初始污染菌检验规程

1. 目的 

检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。 

2. 适用范围 

适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。 

3.职责 

由质检部负责执行实施。

4.技术要求

产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g

5.引用标准

GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准

中华人民共和国药典（2015版）

GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物学试验方法

6.试剂和培养基

6.1洗脱液 0.9%Nacl  

称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。

6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基

取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为7.3±0.2，

灭菌分装。

6.3玫瑰红钠琼脂培养基

玫瑰红钠琼脂培养基31.5 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为6.0±0.2，

灭菌分装。

7.仪器设备

锥形瓶  量筒 高压灭菌锅 试管 灭菌培养皿 灭菌刻度吸管 超净工作台  酒精灯 恒温培养箱 洗耳球

8.操作方法

 8.1样品处理 

    8.1.1无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。 

8.1.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。

  8.2接种

8.2.1需厌氧菌

取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。

8.2.1霉菌

取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。

  8.3培养

    需厌氧培养基置于37℃培养3d  ，霉菌培养置于28℃培养5d

9.观察计数

达到培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，记录每个平皿菌落数

10.结果计算与报告

   10.1公式

           污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重

   10.2菌落计数基本规则 

 选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。  菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。 

       如果样品菌落总数超过标准的规定，则按10N逐批稀释 

   10.3填写试验记录，报告结果