华中农业大学生物化学本科试题库 第5章 核酸化学

 (一) 名词解释

1．核酸， 2．核酸一级结构，3．DNA二级结构，4．碱基互补规律，5．稀有碱基、稀有核苷酸，6．环化核苷酸，7．多磷酸核苷酸，8．增色效应，9．减色效应，10．发卡结构

11．分子杂交，12．Tm值，13. 回文序列，14. 同裂酶，15. 性物理图谱

（二）填空题

1．核酸可分为　　　和　　　两大类，其中　　　主要存在于　　　中，而　　　主要存在于　　　。

2．核酸完全水解生成的产物有　　　、　　　和　　　， 其中糖基有　　　 ，碱基有　　　和　　　两大类。     

3．生物体内的嘌呤碱主要有二种，　　　　　　和　　　，嘧啶碱主要有　　　、

   　　　和　　　，某些RNA分子中还含有微量的其它碱基，称为　　　。

4．DNA和RNA分子在物质组成上有所不同，主要表现在　　　　　和　　　的不同，DNA分子中存在的是　　　和　　　，RNA分子中存在的是　　　和　　　。

5．RNA的基本组成单位是　　　、　　　、　　　、　　　，DNA的基本组成单位是　　　、　　　、　　　、　　　，它们通过　　　键相互连接形成多核苷酸链。

6．DNA的二级结构是　　　结构，其中碱基组成的共同特点是(若按摩尔数计算)　　　、　　　、　　　。

7．测知某一DNA样品中，A＝0.53mol，C＝0.25mol、那么T＝　　　mol，G＝　　　mol。  

8．嘌呤环上的第　　　位氮原子与戊糖的第　　　位碳原子相连形成　　　键，通过这种键相连而成的化合物叫　　　。

9．嘧啶环上的第　　　位氮原子与戊糖的第　　　位碳原子相连形成　　　键，通过这种键相连而成的化合物叫    。

10. 有两个主要的环核苷酸是　　　、　　　，它们的主要生理功用是　　　。

11．写出下列核苷酸符号的中文名称：ATP　　　、dCDP　　　。

12. DNA的Tm值的大小与其分子中所含的　　　的种类、数量及比例有关，也与分子的　　　、有关。若含的A—T配对较多其值则　　　、含的G—C配对较多其值则　　　，分子越长其Tm值也越　　　。

13．组成核酸的元素有　　　、　　　、　　　、　　　 、　　　等，其中　　　的含量比较稳定，约占核酸总量的　　　，可通过测定　　　的含量来计算样品中核酸的含量。

14．DNA双螺旋结构的维系力主要有　　　和　　　。

15. DNA分子中G，C含量高分子较稳定，同时比重也较　　　、解链温度也　　　。    

16．RNA主要有三类，既　　　、　　　和　　　、它们的生物功能分别是　　        　、

　　                 　和　                    　　。

17．RNA的二级结构大多数是以单股　　　的形式存在，但也可局部盘曲形成　　　结构，典型的tRNA二级结构是　　　型结构。

18．在生物细胞中主要有三种RNA，其中含量最多的是　　　、种类最多的是　　　、含有稀有碱基最多的是　　　。

19. tRNA三叶草型结构中，氨基酸臂的功能是　　　，反密码环的功能是　　　。

20. tRNA氨基酸臂3’末端中最后三个碱基是　　　，反密码环中有三个相连的单核苷酸组成　　　。    

21. 成熟的mRNA在5’末端加上了　　　构成帽的结构，在3’末端加上了　　　形成尾巴。

22．Ⅱ类性内切核酸酶分子量较小．一般在20～40KDa，通常由        亚基所组成。它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA杂合双链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有          专一性，也具有            专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有          ，产生          或           的DNA片段。作用时需要       作辅助因子，但不需要          和        。

23. 完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1)                        (2)                    。

24．SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用：

    (1)                                    ；

    (2)                                    ；

    (3)                                    ；

    (4)                                    。

25．酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞DNA时，具有两方面的作用：(1)                         ;  (2)                          。

26．用酚—氯仿抽提DNA时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇。这是因为异戊醇                            。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

27．同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶K具有两个显著的优点：(1)                        ;(2)                             。

