红细胞计数-手工法

一、原理

    用等渗稀释液将血液按一定倍数稀释，充人计数池后显微镜下计数一定体积内红细胞数，换算求出每升血液中红细胞的数量。

二、试剂与耗材

    1.红细胞稀释液

                  枸橼酸钠   1.0 g;

                  36%甲醛液  1.0 ml

                  氯化钠     0.6 g

          加蒸馏水至100 ml ,混匀、过滤两次后备用。

    2. 其他 显微镜、改良Neubauer血细胞计数板等。

三、操作

    1.取中号试管1支，加红细胞稀释液2.0ml。

    2. 用清洁干燥微量吸管取末梢血10μl ，擦去管外余血后加至红细胞稀释液底部，再轻吸上层清洗吸管2-3次立即混匀。

    3. 混匀后，用干净微量吸管将红细胞悬液充人计数池，不得有空泡或外溢，充池后静置2-3 min后计数。

    4. 高倍镜下依次计数大方格内四角和正5 个中方格内的红细胞。对压线细胞按"数上不数下、数左不数右"的原则进行计数。

四、计算

红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×200×106

          =5个中方格内红细胞数×1010

          =5个中方格内红细胞数÷100×1012

式中：

×5     5个中方格换算成1个大方格；

×10    1个大方格容积为0.1μl，换算成1.0μl；

×200   血液的实际稀释倍数应为201倍，按200是便于计算；

×106    由1μl换算成1L。

五、参考区间

    男：     （4.09～5.74）×1012/L

    女：     （3.68～5.13）×1012/L

    新生儿： （5.2～6.4）×1012/L

    婴儿：   （4.0～4.3）×1012/L

    儿童：   （4.0～4.5）×1012/L

六、附注

    1．采血时不能挤压过甚，因此针刺深度必须适当。

    2．稀释液要过滤，试管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等被  误认为红细胞。

    3. 参考范围数值内，两次红细胞计数相差不得超过5% 。

    4. 不允许以血红蛋白浓度来折算红细胞数。

七、临床意义

　　红细胞增加或减少的临床意义与血红蛋白测定相似。一般情况下，红细胞数与血红蛋白浓度之间有一定的比例关系。但在病理情况下，此比例关系会打破，因此，同时测定二者，对贫血诊断和鉴别诊断有帮助。