
操作步骤：
（1）硅胶（100～160目，活度，Ⅴ级）6克，干法装柱。
（2）样品：5mg加洗脱剂5毫升加热溶解后过滤，用吸管吸取滤液加入柱顶。
（3）洗脱剂：石油醚／醋酸乙酯（4：6）。（先配50毫升，然后再酌量配）。
（4）收集洗脱剂：用小三角并收集每份10毫升（共收集10份）。
（5）检出：取硅胶CMC-Na小板一块如图画小格，用毛细管吸取各分洗脱液分别滴在各小格内，然后用毛细管取检出试剂* 滴在检品处，观察结果，另一格子只滴出试剂进行空白对照。
| 试剂空白 | |||||||||||||||
| 样品＋试剂 | |||||||||||||||
| 试剂空白 | |||||||||||||||
| 样品＋试剂 |
当检出洗脱液至无肼的橙色斑点出现时改用氨性银试剂检出原儿茶酸。当正反应时应使银－氨络离子的溶液中的银离子被原儿茶酸的邻二酚烃基还原成金属银呈黑色斑点反应。可加热促使分解。
从反应结果可判断出哪几个流份含有原儿茶醛，哪几份含原儿茶酸，或为空白流份。然后将这些流份分别浓缩后点样进行薄层层析检出，薄层层层析条件：硅胶CMC－Na薄层板。展开剂： 氯仿：丙酮：甲醇：醋酸＝7：2：0.5：0.5
，显色剂：25的三氯化铁乙醇溶液显色，按展层结果合并相同流份，常压回收洗脱液至小体积，抽松后用乙醇为溶剂重结晶。抽滤得晶体，取少量晶体以少量乙醇溶解后再进行薄层层析，展层，观察是否为单体，就可以测熔点进行初步鉴定。已知或合物可作红外吸收光谱图与标准图谱对照证明。
记录各流份的点滴反应，薄层层析的结果（绘出图谱），写出所得单体的熔点数据。以初步判断所得化合物是什么化合物？
2．穿心莲中二萜内酯化化合物（穿心莲内酯，新穿心莲内酯）的分离。。。。
穿心莲内酯（Andrographolide C20H30O6 穿心莲乙素），无色方形或长方形结晶，熔点230～231度。。 味极苦。可溶于甲醇，乙醇，丙酮，吡啶中，微溶于氯仿 乙醚 ，难溶于水及油醚。
新穿心莲内酯（Neo-andrographolide C26H40O8 穿心莲丙素 穿心莲新甙） 无色柱状结晶，熔点168～169度。。。苦味，可溶于甲醇，乙醇，丙酮，吡啶，微溶于氯仿和水，不溶于乙醚和石油醚.
操作步骤:
取中性氧化铝(100~200目,加入8%水振摇均匀使活度呈6级)6克(按样品:吸附剂=1:300量),先加入二氯甲烷,并打开柱下口活塞,湿法装柱.