28．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是                。

29．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子，如NaCl和NaAc，其目的是                    。

30．浓缩DNA的方法有：(1)           ;(2)         ;(3)         ; (4)            。

31. 通常可在三种温度下保存DNA：4～5℃、-20℃、-70℃，其中以                最好。

32．在用SDS分离DNA时，要注意SDS的浓度，0.1％和1％的SDS的作用效果是不同的，前者            ，后者            。

33．在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素很多，主要有(1)                    ；(2)                    ；(3)                        。

34．在分离DNA时，常用        法、        法、        法及                法等方法去除蛋白质。

35．在DNA保存液中，常加一滴氯仿，主要是起                 作用。

36．在简并引物的设计中，常常要用到dI(次黄嘌呤)，原因是                        。

37．在分离DNA时，要戴手套操作，原因是                  。

38．简并引物PCR主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计           引物来合成相应的基因。

39．SSC是由NaCI和柠檬酸钠组成的试剂，其中NaCl的作用是使          ，而柠檬酸钠的作用是                    。

40．在重蒸酚中加入0．1％的8—羟基喹啉及少量β—巯基乙醇，不仅可以防止酚的氧化，还可以                    的活性及                        作用。

（三）选择题

1．在核酸中一般不含有的元素是：

A  碳    B  氢    C  氧    D  硫   

2．腺嘌呤(A)与鸟嘌呤(G)在结构上的差别是：

    A  A的C6上有羟基，G的C6上有氨基B  A的C6上有氨基，G的C2上有氨基 

    C  A的C6上有甲基，G的C6上有羰基 D  A的C6上有氨基，G的C2上有羰基   

3．胸腺嘧啶(T)与尿密啶(U)在结构上的差别是：

    A  T的C2上有氨基，U的C2上有氧B  T的C5上有甲基，U的C5上无甲基

    C  T的C4上有氧，U的C4上有氧D  T的C2上有氧，U的C2上有氧

4．通常即不见于DNA又不见于RNA的碱基是：

    A  腺嘌呤    B  黄嘌呤    C  鸟嘌呤    D  胸腺嘧啶        

5．下列哪种碱基只存在于mRNA而不存在于DNA中?

A  腺嘌呤　　  B  尿嘧啶    C  鸟嘌呤    D  胞嘧啶   

6．DNA与RNA完全水解后，其产物的特点是：

A  戊糖不同、碱基部分不同    B  戊糖不同、碱基完全相同

C  戊糖相同、碱基完全相同    D  戊糖相同、碱基部分不同

7．在核酸分子中核苷酸之间的连接方式是：

A  3′，3′，-磷酸二酯键    B  糖苷键

C  3′,5′-磷酸二酯键       D  肽键

8．核酸的紫外吸收是由哪一结构所产生的?

A   嘌呤和嘧啶之间的氢键    B  碱基和戊糖之间的糖苷键

C  戊糖和磷酸之间的酯键     D  嘌呤和嘧啶环上的共轭双键

9．含有稀有碱基比例较多的核酸是：

A   mRNA    B  DNA    C  tRNA    D  rRNA    

10．核酸分子中储存、传递遗传信息的关键部分是：

A  核苷    B  戊糖    C  磷酸    D  碱基序列   

11．假尿苷的糖苷键是：

A  C—C    B  C—N    C  N—N    D  C—H   

12. 在核苷酸分子中戊糖(R)、碱基(N)和磷酸(P)的连接关系是：

A  N—R—P B  N—P—R    C  P—N—R    D  R—N—P    

13．DNA的二级结构是指：

A  α—螺旋    B  β—片层    C  β—转角    D  双螺旋结构  

14．下列关于核苷酸生理功能的叙述，错误的是：

A  作为生物界最主要的直接供能物质B  作为辅酶的组成成分

C  作为质膜的基本结构成分D  作为生理调节物质

15．ATP的生理功能不包括：

A  为生物反应供能    B  合成RNA

C  贮存化学能        D  合成DNA

16．关于DNA双螺旋结构学说的叙述，哪一项是错误的?

A  由两条反向平行的DNA链组成B  碱基具有严格的配对关系    

C  戊糖和磷酸组成的骨架在外侧D  生物细胞中所有DNA--级结构都是右手螺旋 

17．下列哪种核酸的二级结构具有“三叶草”型?

