《诊断学》 第五节 自身抗体检测

一、类风湿因子的检测

类风湿因子（rheumatoid factor，RF）是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液内。主要为IgM型，也有IgG、IgA、IgD和IgE型。用乳胶凝集法测出的主要是IgM型；速率法敏感但不能分型。

【检测方法】

乳胶凝集法、浊度分析法、ELISA法。

【临床意义】

类风湿性疾病时，RF的阳性率可高达70％～90％，类风湿关节炎的阳性率为70％。IgG型与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关，IgM型与IgA型的效价与病情有关，与骨质破坏有关。其他自身免疫性疾病，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综合征、SLE、自身免疫性溶血、慢性活动性肝炎等也见RF阳性。某些感染性疾病，如传染性单核细胞增多症、结核病、感染性心内膜炎等也多呈现阳性反应。故本试验的特异性不高，应予鉴别诊断。

二、抗核抗体检测

（一）抗核抗体测定

广义的抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）的靶抗原不再局限于细胞核内，而是扩展到整个细胞成分，包括细胞核和细胞浆。经典的ANA是指针对真核细胞核成分的自身抗体的总称。ANA的类型主要是IgG，也有IgM、IgA。这种抗体无器官和种族的特异性。检测方法为间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence IIF）。以Hep-2细胞和鼠肝作抗原，固定于载玻片上，与受检者血清反应。血清中抗体与抗原结合，再加入FITC标记的抗人Ig，在荧光显微镜下可观察到ANA的荧光强度和荧光模型。抗核抗体的荧光模型主要包括核均质型：与抗ds-DNA、抗组蛋白和核小体抗体有关；核膜型：主要有抗核孔复合物和抗板层素两种抗体；颗粒型：与抗U1一RNP、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B等抗体有关；核点型：少核点型即p80盘曲蛋白抗体；多核点型即Spl00抗体；着丝点型：与抗着丝点抗体有关；核仁型：与针对核糖体、U3一RNP、RNA聚合酶的抗体、抗Scl-70抗体、PM-Scl抗体、抗原纤维蛋白抗体有关。细胞周期相关蛋白与增殖细胞核抗原有关；胞质抗体：与抗线粒体抗体、抗高尔基体抗体、抗溶酶体抗体、抗肌动蛋白抗体、抗Jo-1抗体等有关。

（二）可提取性核抗原抗体谱测定

可提取的核抗原（extractable nuclear antigens ENA）由多种相对分子质量不同的多肽构成，即双链DNA、Sm、核糖体、Scl一70（Sclerosis一70）、Jo-1、SS-B（Siogren-B）、SS-A（Siogren-A）和RNP等。利用免疫印迹试验可以对这些抗原的自身（抗ENA）抗体进行检测，用来反映某些自身免疫病的状况。

不同的抗核抗体对应的Hep一2细胞的荧光核型特点及临床意义见表4-8-2。不同的抗核抗体荧光核型图片见图4-8-1至图4-8-7。

（三）抗DNA抗体测定

抗DNA抗体（anti-DNA antibody）分为抗双链DNA（double stranded-DNA，ds-DNA）抗体、抗单链DNA（single stranded-DNA，ss-DNA）抗体和抗Z-DNA抗体。抗ds-DNA抗体的靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构，它的检测有临床重要性。检测抗ds-DNA抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光测定。

【结果判定】

短膜虫动基体均质性着色，核浆成弱均质性着色为阳性。

【临床意义】

1．抗ds-DNA抗体阳性见于活动期SLE，阳性率70％～90％。本试验特异性较高，但敏感性较低。目前认为，能结合补体的抗ds-DNA抗体，在SLE特别是并发狼疮性肾炎患者的发病机制中起重要作用。其他风湿病中抗ds-DNA也可阳性。

2．抗ss-DNA抗体阳性见于SLE（阳性率70％～95％），尤其是合并有狼疮性肾炎。还可见于一些重叠结缔组织病、药物诱导的狼疮和慢性活动行肝炎等，但不具特异性。

（四）抗胞质抗体测定

1．抗线粒体抗体（anti-mitochondrial antibodies，AMA）测定抗线粒体抗体是一种针对细胞质中线粒体内膜和外膜蛋白成分的自身抗体，无器官和种属特异性，该抗体主要是IgG。常用大白鼠胃或肾髓质和Hep一2细胞作抗原基质进行免疫荧光法测定。AMA已发现9种亚型（M1～M9）。

