(实验室用total RNA提取中文版)RNase mini kit 74104和74106 -

  此试剂盒（cat.编号 74104和74106）能被存储于室温（15-25℃）至少9个月。

启动前注意事项

※如果从富含RNase的细胞系或组织中纯化RNA，则将10μl β-巯基乙醇（β-ME）或20μl 2 M二硫苏糖醇（DTT）添加到1 m l缓冲液RLT中。带有β-ME或DTT的缓冲液RLT可在室温下储存1个月。

※将4体积的乙醇（96–100%）加入到RPE缓冲液中成为工作液。

1.不要使用超过30毫克的组织。破坏组织并使溶解物在适当体积的缓冲液RLT中均匀化（见表1）。以最大速度离心溶解液3分钟。用移液管小心地除去上清液，并在步骤2中使用。

2.  在裂解液中加入1体积的70%乙醇，用移液管搅拌均匀。不要离心。立即执行步骤3。

3.  将高达700μl的样品（包括任何沉淀物）转移到放置在2 ml收集管（提供）中的RNEAsy微型旋转柱中。过滤两次。盖上盖子，并在≥8000 x g的条件下离心30 秒。丢弃滤过的液体。

4. 向RNeasy旋转柱中添加700μl缓冲液RW1。盖上盖子，并在≥8000 x g的条件下离心15 秒。丢弃过滤液。

5.  向RNeasy旋转柱中添加500μl缓冲液RPE。盖上盖子，并在≥8000 x g的条件下离心15 秒。丢弃过滤液。

6.  向RNeasy旋转柱中添加500μl缓冲RPE。盖上盖子，在≥8000 x g的条件下离心2分钟。离心完，再设置最大转速，1分钟。使干燥

7.  将RNeasy旋转柱放入新的1.5 ml收集管（提供）。直接向旋转柱膜中加入30–50μl的55℃ RNase FREE Water。盖上盖子，8000 x g，离心1分钟（先设置800g，离心过程中逐渐加速到8000g）。

（注意：离心时剪掉过滤柱盖子；从柱加RNase free water；）

8.  如果预期的RNA产量大于30μg，则再使用30–50μl的RNase游离水重复步骤7，或使用步骤7中的洗脱液（如果需要高RNA浓度）。重复使用步骤7中的收集管。

表1. 用于样品破坏和均匀化的缓冲液RLT的体积