A  mRNA    B  质粒DNA  C  tRNA    D  线粒体DNA 

18． 下列复合物中除哪个外，均是核酸与蛋白质组成的复合物

A   核糖体    B  病毒

    C  端粒酶     D  核酶(ribozyme)

19．真核细胞染色质的基本结构单位是：

A  组蛋白    B  核心颗粒    C  核小体    D  超螺旋管    

20．不参与核小体核心颗粒的蛋白质是：

A  H1    B  H2A    C  H2B    D  H3   

21．核酸的一级结构实质上就是：

A   多核苷酸链中的碱基排列顺序B  多核苷酸链中的碱基配对关系

C  多核苷酸链中的碱基比例关系D  多核苷酸链的盘绕、折叠方式

22．DNA变性是指：

A   多核苷酸链解聚

B  DNA分子由超螺旋变为双螺旋

C  分子中磷酸二酯键断裂

D  碱基间氢键断裂

23.  双链DNA热变性后

A   黏度下降       B  沉降系数下降

C  浮力密度下降    D  紫外吸收下降

24. DNA Tm值较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致?    

A  G+A    B  C+G    C  A+T    D  C+T    

25. 核酸变性后可发生下列哪种变化?

A  减色效应            B  增色效应

C  紫外吸收能力丧失    D  溶液粘度增加    

26．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?

    A  反应时间    B 酶量

    C 反应体积     D  酶反应的温度

27．对DNA片段作物理图谱分析，需要用

   A   核酸外切酶    B  性内切酶        C  DNA连接酶    D  DNA聚合酶I

28．从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是：

  A  抑制核酸酶的活性B 保护DNA，防止断裂    

  C 加速蛋白质变性 D  有利于细胞破碎

29．关于cDNA的最正确的说法是：

    A  同mRNA互补的单链DNA B 同mRNA互补的双链DNA

    C 以mRNA为模板合成的双链DNA D  以上都正确

30． RNA经NaOH水解，其产物是

A   5'-核苷酸    B  2'-核苷酸

    C  3'-核苷酸     D  2'-核苷酸和3'-核苷酸的混合物

31．用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：

    A  染色体DNA断成了碎片     B 染色体DNA分子量大，而不能释放

    C 染色体变性后来不及复性    D  染色体未同蛋白质分开而沉淀

32．Clark做了一个有趣的实验，发现Taq DNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加

    A  dGTP    B dATP        C dCTP         D  dTTP

33．在简并引物的3′端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为

    A  Taq酶具有一定的不精确性 B 便于排除错误碱基的掺人

    C 易于退火 D  易于重组连接

34．Southern印迹的DNA探针杂交。

    A  只与完全相同的片段 B 可与任何含有相同序列的DNA片段

    C 可与任何含有互补序列的DNA片段 D  可与用某些性内切核酸酶切成的DNA片段

35．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?