【结果判定】

Hep一2细胞胞质内泥沙样颗粒型着染。肾近曲、远曲小管细胞的特点是颗粒聚集成团。M3、M6在近曲小管荧光强。肝细胞胞质内均匀着染，胃壁细胞质着染（荧光图片见图4-8-8a，b，c）。

【临床意义】

许多肝脏疾病时可检出AMA 。其阳性率在原发性胆汁性肝硬化（PBC ）无症状者为90.5％，有症状患者为92．5％；慢性活动性肝炎可高达90％以上；但是，胆总管阻塞和肝外胆管阻塞为阴性。AMA 可作为原发性胆汁性肝硬化和肝外胆道阻塞性肝硬化症的鉴别诊断。此外，慢性活动性肝炎和门脉性肝硬化阳性率为25％。药物引起的自身免疫病为M3和

2．抗肌动蛋白抗体检测该抗体有几种不同的抗原包括肌动蛋白、非肌球蛋白的重链、原肌球蛋白。当肌动蛋白抗体单独存在时，有时可在胞质中观察到无数束状纤维结构，有时延伸到细胞核。

【结果判定】

Hep一2细胞胞质内有密集纤维状着染，但不形成网状。胃、平滑肌高度着染。肾小球基质细胞着染，肾小管上皮细胞基底部及肾小管的刷状缘着染。肝多角型着染，抗原肌球蛋白或抗a-肌动蛋白抗体，肝细胞胞质内的纤维成片状着染（荧光图片见．图4-8-9）。

【临床意义】

抗肌动蛋白抗体见于各种慢性肝脏疾病、肝硬化、原发性胆汁性肝硬化、I型自身免疫性肝炎，也见于重症肌无力、克罗恩病、长期血液透析。工型自身免疫性肝炎60％～90％有IgG型抗肌动球蛋白抗体，且效价高。

3．抗Jo-1抗体检测靶抗原是组氨酰一tRNA合成酶。其生理功能是催化tRNA接上组氨酸。J0-1抗体主要是IgG1型抗体。

【结果判定】

Hep一2细胞胞质有斑点状荧光颗粒，细胞核的核浆也显示明显的斑点状颗粒。期细胞在染色质周围呈散在的细颗粒（荧光图片见图4-8-10）。

【临床意义】

Jo-1抗体对肌炎伴间质性肺纤维化有高度特异性，抗体的效价与疾病的活动性相关。多发性肌炎、Jo-1抗体阳性及HLA-DR／一DRw52标志称为“Jo-1综合征”．其他胞浆抗体

图片见图4-8-11、4-8-12、4～8-13。

三、抗组织细胞抗体检测

（一）抗肾小球基底膜抗体测定

肾小球基底膜有内、外透明层及中间致密层构成的网状结构，它是由Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、纤维粘连蛋白和蛋白多糖组成。肺泡基底膜与肾小球基底膜化学成分相似，且两者具有交叉抗原性。

【结果判定】

抗GBM抗体阳性时，有3种荧光图形：在所有。肾小球基底膜处显示非常尖锐、线状或花瓣状着染；颗粒状着染；斑点状着染。

【临床意义】

抗肾小球基底膜抗体是抗基底膜抗体型。肾小球肾炎特异性抗体，包括Good-Pastue综合征、急进型肾小球肾炎及免疫复合物型肾小球肾炎。抗。肾小球基底膜抗体还见于药物诱导的间质性肾炎，但它在发病中的作用不明。抗肾小球基底膜抗体阳性的患者约有50％病变局限于。肾脏，另外50％有肾脏和肺部病变，仅有肺部病变者非常少见（荧光图片见图4-8-14）。

（二）抗胃壁细胞抗体测定

抗胃壁细胞抗体（parietal cell antibody，PCA）是器官及细胞特异性自身抗体，其靶抗原是分子量为94 000的ATP酶、胃壁细胞的质子泵和主细胞内分子量41 000的胃蛋白酶原。此抗体还可直接与促胃液素受体结合。

【结果判定】

小鼠胃壁细胞胞质内呈细小颗粒状着染。

【临床意义】

恶性贫血患者90％为PCA阳性。慢性萎缩性胃炎患者为100％PCA阳性。PCA的阳性率与胃黏膜病变的进展程度相关，但抗体效价与病变进展程度不相关，也不与治疗效果平行。PCA也见于许多胃黏膜萎缩、某些缺铁性贫血、十二指肠溃疡、甲状腺疾病、原发性艾迪生病和青少年型糖尿病患者等。大约1／3的甲状腺炎患者有抗胃壁细胞抗体（荧光图片见图4-8-15）。