取穿心莲内酯为主的精制品20mg置于蒸发皿内，用刮刀压碎后加0.4ml的甲醇溶解，再加入中性氧化铝半牛角勺（约0.3g）拌匀后再红外灯下干燥，并用刮刀亚成散粒，然后加到柱顶，呈均匀薄层带。将一滤纸片（直径小于层析柱的内径，滤纸片打小孔，平铺在样品层上。首用洗脱剂要保留柱顶）。
按梯度洗脱，先以二氯甲烷洗脱，用小三角瓶收集洗脱液，硅胶板上检查内酯成分出现时开始（用毛细血管滴下的洗脱液点在硅胶的薄层板上，用Kedde试剂检出，加热后出现紫色斑点）收集第一流份，每流份收集10ml。继以二氯甲烷：无水乙醇＝20：1洗脱，再改为二氯甲烷：无水乙醇＝9.6：0.4洗脱，再以甲醇洗脱，最后用50％甲醇洗脱。分别浓缩各馏份至小体积。然后每份点样于硅胶CMC-Na板上，并用对照品（穿心莲内酯，新穿心莲内酯）对照，展开显色条件：硅胶CMC-Na板，氯仿／甲醇（10：1）展开，Kedde试剂（3，5～二硝基苯甲酸碱性试液）喷雾，加热后显紫红色斑点，从TLC结果检查样品究竟含有几个穿心莲二萜内酯类化合物？记录TLC图谱结果。
说明：
柱层析时所用的仪器要干燥：
层析柱 1支 小三角烧杯 15只
吸管 1支 蒸发皿 1只
小漏斗 1只 量筒 1只
玻棒 1只 量筒 1只
二：低压柱层析
1．大黄酚 大黄素甲醚 大黄素的分离
大黄素（Emodin），橙黄色长针晶（丙酮）
mp。255～257度，能升华。几乎不溶于水，能溶于乙醇，可溶于Na2CO3 NH4OH 和 NaOH水溶液。溶解度（g/100ml）乙醚0.14，氯仿0.071，苯0.041，四氯化碳0.01（25度）。
大黄酚（Chrysophanol），金黄色六角形片状结晶（丙酮结晶）或针状结晶（乙醇）溶出？？？mp。196度，能升华。几乎不溶于水，微溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇，可溶于苯，氯仿，乙醚，丙酮，冰醋酸，NaOH及热NaCO3溶液，不溶于NaHCO3 Na2CO3水溶液，难溶于石油醚。
大黄素－6－甲醚（Physion），橙黄色针晶。 Mp207度，能升华。溶解性与大黄酚相似，可溶于NaOH水溶液。
操作步骤：
（1）薄层层析用硅胶H10克，湿法装柱。
（2）样品：总蒽醌粗品约5mg,加少量丙酮恰溶解后，在取少量硅胶拌合均匀，在红外线灯下红干，上柱。
（3）洗脱剂： 石油醚／醋酸乙酯（9：1），（8：2），醋酸乙酯，乙醇。
（4）收集洗脱液：视色带情况，收集每流份的量。
（5）压力：N2 0.5kg/cm2
（6）浓缩每流份至小体积。
（7）检查：
TLC：石油醚／醋酸乙酯（9：1）
PC：石油醚以水饱和
对照品：大黄素 大黄酚 大黄素－6－甲醚乙醇溶液。
显色：可见光下显亮黄色斑点。
紫外分析灯下显亮黄色斑点
氨熏显红色斑点
3％NaOH溶液或Na2CO3溶液喷后现红色斑点。
记录：TLC，PC结果，附图谱，检查每组分样品的纯度。
2．粉防己甲素和粉防己乙素的分离：
（1）粉防己甲素
无色针状结晶，mp。217～218度。＋297度（C1,CHCL3）。其盐酸盐MP。263度（较）266度（分解），其苦味酸盐MP。247度，》》＋286.7度（CHCL3），碘化二甲酸粉防己甲素（汉肌松，C40H48O6N2.I2）无色鳞片状结晶，mp。258～260度。。＋185度（MeOH）。粉防己甲素不溶于水，石油醚，易溶于乙醇 甲醇 丙酮 氯仿 和 苯中，也溶于稀酸水溶液。
（2）粉防己乙素 ：
所拥溶剂不同，结晶熔点不同。吡啶－甲醇中结晶，mp.121~122度；丙酮中结晶，六面体粒状结晶 mp134～136度；甲醇中结晶，细棒状体mp.177～179度；乙醇中结晶，细棒状，mp.241~242度。＋275度（C 0 .57 ，CHCL3）。其苦味酸盐 mp。186度 。。溴化二甲基粉防己乙素（汉松敏，C39H46O6N2Br2）无色针状结晶相似，极性较粉防己甲素稍高，故在苯中的溶解度小于甲素，而在乙醇中的溶解度大于甲素，借此可以相互分离。
操作步骤：
（1）薄层层析用的硅胶H20克，先用少量氨水饱和，湿法上柱。
（2）样品：粉防己生物碱的粗品10mg，加适量CHCL3溶解，然后用少量硅胶拌合均匀，在红外线灯下烘干，上柱。
（3）洗脱剂：氯仿／甲醇（9：1），（8：2），（7：3），（6：4）―――――》甲醇。
（4）检出试剂：碘化铋钾试剂
（5）收集：每流份10ml量
（6）压力：N2 0.5kg/cm2
（7）浓缩每流份至小体积
