考研分子生物学-生物考研

问答

1.简述基因工程的原理和过程

原理：将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，再转入另一种生物（受体）体内，使之按人们的意愿稳定遗传，表达出新产物或新性状。

不同基因具有相同的物质基础；基因是可切割的；基因是可转移的；遗传密码是通用的；基因可通过复制把遗传信息传递给下一代；肽段与基因之间存在对应关系

过程：获得目的基因；载体的选择与制备；构建基因表达载体；目的基因转入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。

2.基因治疗的载体有几种？各有何优缺点？

两种：病毒载体和非病毒载体；

病毒载体：转染效率高；但制备困难，容量小，靶向特异性差及自身免疫原性和存在生物安全问题

非病毒载体：安全，制备简单，容量大，免疫原性低，但效率不高

3.试述复制和转录 相同与不同之处

相同：遵循碱基互补原则；以DNA为模板；需要依赖DNA的聚合酶；合成方向5‘-3’；生成磷酸二酯键。

不同：

大多数真核生物mRNA 会在5‘端以7甲基-鸟嘌呤及三磷酸鸟苷为起始分子结构，称为帽子结构；帽子结构在翻译起始时有促进核糖体与mRNA结合，加速翻译起始的作用，同时可以增强mRNA稳定性

在真核生物mRNA 会在3‘末端，大多数有一段长短不一的多聚腺苷酸结构，称为多聚A尾，一般有十到几十个腺苷酸链接而成。目前认为是RNA合成后加上去的，会随着mRNA存在的时间延长逐渐变短，目前认为这种3’末端结构可能与mRNA从核内向核质转位及mRNA稳定性有关

5.简述基因诊断的研究进展及前景

基因诊断指利用现代分子生物学和分子遗传学的原理和方法，通过检测基因的存在、结构缺陷或表达功能异常，对人体状态和疾病做出诊断的方法和过程

基因诊断已在临床遗传学，肿瘤，法医等领域有着广泛的应用，如遗传病诊断，产前诊断，DNA指纹鉴定等，目前主要的基因诊断方法有核酸分子杂交，PCR，测序及基因芯片等方法

前景：分子生物学和分子遗传学的飞速发展必将极大的促进基因诊断技术的进步，如二代，三代等测序技术的发展， 基因诊断将极大发展，如个体化用药指导等以基因诊断为基础的精准医疗将极大促进医疗进步

6.基因诊断的方式有很多，目前常采用的技术方法有几种？并简述其基本原理。

PCR：设计并合成一组跨越突变（缺失或插入）断裂点的引物，将待测DNA样本进行PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，从扩增片段的大小判断是否存在缺失或突变。 

基因芯片：采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的探针固化于支持物表面，产生二维探针微阵列，然后与标记样品进行杂交，通过检测杂交信号对生物样品进行快速，并行高效的检测或诊断

直接测序：通过如高通量测序直接测出基因的序列，最准确

Southern印迹法：又称DNA印渍术，是将存在于凝胶中的DNA分子转移（印渍）于固定化介质上并加以检测分析的技术。DNA转移至固相支持体的过程中，各个DNA片段的相对位置保持不变，用放射性标记的DNA与固着于滤镜上的DNA杂交，经放射自显影锁定与探针互补的电泳条带的位置。该技术主要用于基因组DNA的分析。

性片段长度多态性分析：该技术利用性内切酶能识别DNA分子的特异序列，并在特定序列处切开DNA分子，即产生性片段的特性，对于不同种群的生物个体而言，他们的DNA序列存在差别。如果这种差别刚好发生在内切酶的酶切位点，并使内切酶识别序列变成了不能识别序列或是这种差别使本来不是内切酶识别位点的DNA序列变成了内切酶识别位点。这样就导致了用性内切酶酶切该DNA序列时，就会少一个或多一个酶切位点，结果产生少一个或多一个的酶切片段。这样就形成了用同一种性内切酶切割不同物种DNA序列时，产生不同长度大小、不同数量的性酶切片段。后将这些片段电泳、转膜、变性，与标记过的探针进行杂交，洗膜，即可分析其多态性结果。

