血液中DNA的提取

1M Tris•Cl：121.14g Tris碱溶于800ml双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至1L，高压灭菌。高压灭菌条件为1.034×105Pa，20min。

0.5M EDTA：EDTA 186.1g溶于800ml双蒸水中，用NaOH调pH值至8.0，定容至1L，高压灭菌。

10%SDS：SDS 100g溶于900ml双蒸水中，加热至68℃助溶，用HCl调pH值至7.2，定容至1000ml。

TE缓冲液：量取1ml 1M Tris•Cl（pH8.0），加上0.2ml 0.5M EDTA（pH8.0），定容至100ml，高压灭菌（终浓度10mM Tris•Cl（pH8.0），1mM EDTA（pH8.0））。

20×SET缓冲液：17.532gNaCl，12.114gTris碱，0.7444gEDTA，溶于50ml双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至100ml，高压灭菌。（终浓度3M NaCl，1M Tris•Cl（pH 8.0），20mM EDTA（pH 8.0））。

蛋白酶K贮存液：10mg蛋白酶K溶于1ml的灭菌水中，于-20℃冰箱中贮存。

酚/氯仿/异戊醇：将其按24：23：1的比例混合放入棕色瓶中，于4℃贮存。

氯仿/异戊醇：将氯仿和异戊醇按规定的23：1混合，在棕色瓶中室温下贮存。

2、样品的采集及血液DNA提取

（1）样品的采集

将10ml的玻璃瓶及塑胶盖洗净灭菌，翅静脉抽取鹌鹑血液放入小瓶中（小瓶内事先加入肝素钠抗凝），注意在采集鹌鹑血的时候要尽量减少污染，动作应迅速。

（2）血液DNA提取步骤

⑴ 用灭菌的1ml头从小瓶中吸取500μl血样，放入1.5ml的EP管里。

⑵ 向管内加445μl 1×SET、25μl蛋白酶K（10mg/ml）、25μlSDS（10%），混匀。

⑶ 55℃空气浴振荡过夜。

⑷ 加500μl Tris饱合酚，上下颠倒10min。

⑸ 12000rpm离心10min，小心吸取上层水相于新的EP管中。注意不要触到、吸入中层蛋白质，其严重影响DNA的质量和后续反应。

⑹ 在吸得的上层水相中加入等体积酚、氯仿、异戊醇（24：23：1）混合液，上下颠倒10min。

⑺ 12000rpm离心10min，小心吸取上层水相于新的EP管中。

⑻ 加入等体积氯仿、异戊醇（23：1）混合液，上下颠倒10min。

⑼ 10000rpm离心10min，小心吸取上层水相于新的EP管中。

⑽ 加2倍体积无水乙醇（-20℃预冷），横向振荡3min。

⑾ 10000rpm离心10min，管底可见白色DNA沉淀。

⑿ 加1ml70%乙醇悬浮、洗涤DNA沉淀。

⒀ 8000rpm离心5min，倒掉乙醇，将EP管倒置在滤纸上直至管中的乙醇完全挥发。

⒁ 加100μl TE缓冲液，置55℃水浴中至DNA完全溶解。

⒂ 进行基因组DNA的浓度测定和质量检测。

3、基因组DNA的浓度测定和质量检测

使用安法玛西亚公司的分光光度计，测定DNA浓度。根据记录的OD260/280比值，估测DNA质量，一般OD260/280在1.6～1.8之间，可以满足实验要求。根据记录的OD260数值及稀释倍数，换算出待测DNA的浓度，并作相应的稀释，以50ng/μl分装，作为工作液4℃保存使用，DNA原液于-20℃保存。