MTT法检测细胞增殖

试剂：PBS溶液（pH 7.4）、MTT （公司solarbo）浓度为5mg/ml， 二甲基亚砜

　贴壁细胞：

　　1、收集细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入150ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。

    2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（细胞融合70-80%，96孔平底板）,加入浓度梯度的药物（细胞贴壁后即可加药或过夜），或两小时，或半天时间，但每孔150ul,设3-6个复孔.

　 3.、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

   4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

   5、终止培养，小心吸去孔内培养液（或将培养板倒扣于报纸吸干培养液，注意动作轻柔）。

6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）