    A  用酶消化DNA    B  DNA与载体的连接

    C  用凝胶电泳分离DNA片段     D  DNA片段转移至纤维素膜上

 (四)是非题

1. 核苷中碱基和戊糖的连接一般为C-C糖苷键。

2．在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先熔解分开。

3．RNA的局部螺旋区中，两条链之间的方向也是反向平行的。

4．不同来源DNA单链，在一定条件下能进行分子杂交是由于它们有共同的碱基组成。

5．核酸变性时紫外吸收值明显增加。

6．Tm值高的DNA，(A+T)百分含量也高。

7．用二苯胺法测定DNA，必须用同源的DNA作为标准样。

8．双链DNA中，嘌呤碱基含量总是等于嘧啶碱基含量。

9．真核细胞中DNA只存在于细胞核中。

10．在体内存在的DNA都是以Watson—Crick提出的双螺旋结构形式存在的。

11．在一个生物个体不同组织中的DNA，其碱基组成不同。

12．原核细胞DNA是环状的，真核细胞中的DNA全是线状的。

13．某物质的水解产物对260nm的紫外光有强吸收，地衣酚及二苯胺试验阴性，可以断定此物质为非核酸物质。

14．真核mRNA分子5'末端有一个PolyA结构。

15．DNA分子中含有大量的稀有碱基。

16．tRNA分子中含有较多的稀有碱基。

17．mRNA是人体细胞RNA中含量最高的一种，因为它与遗传有关。

18．DNA只存在于细胞(真核与原核)中，病毒体内无DNA。

19．线粒体中也存在一定量的DNA。

20．自然界中只存在右旋的DNA双螺旋。

21．碱基配对发生在嘧啶碱与嘌呤碱之间。

22．DNA双螺旋结构中，由氢键连接的碱基对形成一种近似平面的结构。

23．DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的。

24．RNA的分子组成中，通常A不等于U，G不等于C。

25．tRNA二级结构中，所有核苷酸只形成三个环、氨基酸臂、附加环和配对的碱基。

26．DNA—蛋白质在低盐溶液中溶解度较小，而RNA—蛋白质在低盐溶液中溶解度大。所以可利用此差别来分离这两种核蛋白。

27．在酸性条件下，DNA分子上的嘌呤碱基不稳定，易被水解下来。

28． 核酸的紫外吸收与溶液的pH值无关。

29． 生物体内存在的游离核苷酸多为5'-核苷酸。

30． Z型DNA与B型DNA可以相互转变。

31．mRNA是细胞内种类最多、含量最丰富的RNA。

32. 在所有病毒中，迄今为止还没有发现既含有RNA又含有DNA的病毒。

33．基因表达的最终产物都是蛋白质。

34. 两个核酸样品A和B，如果A的OD260/OD280大于B的OD260/OD280，那么A的纯度大于B的纯度。

35. 与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的实现的。

36．能够产生防御病毒侵染的性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。

37．性图谱与性片段长度多态性(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者是一个连锁图。    

38．迄今所发现的性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。

39. 甘油会使许多内切核酸的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5%以下。

40. 同一内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段端都是相同的。

41. 所谓引物就是同DNA互补的一小段RNA分子。

42．如果PCR的每一次循环都把上一次循环中合成的DNA加了一倍，那么，10个循环就扩增了1000倍，20个循环就扩增了100万倍，30个循环就扩增了10亿倍。

43．最有效的制备纯RNA的方法是让其在细胞中超表达，然后提纯。

44．大量制备已被克隆基因编码蛋白产物的常用方法是体外转录和翻译。

45．简并引物是根据已知DNA序列设计的引物群。

46．在DNA贮存液中加一滴三氯甲烷，可防止真菌的污染。

47．密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。

48．酚法和碱法分离质粒DNA都要用溶菌酶破壁，但碱法用的溶菌酶的浓度要高。

49．在Northern杂交中，为了防止RNA形成部分环状发夹结构影响迁移率，所以要用变性缓冲液进行电泳。

50．Northern印迹和Southern印迹的基本原理是—样的，都是用于检测结构基因的表达。

（五）问答题

1. (1)T7噬菌体DNA，其双螺旋链的相对分子质量为2.5×107。计算DNA链的长度(设核苷酸对的平均相对分子质量为650)。

    (2)相对分子质量为130×106的病毒DNA分子，每微米的质量是多少?

    (3)编码88个核苷酸的tRNA的基因有多长?

    (4)编码细胞色素C(104个氨基酸)的基因有多长?(不考虑起始和终止序列)

    (5)编码相对分子质量为9.6万的蛋白质的mRNA，相对分子质量为多少?(设每个氨基酸的平均相对分子质量为120)

    (6)λ噬菌体DNA长17μm，一突变体DNA长15μm，问该突变体缺失了多少碱基对?

2. 对一双链DNA而言，若一条链中(A+G)/(T+C)=0.7，则：(1)互补链中(A+G)/(T+C)=?(2)在整个DNA分子中(A+G)/(T+C)=?(3)若一条链中(A+T)=(G十C)=0.7，则互补链中(A+T)/(G+C)=?(4)在整个DNA分子中(A+T)/(G+C)=?

    3. 试述下列因素如何影响DNA的复性过程。 (1)阳离子的存在，(2)低于Tm的温度，    (3)高浓度的DNA链。

    4. 如何让一个超螺旋的环状病毒DNA分子采取其松弛态? 线形双链DNA能否形成超螺旋?

