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[收稿日期]　2009211202

3[通信作者]　马静洁(1960—

),女,教授,研究方向为药事管理与法规.

纳豆激酶在大鼠机体内外对凝血功能的影响

邵玉英1,聂凤环1,马静洁23

(1.延边大学草仙药业有限公司,吉林龙井133400;2.延边大学药学院,吉林延吉133000)

[摘要]　[目的]探讨纳豆激酶对大鼠机体内外对凝血功能的影响.[方法]通过对大鼠纤维蛋白原含

量、凝血酶时间、添加小蓟的血浆凝固时间及优球蛋白溶解时间的测定,评价纳豆激酶对凝血功能的影响.[结果]纳豆激酶可明显降低大鼠血浆纤维蛋白原含量,使添加小蓟的血浆不发生凝固,延长凝血酶时间,提高优球蛋白溶解活性.[结论]纳豆激酶在大鼠体内外均具有较好的抗凝血作用.

[关键词]　大豆食品;抗凝血酶类;凝血酶时间;血清球蛋白类;大鼠

[中图分类号]　R 28515　　　[文献标识码]　A 　　　[文章编号]　100021824(2010)0120010203

E ffects of the nattokinase for coagulation in vivo and in vit ro in rats

SHAO Yu 2ying 1,NIE Feng 2huan 1,MA Jing 2jie 23

(1.Yanbian Universit y Herbage Pharmaceuticial Com pany ,L ong j ing 133400,J ilin ,China;2.Yanbian Universit y College of Pharmacy ,Yanj i 133000,J ilin ,China )

ABSTRACT :OBJ ECTIV E To st udy t he effect s of t he nattokinase for coagulation i n vi vo and i n vit ro in rat s.M ETHODS The effect s of nattokinase for coagulation f unction were evaluated by measuring t he

fibrinogen ,t hrombin time ,plasma coagulation

time wit h adding t he common t histle ,and

euglo bulin lysis time in rat s.R ESUL TS The

nattokinase reduced obviously t he content of

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01・

plasma fibrinogen,did not coagulate t he plasma added wit h t he common t histle,extended t he t hrombin time,and improved t he euglobulin lytic activity in rat s.CONCLUS ION The nattokinase has better anticoagulative effect s i n vi vo and i n vit ro in rat s.

K ey w ords:soy foods;antit hro mbins;t hrombin time;serum globulins;rat s

　　心脑血管血栓栓塞性疾病是危害中老年人健康的严重而又常见的疾病,近年来,对血栓形成机制的研究和抗血栓药物的开发受到关注[122].纳豆激酶是新型的抗血栓药物,最初是从日本传统食品纳豆中提取出来的,可溶解血栓的丝氨酸蛋白酶类.纳豆激酶安全,作用迅速且持续时间长,可由纳豆菌发酵生产,价格低廉,口服易吸收[223].本研究观察了纳豆激酶的抗凝血作用,旨在为纳豆激酶的合理应用提供实验依据.

1　材料与方法

111　材料　实验动物取Wistar大鼠,体重为180～200g,雌雄各半,由中国医科大学附属第二医院及沈阳药科大学动物饲养室提供.纳豆激酶为芽孢杆菌产生的豆激酶,由延边大学草仙药业有限公司生产,批号为070631;博洛克胶囊(蚓激酶胶囊)由江中制药厂生产,规格为200mg,批号为070216.纤维蛋白原试剂盒为上海太阳生物技术有限公司产品.Thrombo Screen400C型血凝仪为美国太平洋公司产品;IL23600型离心机为江苏太仓仪器厂产品.

112　方法

11211　纳豆激酶对大鼠血浆纤维蛋白原含量的影响　取成年大鼠50只,雌雄各半,随机分为5个组,即对照组、博洛克组及纳豆激酶大、中、小剂量组,每组各为10只.灌胃给予博洛克组大鼠博洛克140mg/kg,给予纳豆激酶大、中、小剂量组大鼠7410,3710,1815mg/kg纳豆激酶,给予对照组大鼠等体积生理盐水.给药后2h分别取眶静脉血2mL,用38g/L枸橼酸钠抗凝,立即以3000r/min离心10min,分离出无血小板的血浆,按照试剂盒说明书进行操作测定血浆纤维蛋白原含量[425].