单链构象多态性诊断法：单链构象多态性（signlestrand conformation polymorphism，SSCP）是指单链DNA由于碱基序列的不同可引起构象差异，这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率不同，从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或手稿的检测。用SSCP法检查基因突变时，通常在疑有突变的DNA片段附近设计一对引物进行PCR扩增，然后将扩增物用甲酰胺等变性，并在聚丙烯酰胺凝胶中电泳，突变所引起的DNA构象差异将表现为电泳带位置的差异，从而可据之作出诊断。

寡核苷酸探针诊断法：当基因的突变部位和性质已完全明了时，可以合成等基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide，ASO）用同位素或非同位素标记进行诊断。探针通常为长20bp左右的核苷酸。用于探测点突变时一般需要合成两种探针，一种与正常基因序列完全一致，能与之稳定地杂交，但不能与突变基因序列杂交；另一种与突变基因序列一致，能与突变基因序列稳定杂交，但不能与正常基因序列稳定杂交，这样，就可以把只有一个碱基发生了突变的基因区别开来。

7.简述乳糖操纵子（operon）的正负调节机制

1）乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含有Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、半乳糖苷透性酶和半乳糖乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动子P和一个调节基因I。

2）阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种机制为可诱导的负调节。

3）CAP的正性调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调节，加速合成分解乳糖的三种酶。

4）协调调节：乳糖操纵子中I基因编码的阻遏蛋白的负调节与CAP的正两种机制，互相协调，互相制约。

8.PCR与细胞内DNA复制两者有哪些主要的相同点和不同点，各举出5个。

相同：原料都是dNTP, 遵循碱基互补配对（A-T,C-G）,都需要引物，都需要消耗能量，都需要酶，都需要模板，都能扩增模板DNA

不同：

点突变：膀胱上皮H-ras序列与膀胱癌细胞株h-ras序列差别只是外显子的一个碱基不同

基因易位:基因领域效应可抑制原癌基因的表达，使之处于非激活状态，基因易位使基因重排，基因领域效应消失；B淋巴细胞癌常由于基因重排是c-myc的表达失控

强启动子的插入：前病毒基因组中长末端重复序列内启动子和增强子整合在C-myc,活化了C-myc

基因扩增：如人的急性粒细胞白血病的HL-60细胞株发现c-myc基因大量扩增

低甲基化：转录区的cpG岛甲基化可抑制基因转录；低甲基化，某些癌基因如h-ras、c-myc将大量表达

11.基因工程中常用α互补来筛选重组质粒，请说明其原理。

α互补是指Lac基因上缺失经操纵基因区段的突变体与带有完整近操纵基因区段的阴性的突变体之间形成功能互补。在重组质粒中装入一个大肠杆菌乳糖操纵子的DNA片段(LacZ基因)，质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达，与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补，产生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物X0gal和诱导剂IPTG后，出现蓝色的菌落。如果在多克隆位点上插入外源基因，将使lacZ基因灭活，不能生成有活性的半乳糖苷酶，结果出现白色菌落。

12.列出四种天然存在的具有催化活性的RNA：Ⅰ型内含子、Ⅱ型内含子、RNaseP、锤头型核酶。

13.什么是分子伴侣？其促进蛋白质折叠的机理？

分子伴侣是细胞中的一大类蛋白质，是由不相关的蛋白质组成的一个家系，它们介导其它蛋白质的正确装配，但自己不成为最后功能结构中的组分。

1.分子伴侣通过提过一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构；

2.分子伴侣可逆性的与未折叠的肽段的疏水部分结合后又松开，如此反复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠；

3.分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之结局后再诱导其正确折叠；

4.分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确形成起了重要的作用。

14.什么是酮体？酮体的生成和利用有哪些酶类？酮体代谢的特点和意义。

酮体是脂肪氧化的中间产物，即乙酰乙酸，β-羟丁酸和丙酮统称。HMGCoA合成酶是此途径的限速酶；还有乙酰乙酸辅酶硫解酶；HMGCoA裂解酶，β-羟丁酸脱氢酶。 酮体在肝脏生成，肝外利用。酮体生成是肝脏输出能源的一种方式，葡萄糖不足时，可以提供能量。大脑不能利用脂肪酸，可利用酮体，其可通过毛细血管壁。 酮体利用的增加可减少糖的利用，有利于维持血糖水平恒定，节省蛋白质消耗。

15.简述PCR的基本原理及其应用

PCR，聚合酶链式反应，基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板互补的寡核苷 酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成 新的DNA合成。不断重复这一过程，可使目的DNA片段得到扩增。因为新合成的DNA 也可以作为模板，因而PCR可使DNA的合成量呈指数增长。