    5．用稀酸或高盐溶液处理染色质，可以使组蛋白与DNA解离，请解释。

    6. 在酶切反应缓冲液中加入BSA的目的是什么?机理是什么?

7. 有些噬菌体和质粒常常编码一些抗性酶的蛋白以中和宿主的系统。你认为噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的作用?

8. 下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识别序列：

          GAATCG， AAATIT，  GATATC，  ACCCCA ? 为什么?

9. 当两种性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么?

10. 什么是性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响?

11. 用于克隆的DNA在质量上有什么要求?

12. 为什么从细胞中分离DNA时往往会断裂?

13. 为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于DNA的分离?

14. 为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离?应如何处置?

15. 在DNA分离过程中，酚通常与氯仿联合使用，即使不联合使用也要在苯酚抽提后用氯仿再抽提一次，为什么?

16. 何谓简并引物(degenerate Primer)?

17. 双脱氧法(dideoxynucleotide method)测序的基本原理是什么?    

18. 性内切核酸酶有哪些特点?

19. 一个线形的DNA分子分别被两种性内切酶或同时被两种内切酶消化，消化的结果是：

20. 什么是Western印迹？它与Southern 印迹有什么不同？

21. 简并引物设计的一般原则是什么？

22. 大肠杆菌在其细胞内产生核酸(DNA)性内切酶的意义是什么?它本身的核酸性内切酶对其细胞内的DNA是否作用?

23．用lmol/L的KOH溶液水解核酸，两类核酸(DNA及RNA)的水解产物是否相同?

24．分离DNA时，为什么要在缓冲液中加入一定浓度的EDTA和蔗糖?

25．PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?

六、参

（）名词解释

1．由单核苷酸通过磷酸二酯键相连而组成的高分子化合物，称为核酸。它可以分为DNA和RNA两类。

2．核苷酸残基在核酸分子中的排列顺序就称为核酸的一级结构。

3．两条DNA单链通过碱基互补配对的原则，所形成的双螺旋。

4. 在形成双螺旋结构的过程中,由于各种碱基的大小与结构的不同，使得碱基之间的互补配对只能在G…C(或C…G)和A…T(或T…A)之间进行，这种碱基配对的规律就称为碱基配对规律(互补规律)。

5．核酸分子中除了常见的五种碱基外，还可能含有其它微量的碱基，这些碱基称为稀有碱基。由稀有碱基形成的核苷酸以及碱基与戊糖之间以非正常N—C糖苷键所形成的核苷酸都称为稀有核苷酸。

6．单核苷酸分子中的磷酸基分别与戊糖的3'-OH及5'-OH形成酯键，这种磷酸内酯的结构称为环化核苷酸或环核苷酸。

7．5'-核苷酸的磷酸基进一步磷酸化成二磷酸核苷、三磷酸核苷或更多的磷酸核苷，它们都被称为多磷酸核苷酸。

8．当核酸分子加热变性时，其在260nm处的紫外吸收会急剧增加的现象称为增色效应。

9．当加热变性了的核酸分子，在退火的条件下发生复性时，其在260nm处的紫外吸收会减少的现象称为减色效应。

10．单链RNA分子也会在分子内部形成部分双螺旋的结构，由于这种部分双螺旋的结构有些象发卡，所以把这种部分双螺旋的结构称为发卡结构。

11．当两条不同来源的DNA(或RNA)链或DNA链与RNA链之间存在互补顺序时，在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子，这种分子称为杂交分子。形成杂交分子的过程称为分子杂交。

12．当核酸分子加热变性时，其在260nm处的紫外吸收会急剧增加，当紫外吸收变化达到最大变化的半数值时，所对应的温度称为熔解温度、变性温度或用Tm值表示。

13.回文序列(palindromic sequence)是一段自我互补的序列，即同其互补链一样的序列 (两者的阅读方向都是从5′→3′)。根据回文序列的结构可分为：完全的回文序列、不完全的回文序列和间断的回文序列。完全的回文序列(GAATTC)，通常是性内切核酸酶的识别序列，不完全的回文序列(如TACCTCGGCGTGATA)，常是其他蛋白质的结合位点(如阻遏蛋白)，在基因表达中有重要作用。间断的回文序列(如GGTTXXXAACC，有一段是颠倒的重复)，它可使单链的核苷酸有可能在tRNA中见到的一样，形成发夹环的结构，间断的回文序列又称反向重复序列。