11212　纳豆激酶对添加小蓟的血浆凝固时间的影响

1121211　小蓟煎剂的制备　取干燥小蓟3g,加蒸馏水50mL,煎煮至15mL,制备成质量浓度为200g/L的小蓟煎剂,备用.

1121212　血浆凝固时间的测定　取5mL试管50支,分别加入小蓟煎剂012mL后分为5个组,即对照组、纳豆激酶大、中、小剂量组及博洛克组,每组各为10支.向对照组试管中加入生理盐水012mL 及混合血浆;纳豆激酶大、中、小剂量组分别加入10,2,1g/L纳豆激酶012mL及混合血浆;博洛克组加入80g/L博洛克溶液012mL及混合血浆;均置于37℃条件下孵育,观察凝固时间[6].

11213　纳豆激酶对凝血酶时间的影响　取5mL 试管50支,分为5个组,即对照组、纳豆激酶大、中、小剂量组及博洛克组,每组各为10支.向对照组试管中加入生理盐水011mL,011mL混合血浆(纤维蛋白原含量为3g/L),0102U/L凝血酶011mL;向纳豆激酶大、中、小剂量组试管中加入10,2,1g/L 纳豆激酶011mL,混合血浆011mL,凝血酶011mL;向博洛克组试管中加入80g/L博洛克011mL,混合血浆011mL,凝血酶011mL;置于37℃条件下孵育10min,观察凝固时间.

11214　纳豆激酶对优球蛋白溶解时间的影响　取大鼠50只,雌雄各半,随机分为5个组,即对照组、博洛克组及纳豆激酶大、中、小剂量组,每组各为10只.灌胃给予博洛克组大鼠博洛克140mg/kg;给予纳豆激酶大、中、小剂量组纳豆激酶7410, 3710,1815mg/kg;给予对照组大鼠等体积生理盐水.150min后取所有大鼠眶静脉血,用38g/L枸橼

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・Journal of Medical Science Y anbian University　Mar.2010　Vol.33No.1

酸钠抗凝,比例为9∶1,以3000r/min离心10min,分离血浆.取012mL血浆加入316mL蒸馏水,再加入10mL/L醋酸溶液014mL,充分混合,将混合液置入冰箱中10min,优球蛋白遇酸沉淀,再以3000r/min离心5min,弃去上清液,将沉淀管倒置于滤纸上,吸除多余的液体,加入p H值为910的醋酸缓冲液012mL,用玻璃棒轻轻搅拌溶解,将试管置入37℃水浴2min,加入01025mol Cl2,待其凝固,记录优球蛋白凝固时间(EL T)及完全溶解时间,计算优球蛋白的溶解活性单位[7].

2　结果

由表1可见,与对照组比较,纳豆激酶大、中剂量组及博洛克组大鼠纤维蛋白原含量明显升高,相比较均有显著性差异(P<0101);纳豆激酶对添加小蓟的血浆凝固时间的影响观察结果显示,纳豆激酶大、中、小剂量组及博洛克组血浆均不发生凝固,而对照组凝固时间为(9139±0175)min,提示在血浆中加入纳豆激酶使添加小蓟的血浆不发生凝固;关于凝血酶时间的测定结果显示,纳豆激酶大剂量组凝固时间与对照组比较明显延长,相比较有显著性差异(P<0101);纳豆激酶大、中、小剂量组EL T 与对照组比较明显缩短,溶解活性单位明显提高,相比较均有显著性差异(P<0101).

表1　纳豆激酶对大鼠凝血指标的影响

组别　　　　　　n 纤维蛋白原

/(mg/L)

凝血酶时间

/min

EL T

/s

溶解活性单位

(10000/EL T)

对照组1023712±72124132±2176178168±351800199±0121博洛克组1013819±741635106±118270105±5314036117±71743纳豆激酶大剂量组108813±4215338180±4110380185±3511632119±01873纳豆激酶中剂量组1010114±251238124±1212386180±3614732168±11663纳豆激酶小剂量组1020119±52104192±2134102187±37131175±01503 3与对照组比较,P<0101.

3　讨论

血液凝固过程由内及外源性凝血途径组成,通过多种酶原被相继激活而得到加强放大的连锁反应.本研究结果表明,纳豆激酶可明显降低大鼠血浆纤维蛋白原含量,使加入小蓟的血浆不发生凝固,缩短EL T,提高溶解活性单位,提示纳豆激酶具有抗凝血作用.

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