（三）、抗甲状腺抗体测定甲状腺功能亢进、慢性甲状腺炎、甲状腺功能低下具有自身免疫病的特征，常可测出甲状腺抗体。抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺微粒体抗体在临床实验中应用最广，诊断价值也较3v。

1．抗甲状腺球蛋白抗体甲状腺球蛋白（Thyroglobulin，TG）是由甲状腺滤泡细胞合成的一种糖蛋白，抗甲状腺球蛋白主要是IgG。

【结果判定】

人或灵长类动物的甲状腺冷冻切片甲状腺腺泡内呈细小波浪状着染。

【临床意义】

90％～95％桥本甲状腺炎、52％～58%甲状腺功能亢进和35％甲状腺癌的患者可出现抗TG阳性。重症肌无力、肝脏病、风湿性血管病、糖尿病也可出现阳性。此外，有些正常人，特别是妇女，抗TG阳性率随年龄而增加，40岁以上妇女检出率可达18％。

2．抗甲状腺微粒体抗体（anti-thyroid microsome anti-body，抗TM）抗甲状腺微粒体抗体是针对甲状腺微粒体的一种抗体。

【参考值】

人或灵长类动物的甲状腺冷冻切片甲状腺腺泡上皮细胞胞质斑点状着染，核阴性。

【临床意义】

抗TM阳性检出率：桥本甲状腺炎为50％～100％；甲状腺功能减低症为88．9％；甲状腺肿瘤为13．1％；单纯性甲状腺肿为8．6％；亚急性甲状腺炎为17．2％～25％；SLE为15．4％～44．7％；其他风湿病为30％。正常人也有8．4％的阳性率。抗TG与抗TM同时检测，可以提高检出的阳性率。

（四）抗平滑肌抗体测定

抗平滑肌抗体（anti smooth muscle antibody，ASMA）主要为IgG类，也有IgM类。无器官和种属特异性，一般认为不结合补体。ASMA自身靶抗原为三组细胞骨架蛋白包括微纤维（G型肌动蛋白和F型肌动蛋白），中级纤维（波形蛋白和Desmin）和微管。

【结果判定】

鼠胃平滑肌呈均质型着染，肾小血管阳性。（荧光图片见图4-8-16a，b）

【临床意义】

抗平滑肌抗体主要见于自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、急性病毒性肝炎。其中F型肌动蛋白与自身免疫性肝炎、自身免疫性胆汁性肝硬化相关，G型肌动蛋白与酒精性肝硬化相关。此为波形蛋白与病毒感染、系统性自身免疫病、类风湿关节炎等相关；Desin可能与心肌炎相关。在药物引起的肝脏损伤、肝硬化、肝癌中，ASMA的检出率、效价均低，无诊断价值。

（五）抗心肌抗体测定

抗心肌抗体（myocardialantibody）的自身抗原包括线粒体内膜上的腺苷酸转移蛋白、心肌肌质蛋白，原肌球蛋白（可能与A组链球菌M蛋白交叉反应）和热休克蛋白。常用间接免疫荧光法检测。

【结果判定】

心肌细胞内与肌纤维方向垂直的横向带状着染（荧光图片见图4-8-17a，b）。

【临床意义】

心肌炎、心肌衰竭、风湿热、重症肌无力、心疾病和心脏手术后患者均可检测到抗心肌抗体。此外，0.4％的正常人和某些风湿性心脏病患者也可见此抗体。

（六）肝脏相关自身抗体测定

1．抗肝、肾微粒体抗体检测抗肝、肾微粒体抗体（1iver-kidney microsomal anti-body，LKM）可同时与肝和肾微粒体起反应，主要识别肝微粒体分子量为50000的蛋白质（细胞色素P450、CYP2D6）相应的抗原主要位于肝细胞的粗、滑面内质网的细胞质侧及肾脏近曲小管。LKM（保持一致）存在以下多种亚型：LKM-1，靶抗原是CYP2D6；LKM一2，靶抗原是细胞色素P450同工酶；LKM一3，靶抗原是UDP葡萄糖醛基转移酶。

【结果判定】

LKM-1：肝脏细胞呈强着染，但近门脉区肝细胞阳性者少；肾脏近曲小管远端1／3段的上皮细胞胞质着染，但较弱。LKM 一2：肝脏门脉区的肝细胞阳性率高；肾脏近曲小管近端1／3段的上皮细胞阳性多。LKM一3：肝、肾阴性，灵长类动物睾丸细胞胞质阳性。

