蛋白酶酶切位点

蛋白酶的分类及作用位点

木瓜蛋白酶 巯基蛋白酶 具有广泛特异性 TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白,烷化剂 

胃蛋白酶    酸蛋白酶     广泛特异性                 胃蛋白酶抑制素 

胰蛋白酶  丝氨酸蛋白酶  在K或R之后 TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽抑肽酶,α巨球蛋白

人体20种氨基酸及其英文缩写

名称     三字符号 单字符号 

丙氨酸      Ala     A 

精氨酸      Arg     R 

天冬氨酸   Asp      D 

半胱氨酸   Cys      C 

谷氨酰胺   Gln      Q 

谷氨酸    Glu/Gln   E 

组氨酸     His       H 

异亮氨酸   Ile        I 

甘氨酸     Gly      G 

天冬酰胺   Asn      N 

亮氨酸     Leu      L 

赖氨酸     Lys       K 

甲硫氨酸   Met      M 

苯丙氨酸   Phe      F 

脯氨酸     Pro       P 

丝氨酸     Ser       S 

苏氨酸     Thr       T 

色氨酸     Trp       W 

酪氨酸     Tyr       Y 

缬氨酸     Val       V

【生化】特异性蛋白酶的酶切位点

胰蛋白酶arg、lys，得到以arg、lys为C末端残基的肽段。 胰凝乳蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。 胃蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。 木瓜蛋白酶arg、lys。 葡萄球菌蛋白酶，磷酸缓冲液ph7.8时断裂glu、asp。碳酸氢铵缓冲液ph7.8或醋酸铵缓冲液ph4.0时断裂glu。 梭菌蛋白酶arg，用于不溶性蛋白的长时间裂解。 CNBr断裂Met。 羟胺断裂asn—gly间的肽键。 二硫键可以用巯基化合物还原法或者过甲酸氧化法断裂.。

木瓜蛋白酶（Papain），又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。

木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。纯木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，约占可溶性蛋白质的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，约占可溶性蛋白质的45%；（3）溶菌酶，分子量25000，约占可溶性蛋白质的20%；及纤维素酶等不同的酶。

番木瓜未成熟果实中含有木瓜蛋白酶(Papain)、木瓜凝乳蛋白酶A(Chymopapain A )、木瓜凝乳蛋白酶B(Chym opapain B )、木瓜肽酶B (PapayaPeptidase B ) 等多种蛋白水解酶。且已知四种半胱氨酸蛋白酶的一级结构具有高度的同源性。其中，木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。

木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。此酶属内肽酶，能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO-NH—生成分子量较小的多肽类。

最适合pH值5.7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点I= 8.75；最适合温度55～60℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。

胃蛋白酶为什么不水解自身_

胃蛋白酶是一种酸性蛋白酶。由胃部中的胃粘膜主细胞释放出没有活性的胃蛋白酶原。酶原 在遇到由胃壁细胞所释放的胃酸中的盐酸后切去 44个氨基酸残基将被激活，其最适pH值约为 1.5～2.2，在中性或碱性pH值的溶液中，胃蛋白酶 会发生解链而丧失活性。胃蛋白酶在对蛋白质或 多肽进行水解时，具有一定的氨基酸序列特异性， 倾向于水解氨基端或羧基端为芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸）或亮氨酸的肽键。

胰蛋白酶和糜蛋白酶：

糜蛋白酶潜在切点太多了，你联合用的话会出好多峰，要控制好反应时间或者建议glu-C配合trypsin  切E + K + R

或glu-C + lysyl endopeptidase  切 E + K

都很特异，比较好的结果，顺便说一下 trypsin太猛 不要放太多。

搭配糜蛋白酶 反应要彻底点，主要的切点 W Y F T