Luminex系统简介

南京军区福州总医院

二、适用范围：Luminex100TM 仪器。

三、支持性文件：Luminex 100TM IS 软件手册（2.3版）。

四、审核者：王庆华

五、Luminex系统简介

Luminex100TM 系统由分析仪，计算机，软件及试剂组成。分析仪包括光学、射流和高级信号处理系统。计算机通过Luminex软件和专有硬件控制分析仪。

Luminex100TM 是当今第一个数字处理的流逝分析仪。仪器的光电二级管和光电倍增管接受Luminex磁珠上的信号。分析仪可将各种光波数字化，并将磁珠上的信号转送到数字处理器（DSP）。

六、检测原理

Luminex100TM 系统可用于各种免疫学实验，酶学实验和复杂的基因分析。实验的反应物，如抗体、寡核苷酸、底物等，被包背到一种特殊的荧光磁珠表面。不同的磁珠具有独特的光谱特征，即特有的荧光激发光谱。

Luminex100TM 可分析流动的磁珠。根据荧光的独特光谱指标，每一个磁珠可被精确地归类到各自的亚群。此外，Luminex100TM 通过扫描每一个磁珠，而识别磁珠表面上的生物反应的荧光特征。

七、操作步骤

按照SDS、Luminex、XY平台、计算机的顺序开机后，Luminex控制软件会自动运行。软件主窗口如下：

主页面上方的图标主要为不同菜单内容快捷键。该指令也可在左上文件（File）菜单内找到。当您将鼠标箭头指向某个图标时，图标下可自动显示该图标的功能。

主页面下方有一仪器状态显示条框。仪器预热时，状态条框中间部位可见一黄色倒计时提示，如10秒，表示预热还需要10秒钟才能结束。预热结束后，该显示部分变成绿色。仪器发生错误时，仪器状态显示条框的相应部分将会出现红色的提示。

主页面的指令可分为五部分：Daily Startup（日启动），Instrument Calibration（仪器校准），Batch Setup（批量设置），Report and Analysis（分析及报告）和Daily Shutdown（日关机）。

1、Daily Startup（日启动）

（1）仪器预热（warm up）：接通Luminex仪器电源后，仪器将自动为激光头预热。

（2）灌注（prime）：预热结束后，需要灌注两次。目的在于提供机器所需压力、清洁仪器射流系统的管道，包括驱除气泡等。灌洗所需要的液体为鞘液，由鞘液输送系统自动提供。

（3）酒精冲洗（alcohol flush）：灌注后需要用酒精冲洗两次。目的在于清洁取样系统的管道，包括驱除气泡等。酒精冲洗前需要将70%的酒精加到溶液槽（reservoir）内。

（4）清洗（wash）：酒精冲洗后需要用鞘液清洗两次。清洗前需将鞘液加到溶液槽内。点击Wash指令后，可出现如下的提示窗口：

    该窗口提示您将鞘液加到溶液槽内。如果溶液槽内已经事先添加鞘液，可点击OK继续。否则，可点击Eject，仪器将弹出96孔板托架。该窗口右侧的小窗口显示Reservoir，表明仪器本身设定鞘液放在溶液槽内。点击Reservoir右边的箭头，可出现一个96孔板的模型。用者可选择任何一个孔，并以此提供鞘液。

2、Instrument Calibration（仪器校准）

    仪器校准包括CAL1校准、CAL2校准、CON1校准和CON2校准。    

CAL1和CAL2主要校准两个激光的运行状态，如温度。CON1和CON2主要校准两个激光的精密度，如激光位置。

将四种校准磁珠分别点到96孔板的四个孔内。每孔点三滴。仪器本身设定CAL1在A1孔，CAL2在B1孔，CON1在C1孔，CON2在D1孔。使用者也可自行设定孔的位置。四个孔内可同时点样，但测定需分开执行。校准后需清洗3-4次。

3、Batch Setup（批量设置）

批量设置主要包括建立一个位点样本批量文件夹和多位点样本批量文件夹。

点击New Batch后可进入创建一个位点读取标本的页面。其中包括创建此批实验的文件名，标本代码的输入，标本在96孔板的位置。

标本输入后，程序自动按顺序将标本放在96孔板的起始部位。可用鼠标将标本移动到96孔板的任何部位。

检查无误后，点击Finish，可进入读取样本的页面。

建立多个位点的样本文件时，在主页面点击New Multi Batch。键入文件名后，点击Add Batch。如同上述建立一个文件夹的步骤。

Luminex标本读取

在前提准备都已经完毕后，放入待读取的96孔板，即可进行样本的读取。

4、Report and Analysis（分析及报告）

用HLA Fusion软件分析以及报告。

5、Daily Shutdown（日关机）

每日关机前必做两项，包括消毒和清洗取样系统的管道两部分。

（1）消毒（Sanitize）：在溶液槽内事先添加10-20%的BLEACH。点击Sanitize，消毒系统。

（2）清洗（Soak）：将溶液槽内的BLEACH换成去离子水。点击Soak，使取样管道系统填充去离子水。

关机：可顺序关闭SDS、Luminex、XY平台和计算机。

八、安全注意事项

1.所有血液制品及生物制剂都具有潜在危险性。在运输和处理传染原时须严格遵守疾病防控中心和职业卫生安全署所制定的防护措施。

2.叠氮化钠或Proclin可作为防腐剂加入某些试剂中。虽然其浓度很低，但是叠氮化钠或Proclin可与铅和铜反应形成具有高爆炸性的金属叠氮化合物，可用大量水冲洗以防止叠氮化合物的形成。

九、操作注意事项

1.LUMINEX仪器应避免震动，不要在同一个实验台上放离心机，混匀震动器等。

2.LUMINEX流式基因检测仪及试剂均对温度敏感。确保室温变化不大。每次仪器校准后温度上下不要超过2℃，如果超过2℃，需要重新校准。

3.有些样本背景高（BACKGROUND），如何避免？常见原因为DNA纯度和浓度不够；如果扩增确信没有问题，则需注意杂交过程中关键步骤是否混匀好。

4.某种原因某一个孔没有加样本，只加了缓冲液或水，但读样本时仪器仍显示该孔有磁珠，分析结果时也可得到合理的结果，如何解释？这种结果来自很少的磁珠（每种磁珠约1-5个）。仪器在读取样本后将磁珠返回相应的孔内，并用一定量的SHEATH液清洗系统的管道。由于清洗的不完全，系统在读取下一个样本时仍会读到上个样本的很有限的磁珠。如果下个样本为空白，上个样本的剩余磁珠可使空白孔呈现与上个样本同样的结果（即使很少的磁珠）。然而，如果下个孔是正常样本，系统可识别到上个样本的阳性磁珠，并可通过校正（Trim）排除影响。例如：上个样本的第2号磁珠为阳性，OD值为2000，下个样本的第2号磁珠为阴性，平均OD值为30，系统会自动将上个样本第2号磁珠的OD值滤掉。