应用：分子生物学等学科的研究、基因探针的制备、序列分析、法学领域、蛋白质工程等领域均有应用。

16.分别从DNA水平、转录水平、转录后水平、翻译及蛋白水平来说明真核基因表达

DNA水平上的是通过改变基因组中有关基因的数量、结构顺序和活性而控制基因的表达。这一类的机制包括基因的扩增、重排或化学修饰；

转录水平上，DNA分子上的顺式作用元件以及反式作用因子对基因表达有调节活性；

转录后水平，真核基因组有内含子和外显子，所以初转录产物hnRNA会经过加帽、加尾和剪接等步骤的加工才能成为成熟的mRNA分子；

翻译水平如阻遏蛋白可与mRNA结合，可以阻止蛋白质的翻译等。

蛋白水平上，翻译出的多肽链还需通过正确的折叠、切割、化学修饰等过程，才能产生具有生物学活性的蛋白质。 

17.试述SNP的概念及其意义，和寻找SNP的研究方法

单核苷酸多态性，即基因组DNA序列中单个核苷酸（AGCT）变异所引起的DNA序列多态性。是人类可遗传的变异中最常见的一种。

意义：具有已知性、可遗传性、可检测性，用于疾病基因的定位、克隆和鉴定。寻找疾病相关的突变位点，发展疾病预防策略，发展个性化医疗，可以通过对药物靶点个体差异性分析，发展个性化药物、方法治疗。还可以用于法医领域和器官移植领域。

18.试述原核生物RNA的种类和结构

转运RNA           tRNA            转运氨基酸

核蛋白体RNA       rRNA            核蛋白体组成成

信使RNA          mRNA            蛋白质合成模板

不均一核RNA      hnRNA           成熟mRNA的前体

小核RNA          snRNA           参与hnRNA的剪接

小胞浆RNA    scRNA/7SL-RNA   蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分

反义RNA       anRNA/micRNA     对基因的表达起调节作用

核 酶           Ribozyme RNA       有酶活性的RNA

19.试述基因转录的基本特征

转录与复制的相同点：都在酶的催化作用下,以DNA为模板,按碱基互补配对的原则,沿5’-3’方向合成与模板互补的新链.

转录与复制的差别：1.转录只发生在一部分区域.约3%的DNA序列最后被表达成为成熟的mRNA进入细胞质中,指导蛋白质的合成.

2.转录时只有一条链为模板,称为模板链或反义链,而另一条称为有意义链或编码链.DNA复制时,两条链都用作模板.

3.转录起始不需要引物的参与,而DNA复制一定要引物的存在.

4.转录的底物是4种核糖核苷三磷酸(rNTP),即ATP、GTP、CTP和UTP；RNA与模板DNA的碱基相互配对关系为G-C和A-U.而复制的底物是dNTP,碱基互补配对关系为G-C和A-T.

5.RNA的合成依赖于RNA聚合酶的催化作用,而DNA复制需要DNA聚合酶,两种聚合酶系不同.

6.转录时DNA-RNA杂合双链分子是不稳定的,RNA链在延伸过程中不断从模板链上游离出来,模板DNA又恢复双链状态；而DNA复制叉形成之后一直打开,不断向两侧延伸,新合成的链与亲本链形成子链.

7.真核生物基因和rRNA、tRNA基因经转录生成的初级转录物一般都需经过加工,才能具有生物功能和成熟的RNA分子.

20.已知一种突变的噬菌体蛋白是由于单个核苷酸插入引起的移码突变的，将正常的蛋白质和突变体蛋白质用胰蛋白酶消化后进行指纹图分析。结构发现只有一个肽段的差异，测得其氨基酸顺序如下：

正常肽段：Met-Val-Cys-Val-Arg

突变体肽段：Met-Ala-Met-Arg

1）指出此肽段在该蛋白质分子中的位置：前端

2）什么样的突变（什么核苷酸插入到什么地方）导致了氨基酸顺序的改变？

在正常肽段的第一个Val的密码GUA的G后插入了一个C

3）推导出编码正常肽段和突变体肽段的核苷酸序列：

正常：AUG GUA UGC GUX CGX

突变：AUG GCU AUG CGU

提示：有关氨基酸的简并码：

Val: GUU GUC GUA GUG           Cys: UGU UGC

Arg: CGU CGC CGA CGG AGA AGG

Ala: GCU GCC GCA GCG           （Met：AUG）

21.试述真核生物基因组的特点

远大于原核生物基因组，基因数庞大，结构复杂，含多个复制起始位点；基因组与蛋白质结合成染色体，储存于细胞核中；基因为单顺反子；多为不连续断裂基因，由内含子和外显子镶嵌而成；非编码基因多于编码基因；含大量重复序列；功能相关基因构成各种基因家族