14．不同来源的性内切核酸酶具有相同的识别序列，产生完全相同的黏性末端，将这些酶称为同裂酶(isoschizomer)。 

15.性物理图谱即性内切核酸酶作图(restrictionmapping)。简单地说就是DNA分子中性内切核酸酶切割位点的定位，即DNA分子中各种不同性内切核酸酶的酶切位点的线性排列图。即标明酶在DNA分子上的性位点的数目、性片段大小及其线性排列的顺序。

（二）填空题

l. RNA  DNA  RNA  胞液  DNA  细胞核    

2. 磷酸  戊糖  碱基  β-D-核糖   β-D-2-脱氧核糖  嘌呤   嘧啶    

3. A  G  C  U  T  稀有碱基    

4．戊糖  嘧啶β-D-2-脱氧核糖  T  β—D-核糖  U    

5. AMP  GMP  CMP  UMP  dAMP  dGMP  dCMPdTMP  3′，5′—磷酸二酯    

6；双螺旋  A＝T  G＝C  A+G＝C+T    

7．0.53   0.25    

8．9  1  1，9—糖苷键  嘌呤核苷    

9．1  1  1，1—糖苷键  嘧啶核苷    

10．CAMP  cGMP  作为激素的第二信使    

11，三磷酸腺苷  脱氧二磷酸胞苷    

12．碱基  长度  低  高  高

13．C  H  0  N  P  磷   9％～10％  磷    

14．氢键  碱基平面间疏水堆积力(范德华力)    

15．大  高        

16．mRNA  tRNA  rRNA  合成蛋白质的模板  运输氨基酸的工具    与蛋白质结合成核糖体是合成蛋白质的场所

17.多核苷酸链  双螺旋  三叶草    

18.rRNA  mRNA  tRNA      

19．结合氨基酸  辨认密码子  

20．CCA  反密码子    

21．7—甲基鸟苷酸  多聚腺苷酸  

22．2～4个相同的；切割位点；识别位点的；平切和交错切；平  黏性末端；Mg2+；ATP  SAM

23. (1)能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互补配对；

(2)两条互补链的5′→3′的序列组成相同，即将一条链旋转180o，则两条链重叠

24．(1)溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂；

(2)溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来；

(3)对RNase、DNase有一定的抑制作用；

(4)SDS能够与蛋白质结合形成复合物，使蛋白质变性沉淀

25．(1)使蛋白质变性；  (2)使核小体和核糖体解聚，提高DNA的得率

26．可以降低表面张力，从而减少气泡产生

27．(1)水解能力很强，作用范围广；(2)在SDS和EDTA中仍保持高活性，可以同SDS 和EDTA同时使用

28．螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性

29．中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力

30．(1)包埋吸水法；(2)蒸发；  (3)膜过滤法；(4)有机溶剂抽提法       

31．-70℃

32．只将RNA分离出来；可将DNA与RNA一起分离出来

33．(1)核酸酶降解；(2)化学降解；(3)物理剪切

34．酸变性；碱变性；热变性；  酶水解         

35．抑制真菌污染的    

36．dI可以同任何碱基相匹配

37．手上常有核酸酶                

38. 一组混合

39．DNA溶解；作为螯合剂，抑制核酸酶的活性

40．抑制RNase；  金属离子的螯合

（三）选择题

1. D    2. B    3. B    4.B    5.B    6. A     7. C    8. D    9. C    10.D    11.A    12.A　　13.D   14.C   15.D   16.D     17.C   18．D   19.C    20.A     21.A    22.D     23.A    24.B   25. B   26. B    27．B   28．B    29．C  30．D 31．C   32. B    33．A    34．C   35. B    

（四）是非题

1．错   2．错   3．对   4．错     5．对   6. 错  7．错   8．对  9．错    10．错  11．错  12．错  13．对  14．对  15．错   16．对  17．错  18．错  19. 对  20．错  21．对  22．对  23．对  24．对  25．错  26．对   27．对 28． 错  29．对  30．对  31．错  32．对  33．错  34．错 35．错 36. 错  37. 对  38. 错 39.对  40. 错  41．错  42．对  43．错  44. 错  45．错  46．对  47．对  48．对  49．对   50．错

