微生物学实习报告

姓名：余洋               专业：临床         日期：2010/10/12         成绩：

合作者：金泽健 陈锦超    显微镜号：

实验室：第一实验室       教师姓名：

无菌操作技术

【摘要】无菌操作技术是整个微生物实验的关键环节，无菌操作技术掌握的熟练程度直接影响着以后整个实验过程。为了认识无菌操作的重要意义，学习基本的无菌技术。我们通过实验室空气微生物学检查，手上细菌的接种和培养，紫外线杀菌试验来熟悉无菌操作技术。

实验结果表明：1)培养皿在空气中暴露的时间越长，培养皿上形成的菌落就越多。2)由于洗手后未擦干所形成的培养皿上的菌落数比未洗手造成的菌落多。3)照射紫外线的部分菌落数为0，而未照射部分有大量菌落形成。

【关键词】无菌操作；空气沉降；紫外线杀菌；细菌的接种

引言

医学微生物的实验操作对象大多为致病的微生物。由于各种微生物的致病力与传染途径不同，故对不同微生物实验操作也不同。作为实验者必须严格遵守实验操作规则，精益求精把握好实验中的一些细节问题。既要防止自身感染。又要杜绝将病原微生物散布于实验室外的一切可能，而无菌操作技术就是实验成功和防止感染的保证。

本实验结合微生物学实验课“可观测性”的特点，结合三个实验进行细菌形态观察，向学生介绍肉眼可见的细菌菌落。使同学对工作环境无菌及无菌操作在微生物实验中的重要作用加深了解。

实验材料和方法

1.实验仪器和材料

仪器：接种环、载玻片、酒精灯、培养皿等

材料：SE菌和E.coli，空气及手上细菌

2．实验步骤

⑴ 实验室空气微生物学检查：

采用自然沉降法检查空气中的细菌。取普通培养基8个，将盖打开，分别暴露空气5，10，15，20，25，30，35，40分钟，然后盖上盖，于平板底部贴上标签，置37℃温箱培养，观察菌落生长情况。

2手上细菌的接种培养：

取普通培养基一个，用笔在培养基的底部划线成2等份。并编号1、2（洗手和不洗手）。在无菌间或酒精灯旁进行，先用右手食指涂1号格，再将右手食指用自来水清洗后涂2号格。于37℃培养后结果观察。

⑶ 紫外线杀菌试验：

取普通培养基一个，用笔在培养基的底部划线成2等份。并编号1、2。以无菌操作【1】的手法，用接种环分别接种SE菌和E.coli到1，2部分。

将接种好的培养皿半开放置紫外灯下照射40分钟。盖上培养皿盖，放37℃温箱中培养。观察结果，从培养箱中取出培养皿，观察其上细菌生长情况，从菌苔特点判断是否有杂菌污染，以判断无菌操作是否合格。

微生物学实习报告

姓名：余洋                专业：临床         日期：2010/10/12         成绩：

合作者：金泽健 陈锦超     显微镜号：

实验室：第一实验室        教师姓名：

试验结果

1.实验室空气微生物学检查

不同曝露时间培养皿中菌落生长情况

从培养皿上看，洗手后未擦干所形成的培养皿上的菌落数比未洗手造成的菌落多。

3.紫外线杀菌试验

             培养皿上各处细菌菌落生长情况

1. 实验室空气微生物学检查

空气不是微生物存在的自然环境，但空气中带有细菌也常是培养基制备污染的来源。实验室内学生多，大声说话，咳嗽由上呼吸道喷出的微生物可播散到空气中。空气中的细菌在重力的作用下不断向下沉降，降落到培养皿中，曝露时间也长，培养皿中降落的细菌也越多，因此形成的菌落也越多。

2. 手上细菌的接种培养

洗手后未擦干所形成的培养皿上的菌落数比未洗手造成的菌落多。可能原因是由于只用自来水洗而且未擦干，可能并未洗掉手上的细菌，反而带来了大量水中的杂菌。且手上的水在划线时也沾染到培养基上，增加了水分，可能使培养环境更适合细菌生长。

3. 紫外线杀菌试验

  紫外线消毒在临床上常用，但其穿透力弱，不宜透过普通玻璃、纸张、尘埃等。因此直接照射紫外线的细菌死亡，培养基上没有菌落出现。而有玻璃盖阻挡的部分菌落生长良好。

（另：结合其他组数据可知：紫外线照射时间越长，菌落数越少，灭菌效果越好。）

 实验不足

在实验方案设计上，实验2中应该添加上洗手后擦干的操作，而且最好都用洗手液洗。

另外结果记录中应该添加上别组数据，研究不同曝光时间下紫外线杀菌效果。由于数据不方便收集只能放弃。

微生物学实习报告

姓名：余洋               专业：临床         日期：2010/10/12         成绩：

合作者：金泽健 陈锦超    显微镜号：

实验室：第一实验室       教师姓名：

注意事项

1.热的接种环应在培养基无菌生长区稍加降温后，再刮取细菌。否则易损伤细菌且易产生微生物气溶胶引起感染。

2.细菌培养时，培养皿应底部朝上倒置放在培养箱中。因为皿盖朝上正向放置时，37℃条件下培养基中水分挥发可凝集在皿盖上，形成液滴，液滴滴落在琼脂表面，易引起培养物污染或单菌落连接在一起成片生长。

参考文献：

【1】《医学免疫学与病原生物学实验教程》，王月丹主编，北京大学医学出版社，2008年。

附录

【1】无菌操作技：用接种环取菌时，先将接种环以45 度角插入酒精灯火焰的内焰处烧灼片刻，再移至外焰烧灼片刻，之后将接种环横过来水平移动，烧灼全部镍铬丝部分。以无菌操作手法打开培养物，将烧灼灭菌的接种环在琼脂表面或试管壁上冷却6~8秒，取少许菌苔或菌液，同样以无菌操作的手法接种至新鲜培养基内。取菌时如果接种环过热，接触菌液或菌苔时易产生感染性气溶胶，引起自身感染或污染环境，也会杀死菌种。接种应在火焰附近进行，蘸有细菌的接种环不能碰触衣物和操作台等其它物品。接种结束要立即将染菌金属丝用火焰灭菌，并将接种柄置于接种架上。所有无菌操作完毕，应将带有细菌物品妥善处理，并将其空间进行紫外线消毒。