DNA的粗提取与鉴定知识梳理

一、提取生物大分子的基本思路

1．基本思路：选用一定的＿＿＿＿＿＿＿方法分离具有＿＿＿＿＿＿＿＿的生物大分子。

2．提取DNA的方法

（1）概念：利用DNA与＿＿＿＿、＿＿＿＿和＿＿＿＿等在物理和化学性质方面的＿＿＿＿，提取DNA，去除其他成分。

（2）原理：

①分离

DNA和＿＿＿＿等其他成分在不同浓度的＿＿＿＿溶液中溶解度不同，利用这一特点选择适当的＿＿＿＿就能使DNA充分溶解，而使＿＿＿＿＿沉淀，或者相反，以达到分离目的。

②提纯

a．DNA不溶于＿＿＿＿，但是某些＿＿＿＿＿＿则可溶于其中。

b．＿＿＿＿＿＿能水解蛋白质，但是对＿＿＿＿＿没有影响。

c．大多数蛋白质不能忍受＿＿＿＿的高温而发生变性，而DNA在＿＿＿以上才会变性。

利用以上原理可以将DNA与蛋白质进一步分离。

③鉴定

在沸水浴的条件下，DNA被二苯胺染成蓝色。

（3）＿＿＿＿＿＿能够瓦解细胞膜，但对＿＿＿＿没有影响。

二、实验设计

1．实验材料的选取

选用＿＿＿＿＿＿含量相对较＿＿＿的生物组织。

2．破碎细胞，获取含DNA的滤液

（1）动物细胞的破碎——以鸡血为例

在鸡血细胞液中加入一定量的＿＿＿＿，同时＿＿＿＿＿，＿＿＿＿后收集＿＿＿＿即可。

（2）植物细胞的破碎——以洋葱为例

先将洋葱切碎，然后加入一定的＿＿＿＿＿＿＿＿，进行＿＿＿＿＿，过滤后收集研磨液。

3．去除滤液中的杂质

（1）方案一：通过控制＿＿＿＿＿的浓度去除＿＿＿＿＿。

（2）方案二：直接向滤液中加入＿＿＿＿＿，反应10min～15min，＿＿＿＿＿中的＿＿＿＿＿能够分解蛋白质。

（3）方案三：将滤液放在＿＿＿＿＿的恒温水浴箱中保温10min～15min，注意严格控制温度范围，使＿＿＿＿＿沉淀析出而＿＿＿＿＿分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分离。

4．DNA的进一步提纯

利用DNA不溶于冷却的＿＿＿＿＿这一原理，可从＿＿＿＿＿中析出较纯净的DNA，此时DNA的状态为＿＿＿＿＿。

5．DNA的鉴定

将呈＿＿＿＿溶解于5mL物质的量浓度为＿＿＿＿＿＿溶液中，再加入4mL的＿＿＿＿＿试剂，＿＿＿＿＿加热5min，冷却后观察溶液的颜色。注意要同时设置＿＿＿＿＿实验。

三、操作提示

1．以血液为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g＿＿＿＿＿，防止＿＿＿＿＿。

2．加入＿＿＿后，动作要＿＿＿＿＿，否则容易产生大量的＿＿＿＿＿。加入＿＿＿＿＿和用＿＿＿＿时，动作要轻缓，以免加剧＿＿＿＿＿，导致DNA分子不能形成＿＿＿＿。

3．二苯胺试剂要＿＿＿＿＿＿＿。

【答案】

一、1．物理或化学　　不同物理或化学性质

2．（1）RNA　　蛋白质　　脂质　　差异　　（2）蛋白质　　NaCl　　盐浓度　　杂质　　酒精　　蛋白质　　蛋白酶　　DNA　　60～80℃　　 80℃　　洗涤剂　　DNA

二、1．DNA　　高

2．（1）蒸馏水　　用玻璃棒搅拌　　过滤　　滤液　　（2）洗涤剂和食盐　　充分搅拌和研磨　　过滤

3．（1）NaCl溶液　　杂质　　（2）嫩肉粉　　嫩肉粉　　木瓜蛋白酶　　（3）60～75℃　　蛋白质　　DNA

4．酒精　　冷却的酒精　　白色丝状

5．丝状的DNA　　2mol/L的NaCl　　二苯胺　　沸水浴　　对照

三、1．柠檬酸钠　　血液凝固　　

2．洗涤剂　　轻缓柔和　　泡沫　　酒精　　玻璃棒搅拌　　DNA分子的断裂　　絮状沉淀　　现配现用