22.原核生物基因组的结构特点

1. 基因组由一条环状双链DNA组成；2. 只有一个复制起始点；3. 大多数结构基因组成操纵子结构；4. 结构基因无重叠现象；5. 无内含子，转录后不需要剪接；6. 基因组中编码区大于非编码区；7. 重复基因少，结构基因一般为单拷贝；8. 有编码同工酶的等基因；9. 基因组中存在可移动的DNA序列10.非编码区主要是序列。

23.从高等真核生物基因组中克隆的完整基因为什么在大肠杆菌中不能正常表达？

真核生物和原核生物启动子不同，且真核生物基因组为断裂基因，由内含子和外显子镶嵌而成，完整基因组转入，没有相应的启动子，不能启动mRNA转录，且内含子不能正确剪切，所以不能表达

24.试述基因工程中理想载体的条件，并简单举例常用载体的种类

条件：1.必须由自身的复制子；2.载体分子上必须有性核酸内切酶的酶切位点，即多克隆位点，以供外源DNA的插入；3.载体应具有可供选择的遗传标志，以区别阳性重组子和阴性重组子；4.载体分子必须有足够的容量；5.可通过特定的方法导入细胞；6.对于表达载体还应具备与宿主细胞相适应的启动子、前导序列、增强子、加尾信号等DNA元件。 

种类：质粒，噬菌体，YAC，BAC

1.简述基因治疗的策略（写出一些肿瘤基因治疗的一些策略。5/7/8）

1、基因矫正：对于致病基因中的异常碱基进行精确修复，使其恢复正常功能。     

2、基因置换：基因置换就是用正常的基因原位替换病变细胞内的致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。这种治疗方法最为理想，但目前由于技术原因尚难达到。 

3、基因修复：基因修复是指将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常部分予以保留。这种基因治疗方式最后也能使致病基因得到完全恢复，操作上要求高，实践中有一定难度。 

4、基因修饰又称基因增补，将目的基因导入病变细胞或其它细胞，目的基因的表达产物能修饰缺陷细胞的功能或使原有的某些功能得以加强。在这种治疗方法中，缺陷基因仍然存在于细胞内，目前基因治疗多采用这种方式。

5、基因失活：利用反义技术能特异地封闭基因表达特性，抑制一些有害基因的表达，已达到治疗疾病的目的。用此技术还可封闭肿瘤细胞的耐药基因的表达，增加化疗效果。 

6、免疫调节：将抗体、抗原或细胞因子的基因导入疾人体内，改变病人免疫状态，达到预防和治疗疾病的目的。

7、自杀基因治疗，导入肿瘤细胞后，会产生一种酶，该酶使低毒药物前体转化为能够杀死肿瘤细胞而对正常细胞无害的物质

8、耐药基因治疗：在肿瘤化疗过程中，把产生抗药物毒性的基因导入患者体内，从而使患者能耐受更大剂量的化疗。

25.请阐述细菌操纵子模型的基本结构，并举例说明阻遏型操纵子的基因表达调节机制

在原核生物中，功能相关基因成簇地串联、密集于染色体上，共同组成一个转录单位，通常由两个以上的编码序列与启动序列、操纵序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成。

色氨酸操纵子为阻遏型操纵子，其基因表达调节机制为：

1.阻遏作用：

1）辅阻遏蛋白（trpR的产物）通过与操纵基因的结合与否来控制基因是否被转录；2）辅阻遏蛋白的活性受到色氨酸水平的控制，色氨酸水平高时，色氨酸与辅阻遏蛋白结合激活了辅阻遏蛋白，并与色氨酸操纵子紧密结合，因此可以阻止转录。当色氨酸水平低时，阻遏蛋白以一种非活性形式存在，不能结合DNA。在这样的条件下，trp操纵子被RNA聚合酶转录，同时Trp 生物合成途径被激活。