（8）检查：
硅胶CMC-Na
展开剂－－氯仿／乙醇（10：1）或（10：0.7），氨气饱和氯仿／丙酮／甲醇（4：5：1），氨水饱和。
显色剂――改良Drogendorff试剂
对照品――粉防己甲素乙醇液
粉防己乙素乙醇液
（9）记录：TLC结果，附图谱，检出每组分样品的纯度。
三．减压柱层析（VLC）（Vacuum Liguid Chromatography）
C20二萜生物碱 hetisine 和 hetisinone 的分离
操作步骤：
（1）VLC柱（15ml量垂熔漏斗）
（2）中性氧化铝5克
（3）样品：hetisine 16mg , hetisinone 16mg
（4）洗脱剂：甲苯／甲醇3～5％，甲苯／甲醇6～8％
（5）检查：TLC ， mp，IR
碘熏显色
Hetisine mp。 254～258度
丙酮／甲醇中重结晶
Hetisinone mp.267~269度
丙酮中重结晶
四．干柱层析法
从华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et wils 中分离五味子酯丁
五味子酯丁（Schisantherin D）
操作步骤：
（1）层析用酸性氧化铝（120～200目，3～6级）240克，装于直径2.5cm＊40cm的聚乙烯薄层膜柱中。
（2）样品1.4克溶于10毫升苯／醋酸乙酯（6：1）中，溶液加样。
（3）苯／醋酸乙酯（6：1）展层至柱顶。
（4）按TLC的Rf值推算带位置，也可以将一个展带再分成头，中，尾三段。用刀片切成段。
（5）各段分别置于适当的层析柱内，以醋酸乙酯洗脱，分别浓缩。
（6）TLC检查纯度
酸性氧化铝板 （3～？级）
苯／醋酸乙酯（6：1）
碘蒸气显色
实验六 离心薄层层析的应用
大黄素－6－甲醚 大黄酚的分离
丹参色素的分离：
一．利用离心薄层层析法分离大黄酚，大黄素－6－甲醚
大黄酚 大黄素－6－甲醚二化合物极性相近，相互分离较为困难，有人曾采用磷酸钙柱层析，以石油醚展来，下层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄酚，上层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄素－6－甲醚。但较费时，使用洗脱剂量大。本实验利用LBC－3型离心薄层层析仪快速分离大黄酚和大黄素－6－甲醚。
操作步骤：
（1）常规方法于转子上涂以1mm厚的硅胶G-CMC-Na（25～30g青岛海洋化工厂生产的硅胶G加入80～100ml0.4％CMC-Na水溶液，在乳钵中调匀辗磨成浆糊状）制备而成，阴干（约24小时）于70～90度的烘箱中活化2H，然后用1mm的刮板器修整转子备用。
（2）将制备好的转子装于LBC-3型离子薄层层析仪上，装样前，薄层转子先用洗脱剂预洗使洗脱剂达到饱和并除去硅胶中的杂质。
（3）取大黄酚 大黄素－6－甲醚的混合物15mg溶于1ml氯仿中，用2ml的注射器吸取0.5ml直接进样（先启动转子），使样品在转子内形成窄带。
（4）用石油醚（或环己烷）：醋酸乙酯（25：1）洗脱（可借助于流量计控制）以1.5ml／min的流速送入，每收集2～4ml为一流份，以硅胶TLC检测每一流份。合并相同，回收，纯化，以TLC和mp检查纯度？计算回收率？
（5）检测条件：
TLC：石油醚（30～60度）：醋酸乙酯（9：1）
PC：石油醚以水饱和
显色方法：
可见光下显黄色斑点
紫外线下显亮黄色斑点
氨熏，显红色。
3％NaOH溶液或Na2CO3溶液喷后现红色
二．丹参色素的分离
丹参色素多为橙色，红色至棕红色的化合物，少数为为黄色。这些化合物极性相似，采用一般的柱层析方法较难分离得到单体。
本实验采用离心层层析的技术进行分离
。。。。
操作步骤：
（1）硅胶CMC-Na离心薄层板（1mm厚）、
（2）总丹参醌混合物20毫克溶于2毫升氯仿，用注射器进样，使在转子内源形成均匀窄带图。
（3）洗脱剂：环己烷／醋酸乙酯（99：1）（98：2）（97：3）。。。1.5ml／min
（4）收集：按色带情况收集洗脱液。
（5）检查：TLC
硅胶G-CMC-Na板
展开剂：石油醚／醋酸乙酯（9：1）
可见光下观察色斑。
（6）记录：TLC结果。
实验十一 掌叶防己碱的提取及其衍生物的制备
掌叶防己碱，又称巴马汀（Palmatine），硫酸延胡索乙素又称消旋四氢巴马汀硫酸盐（dl-telrahydropalmatine sulphate）.
