初始污染菌测试作业指导书

建立产品的初始污染菌的检验规程，规范检验人员操作，确保产品质量。

2 范围

适用于本公司产品灭菌前和非灭菌产品的初始污染菌检测。

3 职责

质量部负责作业指导书的制定及执行。

4 检验依据

4.1 ISO11737.1-2018医疗器械的灭菌微生物学方法 第一部分：产品上微生物总数的测定

4.2 中华人民共和国药典(2015年版)1105非无菌产品微生物限度检查法:微生物计数法。

4.3 中华人民共和国药典(2015年版)1106非无菌产品微生物限度检查法:控制菌检查法

5 作业内容

5.1试验前准备

事先准备好试验指导书、记录本等。

5.2主要仪器、器具及用品

微生物限度检查仪、无菌滤杯、0.45um无菌滤膜、无菌锥形瓶、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、恒温培养箱恒温培养箱、90mm培养皿、无菌生理盐水。

5.3培养基的配置

TSA：取40g胰蛋白胨大豆琼脂培养基溶解于1000ml纯化水，加热煮沸后密封灭菌，无菌检测后备用。

SAB：取65g沙氏葡萄糖琼脂培养基溶解于1000ml纯化水，加热煮沸后密封灭菌，无菌检测后备用。

0.9%生理盐水 ：9gNaCl溶解于1000ml纯化水，每份250ml分装于锥形瓶中，灭菌后备用。

5.4取样

5.4.1同一批次产品数<50件，抽取3件；同一批次产品数为50~100件，抽取5件；同一批次产品数>100件，抽取10件。

5.4.2新产品在首次生产时，抽取10 PCS（若有多个规格，按照最大规格3 PCS，最小规格3PCS，中间规格4 PCS的原则抽取）按照测试初始污染菌和校正因子。

5.5试验

5.5.1每瓶一份样品，按无菌操作原则剪成2～5cm 的碎片，移入装有250ml生理盐水的无菌锥形瓶中,充分震荡后备用。

5.5.2滤膜和滤杯安装好在微生物限度仪上，将5.4.3的洗脱液分别加入两个滤杯中，开启微生物限度仪过滤。

5.5.3过滤完成后无菌操作取下滤杯将两张滤膜载菌面分别放入TSA皿和SAB皿中，并做好标识。

5.5.4细菌培养，将5.5.2中的TSA平皿倒置于30～35℃（温度设定值32℃）恒温培养箱内3天后，取出计菌落数。

5.5.5真菌培养，将5.5.3中的SDA平皿倒置于20～25℃（温度设定值23℃）恒温培养箱内7天后，取出计菌落数。

6校正因子测定

6.1按照5.4要求抽取样品10pcs，并按照5.5.1-5.5.5的要求处理样品用记号笔做好标识为第一次洗脱。

6.2向装有样品的三角瓶内加入250ml无菌生理盐水，并按照5.5.1-5.5.5的要求处理样品用记号笔做好标识为二次洗脱。

6.3向装有样品的三角瓶内加入250ml无菌生理盐水，并按照5.5.1-5.5.5的要求处理样品用记号笔做好标识为三次洗脱。

6.4向装有样品的三角瓶内加入250ml无菌生理盐水，并按照5.5.1-5.5.5的要求处理样品用记号笔做好标识为四次洗脱。

6.5向装有样品的三角瓶内加入250ml无菌生理盐水，并按照5.5.1-5.5.5的要求处理样品用记号笔做好标识为五次洗脱。

6.6将洗脱5次后的样品均分到两个无菌平皿内，1个皿内加入适量TSA培养基（刚好覆盖样品），另外1个皿内加入适量SDA培养基（刚好覆盖样品），用记号笔做好标识为琼脂覆盖。

7结果计算：

7.1 校正因子=

7.2 每份样品初始污染菌= 2×（细菌菌落数 + 真菌菌落数）×校正因子

8 结果评定

8.1口罩初始污染菌的细菌要求值≤30 CFU /g。

8.2其他产品细菌总数不超过100cfu/件次。

9 试验频次：逐批

10 质量记录

10.1《初始污染菌检测报告》 

10.2《校正因子测定报告》