饮用水微生物检验操作规程

本SOP制订饮用水的微生物检测检验操作规程。

职责

实验室管理人员负责确保实验室人员接受该规程的正确培训并执行该规程。

相关实验室人员负责正确执行下述规程。

定义

微生物限度检查包括一般细菌和大肠埃希菌检查

程序/范围

A.仪器

PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液

营养琼脂培养基

胆盐乳糖培养基

MUG培养基

麦康凯琼脂培养基

1.  PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液

称取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液16.09 g，放入装有1 L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121 ℃高压灭菌15分钟。

2.营养琼脂培养基

称取营养琼脂培养基33 g，放入装有1 L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121 ℃高压灭菌15分钟。

3.  胆盐乳糖培养基

称取胆盐乳糖培养基35.8g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121℃高压灭菌20分钟。

4. MUG培养基

称取MUG培养基23.4g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，115℃高压灭菌20分钟。

5.    靛基质试液

取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。

6.麦康凯琼脂培养基

称取麦康凯琼脂培养基55g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121℃高压灭菌15分钟。

1.一般细菌的检验方法

a.取10 mL饮用水，置90 mL的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中(制备双份)，摇匀，以无菌操作将饮用水与缓冲液的混合液倒进无菌玻璃过滤杯中，打开真空泵进行过滤或者将混合液倒进HTY-100微生物限度检验仪中过滤。待样品经薄膜全部过滤完后, 滤膜分别菌面朝上贴于营养琼脂培养基平皿上，取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液替代样品同法操作,做为阴性对照. 

b.   培养：细菌（营养琼脂培养基平皿）于30-35 ℃培养箱培养3天。 

c.     标准：一般细菌每1mL不得过 100cfu。

2.大肠埃希菌的检查方法

a. 增菌培养：供试品：取饮用水10ml接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时。

阳性对照：取饮用水10ml和1ml（10～100cfu）大肠埃希菌接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时。

b.阴性对照：取PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时。

c.进一步培养：取上述供试品、阳性对照、阴性对照的培养物0.2ml，接种至含5mlMUG培养基的试管内，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。30-35℃培养箱培养。

d.于5、24小时在365nm紫外灯下观察，若MUG管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。

e.观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液。液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。

f.判定：如MUG阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌;如MUG阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。

g.如MUG阳性、靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。

h.若平板上无菌落生长或生长的菌落与下表所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。若平板上生长的菌落与下表所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的鉴定试验，确认是否为大肠埃希菌。

参考

  2010版中国药典

附属文件    

  饮用水微生物检验原始记录