延胡索乙素（Coryadalis B）为镇痛安定药,用于缓解胃肠系统的疾病所引起的疼痛，临产阵痛，头痛，失眠等。用延胡索乙素为主要药物制成的药物制剂有“元胡止痛片”等。
13－甲基巴马汀（13－methylpalmatine）,又称去氢紫？碱（dehydrocorydaline）,或去氢延胡索甲素，临床可用于治疗冠心病和胃溃疡等症。用其为原料制成的药物制剂有“可达灵片”等。
中药延胡索（元胡，Corydalis yanhusuo W.T Wang）的块根属？？牡丹科紫堇属植物，其主要镇痛有效成分为去氢紫堇碱，氮其含量很少，为扩大药物资源，可用某些植物含其脱氢化合物巴马汀较多的特点，将其中的巴马汀提取后，再经氢化反应，制备延胡索乙素，或经化学结构的改造，将巴马汀转化为13－甲基巴马汀，以供临床应用。再中国华南一带的防己科天仙藤（Fibraurea recisa Paerre）的根茎即为一种巴马汀含量较多的植物。
黄藤层例入《本草纲目》，现代民间作为清热消炎药，常用于治疗外伤感染，扁桃体炎，咽喉炎，结膜炎，热痢及黄豆等。
一．实验目的和要求：
1．掌握季铵生物碱的特性及其一种提取方法。
2．熟悉生物碱沉淀反应的条件和方法
3．掌握制备生物碱结晶性盐的方法和精制
4．掌握四氢巴马汀的制备方法。
5．熟悉巴马汀转化为13－甲基巴马汀的过程，认识生物碱结构改造的重要性。
二．黄藤中已知成分的理化性质：
黄藤根茎及根中所含成分主要为巴马汀，还含少量药根碱 伪非洲防己碱 黄藤素甲 黄藤素乙 内酯及甾醇。又谓再根茎 根及树皮含小檗碱。
1．掌叶防己碱（巴马汀，Palmatine）
本品是季铵原小檗碱型生物碱，溶于水 乙醇，几乎不溶于氯仿 乙醚 苯等溶剂。掌叶防己碱盐酸盐即氯化巴马汀（Palmatine Chloride）C21H22O4N.I.2H2O为橙黄色针状结晶。
UV 。。。。。。。。。。。。。。。。
2．药根碱（雅脱碱，Jatrorhizine）
本品是具酚羟基季铵原小檗碱型生物碱，其理化性质与巴马汀相似，但较容易溶于柯性碱液中，其盐酸盐再水中的溶解度也比盐酸巴马汀大，可皆此性质分离。药根碱盐酸盐为铜色针状结晶，mp.204～206度，其苦味酸盐为呈黄色柱状结晶，mp.217～220度（dec.），其分子式为C20H20O4N。
3．小檗碱（黄连素，Berberine）
本品是季铵原小檗碱型生物碱，其游离碱为黄色长针结晶，C20H18O4N.OH.5 1／2H2O，mp.145度，在100度干燥，失去结晶水而转成棕黄色，小檗碱能缓缓溶于水（1：20），乙醇（1：100），较易溶于热水，热乙醇，热甲醇，微溶于丙酮，氯仿，苯，几乎不溶于石油醚中，小檗碱与氯仿 丙酮 苯均能形成加合物。
小檗碱盐酸盐C20H18O4N.CL.H2O，mp.205度（dec），微溶于冷水，较易溶于沸水，其盐及氢碘酸盐，极难溶于水（冷水约为1：2000）。小檗碱的中性硫酸盐，磷酸盐，醋酸盐在水中溶解度较大。小檗碱的盐类在水中的溶解度：
盐酸小檗碱 1：500
硫酸小檗碱 1：30（酸性盐1：100）
枸橼酸小檗碱 1：125
磷酸小檗碱 1：15