（五）问答题

1. (1)   (2.5×107/650)×0.34=1.3×104nm=13μm

       (2)650/0.34=1.9×103/nm=1.9×106/μm

   (3)88×0.34nm=30nm=0.03μm

       (4)104×3×0.34=106nm≈0.11μm

   (5)(96000/120)×3×320=76800

       (6)(17—15)X103/0.34=5.88×103bp

2．(1)设DNA的两条链分别为α和β，那么Aα=Tβ，Tα=Aβ，

Gα=Cβ，Cα=Gβ，

    因为，(Aα+Gα)/(Tα+Cα)=(Tβ+Cβ)/(Aβ+Gβ)=0.7

    所以，互补链中(Aβ+Gβ)/(Tβ+Cβ)=I/0.7=1.43

    (2)在整个分子中    因为，A=T，G=C，    所以，A+G=T+C，(A+G)/(T+C)=1

    (3)假设同1，则    Aα+Tα=Tβ+Aβ,Gα十Cα=Cβ+Gβ，

   所以  (Aα+Tα)/(Gα+Cα)=(Aβ+Tβ)/(GβCβ)=0.7

    (4)(Aα+Tα+Aβ+Tβ)/(Gα+Cα+Gβ+Cβ)=2(Aα+Tα)/2(Gα+Cα)=0.7

3. (1)阳离子可以中和DNA中带负电荷的磷酸基团，减弱DNA链间的静电作用，促进两条互补的多核苷酸链的相互靠近，从而促进DNA的复性。

  (2)温度升高可使DNA变性，因此温度降低到熔点以下可以促进DNA的复性。

  (3)DNA链的浓度增加可以加快互补链随机碰撞的速度，从而促进DNA的复性。

4. 核酸内切酶作用于超螺旋的环状病毒DNA分子，在其中的一条链上产生“缺刻”(nick)，释放张力，则超螺旋转变为松弛态。线形DNA分子只有当两端都被固定时，才能产生超螺旋。    

5. 组蛋白与DNA之间的结合依靠的是组蛋白带正电的碱性基团与DNA带负电荷的磷酸基团之间的静电引力，如果用稀酸处理复合物，则磷酸基团质子化而失去所带的负电荷，复合物解离。如果用高盐溶液处理复合物，则阳离子与磷酸基团结合而取代了组蛋白，导致组蛋白与DNA解离。

6. 目的是保护酶活性，机理是通过提高溶液中蛋白质的浓度，防止酶失活。

7. 某些噬菌体的基因组中有修饰的碱基，因此对性内切核酸酶具有免疫作用。另一种避免酶切割的途径是抑制SAMase的活性，该酶制造S—腺苷甲硫氨酸，某些酶作用时需要S—腺苷甲硫氨酸。然而，噬菌体在发育过程中不能同某些单碳的供体反应。

8. GATATC；AAATTT，因为它们是回文序列。

9. 注意星号活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星号活性。或使用通用缓冲液。

10. Ⅱ类酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。概括起来，诱发星号活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％，v／v)；(2)性内切核酸酶用量过高（100U/μg DNA）；(3)低离子强度(<25：mmol／L)；(4)高pH(8.0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，CO2+，Zn2+等)。

11.  (1)首先是稳定性：保持DNA的高分子量和原有的构型。

(2)低蛋白质含量。

   (3)DNA样品中应不含RNA

   (4)不含可透析的小分子

12.  (1)细胞内存在很高的核酸酶活性,DNA裸露后，很容易遭到核酸酶的降解；

    (2)在分离DNA的过程中，要用到一些酸碱等化学试剂，也会使DNA断裂；

    (3)在DNA的分离过程中要经过多次离心、吸取、转移等，产生的机械张力剪切会使DNA断裂。

13.  由于苯酚呈酸性，并且常常会氧化产生自由基，直接用于DNA的分离，会使DNA遭到破坏，所以，用前需要重蒸除去氧化物，然后用Tris-HCl饱和酚，并调整pH到中性。用缓冲液饱和酚还有第二个作用，就是防止酚吸收更多的DNA溶液，降低DNA的损失率。