【临床意义】

LKM-1见于自身免疫性肝炎（主要是妇女、儿童）、慢性丙型肝炎。LKM一2仅见于应用药物替尼酸治疗的患者。LKM 一3丁型肝炎相关。

2．抗可溶性肝抗原抗体检测抗可溶性肝抗原抗体（anti-soluble liver antigen，SLA）相应的靶抗原是一种存在于肝细胞质内的蛋白质一细胞角蛋白。这种抗原既没有种属特异性，也没有器官特异性。

【结果判定】

猴肝组织上肝细胞呈明显荧光着染，呈细颗粒到均质溶解状，大鼠肾组织为阴性（荧光图片见图4-8-18a，b）。

【临床意义】

SLA对Ⅲ型自身免疫性肝炎的诊断和鉴别诊断具有重要价值，大约25％的自身免疫性肝炎该抗体阳性。可用于指导临床治疗。

四、其他抗体检测

（一）抗中性粒细胞胞浆抗体测定

血管炎系指以血管壁（主要是动脉）炎症和坏死为基本病理所引起的一组疾病。现知抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）是血管炎患者的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异性指标。采用间接免疫荧光法检测，ANCA主要有两型：胞质型（cytoplasmic，cANCA）和核周型（perinuclear，pANCA）。cANCA针对的主要靶抗原是蛋白酶3（proteinase3，PR3），它是中性粒细胞嗜天青颗粒的主要成分。pANCA针对的主要靶抗原是髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO），它是中性粒细胞嗜天青颗粒的另一主要成分。

【结果判定】

cANCA：中性粒细胞胞浆内有荧光颗粒，细胞核阴性（荧光图片见图4-8-19a，b，c，d）。pANCA：中性粒细胞核周出现荧光着染，细胞核阴性（荧光图片见图4-8-20a，b，c，d）。

【临床意义】

cANCA主要见于韦格纳肉芽肿（Wegner’s granulomatosis，WG）。活动性WG患者在病变尚未影响到呼吸系统时cANCA 敏感度是65％，当病人已出现呼吸系统、肾脏损伤时其敏感度达90％以上。其他cANCA阳性的疾病还有坏死性血管炎、微小多动脉炎、．结节性多发性动脉炎等。

快速进行性血管炎性肾炎、多动脉炎、Chur-Strauss综合征、自身免疫性肝炎中pANCA的阳性率达70％～80％。pANCA 主要与多发性微动脉炎相关。pANCA还见于风湿性和胶原性血管炎、肾小球肾炎、溃疡性结肠炎、原发性胆汁性肝硬化等。

抗心磷脂抗体（anti-cardiolipin antibody，ACA）是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体。抗磷脂抗体与内皮细胞或血小板膜上的磷脂结合，破坏细胞的功能，造成血液的高凝状态；与红细胞结合，在补体的参与下，造成溶血性贫血。ACA是抗磷脂抗体中的一种，特异性较强，能干扰磷脂依赖的凝血过程，与各种疾病关系的研究较多。与自身免疫性疾病和抗磷脂综合征（APS）的关系较为密切。

【参考值】

ELISA法检测阴性，P／N≥2．1为阳性。

【临床意义】

ACA在SLE患者中阳性检出率高，达70％～80％，SLE患者中枢神经系统血栓形成与阳性ACA显著相关。血清及脑脊液中ACA的检测有助于神经精神性狼疮患者的临床诊断。高水平的ACA是急性脑血管病的预后不良的信号。ACLA在RA 患者的阳性率可达33％～49％，是了解疾病进展的实验室指标。约70％未经治疗的ACA阳性患者可发生自发性流产和宫内死胎，尤其是IgM型ACA可作为自发性流产的前瞻性指标。ACA阳性者血小板减少发生率均明显高于阴性者，以IgG型抗体多见，并与血小板减少程度有关。

（三）抗乙酰胆碱受体抗体测定

抗乙酰胆碱受体抗体（anti-acetylcholine receptor antibody，

AchRA）测定是针对运动肌细胞上乙酰胆碱受体的一种自身抗体。它可结合到运动肌细胞的乙酰胆碱受体上，破坏运动板，使神经～肌肉间的信号传递发生障碍，致运动无力。

【临床意义】

1．AchRA对诊断重症肌无力有意义，敏感性和特异性高，大约90％的患者阳性，其他眼肌障碍患者全部阴性。

2．可作为重症肌无力疗效观察的指标。

3．肌萎缩侧索硬化症患者用蛇毒治疗后可出现假阳性。

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