4．伪非洲防己胺碱（Pseudocolumbamine）
本品为具酸羟基的季铵伪原小檗碱型生物碱，额能溶于水，乙醇 甲醇 ，不溶于乙醚 苯等溶剂。其C20H20O4N.CL.2H2O呈黄色短针晶，mp.>300度（del）
5．四氢巴马汀（Telrahydropalmatine）
元胡索乙素为消旋四氢巴马汀，是叔胺原小檗碱型生物碱，其游离碱C21H25O4N，mp.146～148度，不溶于水，能溶于热乙醇（在冷乙醇中溶解度较小），易溶于氯仿 苯 乙醚中。元胡索乙素的酸性硫酸盐为无色针状结晶，mp. 245～246度，在冷水中溶解度较小，在热水中较大，其中性硫酸盐为长柱状结晶，mp.220度，在水中溶解度较酸性硫酸盐为长柱状结晶，mp.270度，在水中溶解度较酸性硫酸盐为大，其盐酸盐难溶于水。
左旋四氢巴马汀即为颅痛定（Rotundine）mp.141~142度
。。。。。。。。
6．各种原小檗碱型生物碱的紫外谱图特征如下所示：
三．巴马汀提取及延胡索乙素制备的方法
巴马汀为季铵生物碱，溶于水和极性大的有机溶剂（如甲醇 乙醇），所以可用甲醇，乙醇或水进行分离。巴马汀是有机碱，尽管它带正电荷，但和水的凊和力仍小于NaCL。NaCL和水的强清和力，降低了巴马汀在水中的溶解度，使它被挤出。
巴马汀盐酸盐在冷水中溶解度小（比盐酸小檗碱略大），可以用此性质进行分离。
1．流程
2．
（1）浸出：取黄藤粗粉100克，用1％的醋酸冷浸（以浸没原料为度，约500ml）1～2天，尼龙布过滤，药渣再加1％醋酸冷浸一天，合并滤液（甾取1ml作生物碱定性反应）。
（2）盐析 中和：滤液用40％NaOH液调节PH9同时加入7％精制食盐，即有黄色不溶物析出，80度保温，是沉淀凝聚，静置，倾出上层清液，用菊型滤纸过滤得巴马汀游离碱粗品，烘干。
（3）精制：将粗巴马汀，加入80％乙醇100毫升，加热回流使溶，约10分钟，乘热抽滤，残渣中在加少量乙醇同法处理一次，抽滤，最后用滴管去乙醇淋洗布氏漏斗上不溶物，合并滤液并向滤液中滴加6N盐酸至PH2放置，即有金黄色针状结晶析出，抽滤，再用乙醇重结晶一次，方法：将氯化巴马汀粗结晶置三脚烧瓶内，用滴管加入95％乙醇使结晶恰溶解（在水浴上加热），抽滤得澄清液，加塞放置析晶。若滤液在抽滤时也析出结晶，可将它在水浴上加热结晶全溶再加瓶塞放置，这样析出的结晶好。若滤液的体积太大，可浓缩至瓶壁边略显固体时加塞析晶。母液适当浓缩，又可析出一部分氯化巴马汀。
（4）甲基化：
1丙酮巴马汀的制备： 巴马汀氯化物5.0克，溶于75毫升水，加入350毫升丙酮；再加40％KOH75毫升，于分液漏斗振摇，静置分层，分出上层丙酮液。碱水层用150毫升丙酮再提取一次。合并丙酮液。于55度水浴上减压浓缩至几乎无丙酮，冰箱内过夜。从水液中析出粘稠的红色沉淀。倾出清液，水洗沉淀至无丙酮。沉淀经真空冷冻干燥即得。得率？？
213－甲基巴马汀碘化物的制备：将3.9克丙酮巴马汀中加水20毫升氯仿和2.5毫升碘甲烷。混合物移入封管中，100度加热1小时。待温度降至室温后，将内容物移至烧瓶中，蒸去溶剂，抽干。残渣用100毫升二氯甲烷回流1小时，乘热抽滤，除去不溶物的滤液蒸干，加甲醇75毫升，过滤，得黄绿色粉末，即为13－甲基巴马汀粗品。甲醇－二氯己烷混合液中重结晶，得黄色短棒状结晶，干燥后测熔点