14. 因为苯酚与空气接触氧化成粉红色的醌。苯酚氧化生成的醌能够形成游离的自由基，这种自由基能够引起磷酸二酯键的断裂，造成DNA降解。氧化的苯酚须经高温重蒸以除去氧化物，并且在重蒸后的酚中添加抗氧化剂，β—巯基乙醇和8—羟基喹啉，浓度只需0．1％。重蒸酚能够用锡箔纸包起来避光保存在低温下。

15. 原因是酚和水有一定程度的互溶，所以单独使用酚抽提DNA，最终不能除去酚，残留的酚会使起切割和连接作用的性内切核酸酶和连接酶变性。氯仿也是蛋白变性剂，它不与水互溶，但是能够同苯酚互溶，这样，酚和氯仿联合使用，就可以带走残留的酚。

16. 所谓简并引物是指根据肽链的氨基酸序列(或部分序列)，并充分考虑密码子的简并性而设计的、用于PCR扩增的混合引物群体，这种混合引物之间具有不同的碱基组成，但碱基的数量是相同的。由于充分考虑了密码的简并性，在这种混合引物中必定有一种引物是可以和该基因的DNA序列精确互补。

17. 双脱氧的核苷酸是人造的分子，这种分子糖环的2’和3’碳上都没有了羟基基团，而在天然分子中糖环的3’碳上有一个羟基。在DNA复制中，新掺人的碱基按配对原则是天然三磷酸核苷酸，用它的5'-P同生长链的前一个核苷酸的3’羟基连接。但是，若进入的核苷酸是双脱氧的，则由于3’没有羟基而影响下一个磷酸二酯键的形成，使DNA的复制终止。

18. 性内切核酸酶分为三类，重组DNA技术的性内切核酸酶为Ⅱ类。其特点为：①识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称即回文结构(palindrome)。②一些酶切割后产生粘性末端(sticky end ), 另一些酶切割后产生平端或钝性末端(blunt end)。③不同的性内切核酸酶识别DNA中的核苷酸长短不一，为4、6或8个。

19. 在双酶切时，有三个片段(7.5，2.9和6Kb)没有被切成更小的片段，这说明它们内部没有其他酶的切点(如7.5Kb BamH I片段内无Bgl Ⅱ切点)。用Bgl Ⅱ消化产生3个片段说明整个DNA分子上具有2个Bgl Ⅱ切点，同样可以推断DNA上还有3个BamH I切点。13和3.9Kb Bgl Ⅱ酶切片段在双酶切后消失了，这说明这两个片段内部具有BamH I切点。而2.9Kb与lKb之和为3.9Kb，这提示3.9Kb的Bgl Ⅱ酶切片段内有一个BamH I切点。2Kb，7.5Kb与3.5Kb之和为13Kb则说明13Kb的Bgl Ⅱ酶切片段内含有2个BamH I切点。此外，3.5Kb与lKb之和为4.5Kb则说明4.5Kb的BamH Ⅰ酶切片段内含有一个Bgl Ⅱ切点。综合以上结果，原来的线形DNA的物理图谱为：                                                             

20.  Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体(蛋白质)。

21. (1)选择保守区设计简并引物；

(2)选择简并性低的氨基酸密码区设计引物；

(3)注意密码的偏爱性；

(4)使用尽可能短的引物，以降低简并性，最短可用15～20个碱基。

(5)由于TaqDNA聚合酶在PCR扩增时容易掺人错误碱基，所以设计的引物，其3'端尽量使用具有简并密码的氨基酸。

22. 大肠杆菌产生核酸性内切酶是为了水解破坏外源的DNA，而大肠杆菌本身的DNA已经被甲基化修饰，所以不被其本身的核酸性内切酶所水解。

23. 不同。RNA可以被水解成单核苷酸，而DNA分子中的的脱氧核糖2'碳原子上没有羟基，所以DNA不被碱水解。

24. (1)EDTA是螯合剂，可同Mg2+离子螯合，使核酸酶失去了作用的辅助因子，而被抑制活性；

   (2)蔗糖增加缓冲液的黏度，保护DNA不易断裂。

25. (1)DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。

   (2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。