MTT法检测细胞相对数和相对活力

一、实验原理

MTT比色法是一种检测细胞存活率和增殖率的方法，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，其颜色深浅与酶活力成正比，所以测定570nm波长的O.D值可以反映琥珀酸脱氢酶活力高低，间接反映活细胞数量多少。

二、实验目的

了解并掌握MTT法的基本原理及基本过程。

三、实验器具

96孔细胞培养板、微量加样器、吸头、吸头盒、酶联免疫检测仪、显微镜、细胞计数板等。

四、实验方法 

1.细胞接种: 将处于对数生长期的细胞用培养基制成2×105细胞/ml的悬液，用微量加样器接种于96孔板中,每孔100ul, 边缘孔中不加细胞，仅加培养基作为无细胞空白。37℃培养箱中培养，使细胞贴壁。

2.加药: 弃去培养掖，于相应实验孔中加不同浓度的药物，每孔100ul，留数孔不加药，而加入等体积培养液作空白对照，继续培养24h。

3.加MTT: 弃培养液，每孔中加入200ul D-Hanks洗一次，每孔再加入100ul MTT(1mg/ml)，37oC继续培养4小时。

4.洗板:吸去MTT，每孔中加入200ul D-Hanks洗一次,最后吸干孔内液体。

5.溶解: 每孔中加入二甲亚砜 (DMSO)200ul，溶解细胞内MTT，室温下放30min, 并不时摇动。

6.测定: 在酶联免疫仪上于570nm波长处测定O.D值。以无细胞空白孔为零点，作好记录。