（5）成盐：称取精制绿化巴马汀的还原产物元胡索乙素游离碱0.5克，置于25毫升锥形瓶（或小烧杯）中加90％乙醇4毫升，当水浴上加热使溶解，同粗毛细管滴加5％硫酸乙醇液至刚果红试纸呈淡蓝色（PH约为5）放冷析晶。将微黄柱状结晶，抽滤于50度以下干燥，即延胡索乙素中性硫酸盐。可用水重干燥一次，干燥后测熔点。
从醋酸水样提取，一般得率1～2％，用乙醇回流浸得率3～4％，取黄藤粗粉100克，用95％乙醇回流浸取三 四次合并乙醇浸出液，回收乙醇至120毫升，即可按（3）精制的方法操作，加盐酸得氯化巴马汀。
4．提取工艺说明
（1）黄藤中含有多糖类物质溶于水，往往影响水浸液盐析及中和后的过滤，故宜在静置后在倾泻去大量澄清液，再用布袋过滤收集沉淀。原料药材不易粉碎太细。
（2）氯化巴马汀为金黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光，四氢巴马汀为无色片状结晶，不具荧光，因此反应液的颜色可作为还原终点的判断，还原开始时，反应液为橙黄色，随着还原反应的进行了，反应液的颜色逐渐退去，至淡米色或无色即可作为反应的终点
（3）四氢巴马汀较易氧化成巴马汀，所以制备过程应尽快连续操作。
（4）四氢巴马汀的盐酸盐及酸性硫酸盐在水中的溶解度较小，故一般制成水溶液性较大的中性硫酸盐，供配制注射剂使用。
（5）13－甲基巴马汀碘化物的制备中，用二氯甲烷回流1小时并抽滤后的不溶物是一种黄色粉末，为此反应的副产物巴马汀碘化物。
方法二
1．流程
2．工艺：
（1）提取：黄藤粗粉20克，用95％的EtOH回流2次，每次1小时，乙醇用量为100毫升。合并二次醇提取液，浓缩至3～4毫升，用吸管转移到5毫升小锥形瓶中，放置，析晶，抽滤得巴马汀粗晶。
（2）分离：将巴马汀粗晶用10毫升水溶解后，抽滤。不溶物主要为黄藤内酯。滤液滴加HCL至PH2，再加10％NaCL进行盐析放置，析出黄色不溶物，抽滤得氯化巴马汀粗晶。
（3）精制：用70％EtOH热溶氯化巴马汀粗晶，过滤，滤液析晶，抽滤，得精制氯化巴马汀。干燥称重 克，测mp。？？？
（4）按？法一中工艺（6）项下的步骤进行。干燥称重？克，熔点？度。薄层检查纯度。
3． 巴马汀原位还原反应
再硅胶CMC-Na薄层板的起始线上点自制的巴马汀乙醇液，及对照品巴马汀乙醇液及四氢巴马汀乙醇液，然后再在自制的巴马汀的原点上加点2％KBH4甲醇液2～3次，吹干。氨缸中饱和后，以CHCL3－CH3OH（3：1）展开，改良碘化铋钾试液显色。巴马汀Rf值0.4左右，四氢巴马汀的Rf值约0.9。进行原位反应的巴马汀如氢化彻底，应和对照品氢化巴马汀的Rf值一致，如反应不彻底，则出现3个斑点，其Rf值与对照品巴马汀及四氢巴马汀一致。
四．薄层层析
硅胶－CMC-Na薄层
样品：巴马汀，小檗碱，药根碱，延胡索乙素，制备巴马汀后的母液，盐析后的水母液
展开剂：氯仿－甲醇（3：1），展开前薄层板先在氨缸中饱和5分钟。
显色：先在紫外灯下观察荧光，然后再喷以改良碘化铋钾试液显色。
