中国兰花的快速繁殖

组织培养是先进的无性繁殖方法。取用植物器官或组织的一小部分，脱离母体而加以培养，经过诱导和分化，使它再生成的新植株。也称为外植体培。     早在1902年，德国植物学家哈巴兰特（Haberlandt）预言：“植物细胞具有全能性，每个细胞都像胚胎细胞那样，可以经过体外培养成为一个完整的植株。”在这个假说指引下，法国科学家戈第勒（Gautheret）和诺贝库特（Nobecourt）用小块的胡萝卜根，于1938年成功地在试管中用培养基培养出愈伤组织。1939年，美国科学家怀特（White）用烟草茎段形成层进行组织培养和继代培养，也获得成功。他们的工作为植物细胞和组织培养技术的发展奠定了基础。1949年，美国斯库格等又从愈伤组织中分化出幼苗来，培养出了真正的试管植物。从此之后，组织培养的技术，不断创新改进，在实验上和应用上都获得日新月异的进展。     我们在学校开设的植物组织培养选修课上，进行了兰花组培的实验。下面谈谈自己在实验中的一些心得。

    兰花的茎尖组织培养，最早是法国人葛雷尔（Morel）在1960年获得成功的。他利用茎尖培养的目的是想除去兰属植物上的病毒，他得到了无病毒的幼苗。他发现兰属茎尖培养，可逐渐增大而形成类原球茎体，与兰花胚胎正常发育相似、经过分割，重复培养可以大量增殖、按照理论计算，l个外植体在1年之内可产生400万株苗之多。从此，组织培养技术被应用于兰花的繁殖，刀多年来形成了兰花的工厂化、商品化的生产。目前，兰花的各个部位，各个器官，即根、茎、叶、芽、花序、幼胚等都可以作为外植体进行培养。

    组织培养要有必要的设备和比较高的技术措施。首先要有培养室、无菌接种室及各种培养用具、用品等。在培养时要先配制培养基，剥取外植体，然后消毒、接种、转移，最后试管苗移植等，都需要比较复杂和细致的技术。现将组织培养的方法简介如下。

    培养基的配制,培养基是用各种不同成分和剂量的元素，加上各种维生素、激素等制成。兰花种类不同，培养基的成分也有所不同。大多数的培养基是用固体或半固体的，也有用液体培养的，在液体中培养则需特殊的通气方法，如常用的离心机或转动机，不停地将培养基转动。

    培养基须包括矿物质、糖、维生素及生长激素。在实际中用得最多的是MS培养基，或在此基础上加添少数激素。  MS培养基（ Murashige and Skoog basic medium）的成分如下：

