感受态细胞的制备

2012年2月17日

19:25

2012-02-13至2012-02-17

Mirror: 配制含15%甘油的100mM的CaCl2

正确方法：先配制100mM的CaCl2，待CaCl2溶解完全后再按比例加入甘油

Tip: 因为这些物品需要高压灭菌，所以尽可能将繁琐的工作放在灭菌前面。

Notice: 摇菌时一定要检查一下rpm，一般250rpm左右，想菌长得更快的话可以使其达到300rpm。13号晚上在复活Pci-neo时由于rpm太小，导致过夜培养后菌已经沉到试管底部。14号早上被叶师兄（很生气）转移到另外一个摇床上了。中午我抽提了质粒，事先估计了OD值。师兄冒火，说质粒浓度不会超过100ng/μl，但结果是300ng/μl以上。师兄告诉我：菌里面本身就有各种酶，包括DNA酶，RNA酶，菌长时间沉积在试管管底的话，酶可能溢出，导致抽提的质粒被DNA酶降解。

另外，the key of 制备感受态细胞是：保持冰上操作，离心机需预冷，分装 前最好将ep管管架预冷，这样才能保证所制备的感受态细胞的活力。

Tip: 注意搜集繁琐工作的简单解决办法，以便一劳永逸。

13号晚上我划完线之后，师兄说可以把DH5α丢弃了，当时感觉不对，但也不知道为什么。直到今晚师兄让我明早上将之前划线培养的DH5α重新挑斑摇菌（1管）再划线再摇菌，这样也就达到了活化的目的。每次制备完感受态细胞后都活化一次，可以使其永远保持较好的活力。

感受态细胞的制备-DH5α

2012年2月17日

19:25

2012-02-13至2012-02-17

Mirror: 配制含15%甘油的100mM的CaCl2

正确方法：先配制100mM的CaCl2，待CaCl2溶解完全后再按比例加入甘油

Tip: 因为这些物品需要高压灭菌，所以尽可能将繁琐的工作放在灭菌前面。

Notice: 摇菌时一定要检查一下rpm，一般250rpm左右，想菌长得更快的话可以使其达到300rpm。13号晚上在复活Pci-neo时由于rpm太小，导致过夜培养后菌已经沉到试管底部。14号早上被叶师兄（很生气）转移到另外一个摇床上了。中午我抽提了质粒，事先估计了OD值。师兄冒火，说质粒浓度不会超过100ng/μl，但结果是300ng/μl以上。师兄告诉我：菌里面本身就有各种酶，包括DNA酶，RNA酶，菌长时间沉积在试管管底的话，酶可能溢出，导致抽提的质粒被DNA酶降解。

另外，the key of 制备感受态细胞是：保持冰上操作，离心机需预冷，分装 前最好将ep管管架预冷，这样才能保证所制备的感受态细胞的活力。

Tip: 注意搜集繁琐工作的简单解决办法，以便一劳永逸。

13号晚上我划完线之后，师兄说可以把DH5α丢弃了，当时感觉不对，但也不知道为什么。直到今晚师兄让我明早上将之前划线培养的DH5α重新挑斑摇菌（1管）再划线再摇菌，这样也就达到了活化的目的。每次制备完感受态细胞后都活化一次，可以使其永远保持较好的活力。

感受态细胞的制备-DH5α

2012年2月17日

19:25

2012-02-13至2012-02-17

Mirror: 配制含15%甘油的100mM的CaCl2

正确方法：先配制100mM的CaCl2，待CaCl2溶解完全后再按比例加入甘油

Tip: 因为这些物品需要高压灭菌，所以尽可能将繁琐的工作放在灭菌前面。

Notice: 摇菌时一定要检查一下rpm，一般250rpm左右，想菌长得更快的话可以使其达到300rpm。13号晚上在复活Pci-neo时由于rpm太小，导致过夜培养后菌已经沉到试管底部。14号早上被叶师兄（很生气）转移到另外一个摇床上了。中午我抽提了质粒，事先估计了OD值。师兄冒火，说质粒浓度不会超过100ng/μl，但结果是300ng/μl以上。师兄告诉我：菌里面本身就有各种酶，包括DNA酶，RNA酶，菌长时间沉积在试管管底的话，酶可能溢出，导致抽提的质粒被DNA酶降解。

另外，the key of 制备感受态细胞是：保持冰上操作，离心机需预冷，分装 前最好将ep管管架预冷，这样才能保证所制备的感受态细胞的活力。

Tip: 注意搜集繁琐工作的简单解决办法，以便一劳永逸。

13号晚上我划完线之后，师兄说可以把DH5α丢弃了，当时感觉不对，但也不知道为什么。直到今晚师兄让我明早上将之前划线培养的DH5α重新挑斑摇菌（1管）再划线再摇菌，这样也就达到了活化的目的。每次制备完感受态细胞后都活化一次，可以使其永远保持较好的活力。

感受态细胞的制备-DH5α

2012年2月17日

19:25

2012-02-13至2012-02-17

Mirror: 配制含15%甘油的100mM的CaCl2

正确方法：先配制100mM的CaCl2，待CaCl2溶解完全后再按比例加入甘油

Tip: 因为这些物品需要高压灭菌，所以尽可能将繁琐的工作放在灭菌前面。

Notice: 摇菌时一定要检查一下rpm，一般250rpm左右，想菌长得更快的话可以使其达到300rpm。13号晚上在复活Pci-neo时由于rpm太小，导致过夜培养后菌已经沉到试管底部。14号早上被叶师兄（很生气）转移到另外一个摇床上了。中午我抽提了质粒，事先估计了OD值。师兄冒火，说质粒浓度不会超过100ng/μl，但结果是300ng/μl以上。师兄告诉我：菌里面本身就有各种酶，包括DNA酶，RNA酶，菌长时间沉积在试管管底的话，酶可能溢出，导致抽提的质粒被DNA酶降解。

另外，the key of 制备感受态细胞是：保持冰上操作，离心机需预冷，分装 前最好将ep管管架预冷，这样才能保证所制备的感受态细胞的活力。

Tip: 注意搜集繁琐工作的简单解决办法，以便一劳永逸。

13号晚上我划完线之后，师兄说可以把DH5α丢弃了，当时感觉不对，但也不知道为什么。直到今晚师兄让我明早上将之前划线培养的DH5α重新挑斑摇菌（1管）再划线再摇菌，这样也就达到了活化的目的。每次制备完感受态细胞后都活化一次，可以使其永远保持较好的活力。