如果用中性或碱性氧化铝薄层，展开剂可用氯仿。
记录：薄层层析图谱。说明各母液中还有什么化合物。
五．思考题
1．生物碱的溶解度有何规律？生物碱的溶解度与其结构有什么关系？
2． 1）下列溶剂中，那些适用于脂溶性生物碱的提取，哪些适用于季铵生物碱的提取？为什么？
乙醇 酸性乙醇 水 酸水 碱化后用苯提取
2）如果药提取小檗碱，用1％HCL水是否合适？为什么？
3）除本实验所用的反法之外，一般生物碱的提取与分离方法还有那些？
3．实验讲义上有二种提取分离的方法，各有何异同？各有何优缺点？哪些步骤可以改进，以利于提高产品的质和量。
4．在薄层检查中，样品被展开前为什么要预先用氨蒸气进行饱和？从中得到什么启示？
5．利用生物碱特性，你如何将小檗碱 巴马汀和药根碱进行分离？
6．在13－甲基巴马汀的制备中，你以为该如何处理或利用其副产物巴马汀碘化物？
六．记录要点：
1．原料的重量，产品的熔点，得量与得率，薄层层析的图谱。
2．简明额要的记录实验过程和出现的问题。
实验十二 粉防己生物碱的提取 分离和鉴定
粉防己甲素又称粉防己碱，汉防己甲素（Tetrandrine）。具有镇痛，消炎，降压，肌松，抗菌，抗肿瘤（但无骨髓抑制作用），抗肺，抗结核，抗心率失常（Ca据抗剂），抑制血小板凝集等作用。
粉防己乙素又称防己诺林碱，汉防己乙素（Fangchinoline），具有抗炎镇痛 降压 抗肿瘤 抗血小板凝聚的作用。
轮环藤酚碱又称汉乙素（Cyalanoline），为N-甲基取代的季铵原小檗碱型生物碱，具有松弛横纹肌 阻断神经节 降压 抑制胃收缩等作用。
临床上粉防己甲素用作治疗高血压 神经性疼痛和抗阿米巴原虫等。用其碘化钾基化或溴甲基化制成的汉肌松是一种疗效较好的肌肉松弛剂。通过钠氨还原裂解所得的其降解产物对大鼠心房有正性肌力作用，并具有较强的 ？受体据抗作用。
中药防己为一常用的中药，始载于《神农本草经》，列为中药。防己供药用的品种有9种以上，但以马兜铃科防己（Aristolochia fangchi）和粉防己科防己（Stephania tetrandra） 为我国主要商品。千金藤属的防粉己别名汉防己，石， 山乌龟，金钱吊，临床用于镇痛，抗炎，抗风湿，利脲，抗过敏性休克，解热等。其有效成分主为双？异喹啉型生物碱.
一.实验目的和要求:
1.掌握总生物碱的提取及脂溶性生物碱和水溶性生物碱的分离,纯化方法.
2.掌握脂溶性和水溶性生物碱的层析条件和方法.
3.熟悉生物碱降解反应的方法和作用.
二.粉防己根的已知主要成分的理化性质:
粉防己根中总碱含量约1.5~2.3%,主要为粉防己甲素,含量约为1%;粉防己乙素,含量约0.5%;轮环藤酚碱,含量约为0.2%;氧化防己碱(Oxofangchirine);防己菲碱(Stephanathrine)等.此外,通过TLC鉴定还推测含有头花干金藤碱(Homaromoline),左旋箭毒碱(l-curine),轮环藤碱（Cyclealine），木兰花碱（magnoflerine）黄酮及酚类化合物等。
1．
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