    成分                                       用量（mg）

    NH4NO3铵                                   400

    Ca（NO3）2•4H2O钙                          144

    KNO3钾                                      80

    KH2PO4磷酸二氢钾                               125

    MgSO4 •7H2O硫酸镁                               72

    KCL氯化钾                                       65

    NaFe—EDTA螫合铁                                25

    H3BO3硼酸                                        16

    MnSO4 •4H2O硫酸锰                               65

    ZnSO4• 7H2O硫酸锌                               27

    KI碘化钾                                        0.75

    IAA吲跺乙酸                                       2

    Kinetin激动素                                0.04—0.2

    Thiamin维生素B1                                                    0.1

    Nicotinicacid烟酸                                   0.5

    Pyridoxine维生素B6                                 0.5

    Glycine甘氯酸                                       2

    Myo—inositol肌醇                                  100

    Casein—hydrolysate水解酪蛋白                      1000

    Sugar蔗糖                                         2%

    琼脂（洋菜）                                       l％

    蒸馏水                                         1000ml

    PH值为5.0-6.0

取外植体 首先是种子。在其他植物的组织培养中，一般而言，最容易的是用种子组培，即把种子接入空白培养基即可。而中国兰花却不同。由于中国兰花的种皮内含有大量空气，不易吸水，种子大多发育不完全，所以很难成功。并且，有一种理论还说中国兰花的种子是要在特定的细菌作用下才能萌发。所以中国兰花的种子很难组培成功，我们多次做的种子萌发试验也没有成功。                其次是芽。我选取的材料是建兰的芽。我把长得较好的建兰的大叶和根去掉，留下3厘米的叶子以及其内部。先用自来水冲洗干净，再用碘伏兑水泡3分钟，拿出用无菌水冲洗至少5遍，冲干净后放入75％的乙醇中浸泡30秒钟拿出，用无菌水冲洗至少5遍，然后放入1‰的氯化汞中浸泡6分钟至7分钟，（注意：时间太长会导致褐化，而时间太短会导致消毒不彻底，最终引起污染。）在超净工作台中取出，用无菌水冲至少5遍，放在无菌包上，用消过毒的镊子和刀把叶子层层剥去，直到留下0.5厘米，或者更小的芽为止，然后接入培养基。培养基可用 MS＋NAA1--5适量加苹果和香蕉等。（注意：中国兰花容易褐化，所以接种时尽量不要让它暴露在空气之中。）如不污染两个月左右就可抽出新叶了。                 最后是龙根。龙根的组培过程大致与芽的组培过程相同，但成活的可能性比芽高，不过龙根在市场极为少见,一旦成功其繁殖率极高。组培中国兰花的组织培养与其他植物大体相同，但由于其容易褐化，所以在组培过程中要注意观察。用组织培养的方法既容易产生变异的兰苗，平时应细心观察，对稍有变异表现的兰苗或龙根要及时移出，进行单独接种，并保护繁殖。坚持下去，便可得到有价值的变异兰苗。如果有褐化的，要及时把褐化部分清除，以免造成整瓶褐化。如果有污染，要进行救治。                                                    首先，让我们来了解一下什么叫做污染。污染的广义是混入有害的东西，而我们用肉眼能看到的这个“有害的东西”在植物组织培养中指的就是菌，这个“菌”分为两大类--真菌和细菌。真菌就是组培瓶里那些毛状的、颜色暗淡，多为白色、灰绿色或棕褐色的物质（如果表面有水，水会成水珠状并且会流动）。细菌就是组培瓶里那些粘稠状的、颜色鲜艳，多为红色、黄色或带光泽的蓝紫色物质（如果表面有水，水会与细菌混合，在细菌表面停留）。真菌污染的原因多是组培瓶等器械暴露在工作台之外，或在接种完毕封口时操作不当，致使真菌孢子进入瓶内。细菌污染是由于用具等消毒不彻底或接种操作人员在工作中造成消毒后器械的二次污染所致。                                                          通过区别真菌污染和细菌污染我们可以找到操作的漏洞，在以后的实践中改进而减少污染。在救治污染组培苗时要特别注意：真菌污染的组培苗在打开瓶口时，动作要轻，瓶口要背对工作台送风的方向，尽量避免孢子被风吹起而造成再污染。                                                                    而细菌污染的组培苗在救治时要把组培苗沾染异物部位切掉。 1．取出 先用镊子夹取出中国兰花，再用剪刀把已污染的部分剪掉（剪完后剪刀和镊子一定要放入酒精中消毒，下次用之前还要用火烤）。注意要尽量不带出培养基（因为瓶中所有的物质全部被污染），并且要把已有明显污染的部分去掉。 2．洗涤 先把污染的中国兰花放入75％的酒精中静置或晃动30秒再放入1 ‰的氯化汞溶液（注意：由于氯化汞有剧毒，所以小心使用）中静置消毒5分钟到9分钟（注意：时间太长对兰花有害，时间太短容易造成消毒不彻底），由于氯化汞难以去除，只有流水冲洗才会去掉，用无菌水至少五次震荡清洗，才能去掉残留氯化汞。 3．接种入培养基 过程同普通接种过程，以上步骤全部是在无菌工作台上进行操作。 这么做就可以挽救中国兰花了，不过你还是要注意经常细心观察，如果发现又被污染了就马上把上面的步骤重复一次，直到实在无法被挽救为止。                不过，如果是单纯的真菌污染，还有另外一种挽救方法。 1．取出 在外界条件下把中国兰花取出。 2．洗涤 先用水反复冲洗，再用氯化汞进行消毒（用5分钟到9分钟即可），然后用无菌水冲洗至少五次，冲后用75％的酒精浸泡30秒最后用无菌水冲洗至少五次即可。 3．接入培养基 过程同普通接入过程。 这就是挽救中国兰花及其他组培苗的过程了，不过特别要强调的是：（1）在挽救过程中一定要注意每一步的消毒工作，以免再次污染。（2）接入后如发现中国兰花变黑或是长时间没变化要耐心等待，因为这没准正是由于消毒工作成功，虽然龙根或植株的外部死亡，但它的中心部分还存活，最终会再生新绿。                    所以，挽救中国兰花及其他组培苗不仅需要时间、认真、细心，还需要耐心。 不过，如果你救治的中国兰花的组培苗龙根开始褐化，但长出新叶或新的气生根，那么你最好在超净工作台中取出，把龙根和苗分开接入新的培养基。 移栽 如果组培苗已经长得很大，就可以开始移栽了。由于有龙根的组培苗可以繁殖出新的个体，所以，移栽时最好选择带龙根的组培苗。                                较好的移栽基质有两种：一是纯珍珠岩。先把组培苗从组培瓶中取出，放入清水中冲洗干净，尽量做到不带培养基，因为培养基中的琼脂会使细菌大量繁殖，最终使植株死亡。然后往花盆里放入珍珠岩，并且把中国兰花的龙根完全埋在珍珠岩下，种完后把水浇透。 二是珍珠岩和苔藓混合物。这种种植方法要选用高的花盆。首先，把干净的苔藓放进花盆，上面留有够龙根和气生根充分展开的深度即可。然后，用珍珠岩填到兰苗的基部，再浇透水即可。 注意：中国兰花喜欢的环境是湿润的空气和较为干燥的基质，如果基质过于湿润，就会造成中国兰花根部的腐烂。