2.弱化作用：色氨酸操纵子转录终止的是通过弱化作用实现的。色氨酸操纵子前导区的碱基序列包括4个分别以1、2、3和4表示的片段,能以两种不同的方式进行碱基配对, trp浓度高时，2-3不配对，3、4区自由配对形成茎环状终止结构，转录停止；trp浓度低时，2,3配对，4区片段无配对，结构基因转录。

26.什么是反义RNA？请阐述反义RNA参与真核基因表达的可能作用位点及其机制

碱基序列正好与有意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA。

真核细胞中有三类反义RNA：Ⅰ类:这类反义RNA直接作用于其靶mRNA的SD序列和/或编码区，引起翻译的直接抑制(ⅠA类)或与靶mRNA结合后引起该双链RNA分子对RNA酶Ⅲ的敏感性增加，使其降解(ⅠB类)。Ⅱ类:这类反义RNA与mRNA的SD序列的上游非编码区结合，从而抑制靶mRNA的翻译功能。其作用机制尚不完全清楚，可能是反义RNA与靶mRNA的上游序列结合后会引起核糖体结合位点区域的二级结构发生改变，因而阻止了核糖体的结合。Ⅲ类:这类反义RNA可直接抑制靶mRNA的转录。

27.请说明你所了解的检测基因点突变的二种基于PCR技术的分析方法的技术原理及主要操作流程（重点描述点突变的分析原理，PCR原理可省略）

SSCP/PCR：通过PCR同时扩增待测基因和野生型对照基因的DNA片段，将扩增的双链DNA变性成单链，用非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离。待测基因的单链DNA上单个碱基的改变可导致构象的改变，其电泳迁移率也会发生改变。通过比较这两者的迁移率，即可判断是否发生基因突变。 

RFLP/PCR：通过PCR同时扩增待测基因与正常型对照基因的DNA片段，将扩展后的DNA进行酶切鉴定，由于个体之间的DNA的核苷酸序列存在差异，若发生点突变而因此改变了性内切酶的酶切位点，则可导致相应的性片段的长度和数量发生变化。

变性高效液相色谱：基本原理是利用PCR扩增过程的单链DNA产物可以随机与互补链相结合而成双链的特性，依据最终产物中是否会出现异源双链来判断待测样品中是否存在点突变。若被测DNA片段中不存在点突变，所有PCR产物都具有相同的序列，即只产生同源双链。若存在点突变，PCR反应体系中会产生4种不同的DNA双链分子，2种同源、2种异源双链。在特定的部分变性洗脱条件下，不同源的DNA片段的变性程度将有别于同源双链，由此造成因DNA分子电荷量等的差异而在液相色谱中呈现出不同的滞留时间。

28.信号肽的结构特征及功能

结构特征1、一般带有10~15个疏水氨基酸，位于蛋白质的N端；2、在靠近N端有一个或数个带正电荷的氨基酸；3、C端有一个能被信号肽识别的位点；4、没有严格的专一性；5、信号肽可能是一种环状结构，而非是以一种直线通过双脂层膜；（6、在C端靠近蛋白酶切点处常有数个极性氨基酸，离切割位点最近的那个氨基酸往往带有很短的侧链；7、广义上的信号肽是初生蛋白质穿过膜必须的疏水性肽段，它位于蛋白质各部位。）

功能：1、保证蛋白质顺利转运；2、延伸功能；3、能和新生的分泌蛋白的信号肽相结合；4、能和位于膜上的蛋白受体相结合。

29.简述cAMP信号转导途径？

答：1、组成：胞外信息分子（主要是胰高血糖素、肾上腺素和促肾上腺皮质激素），受体，G蛋白，腺苷酸环化酶，cAMP , PKA。

2、途径：

信号分子与受体结合，引起受体构象变化；受体活化G蛋白；活化后的G蛋白激活腺苷酸环化酶；腺苷酸环化酶催化ATP生成cAMP；cAMP活化PKA，PKA使目标蛋白磷酸化，调节代谢酶的活性或调节基因的表达

30.简述IP3-Ca2+信号途径：

答案要点：信号分子与受体结合，引起受体构象变化，受体活化G蛋白，活化后的G蛋白激活PLC，PLC水解PIP2生成IP3 和DG，IP3 使钙通道打开，细胞内Ca2+升高，Ca2+与CaM结合，激活Ca2+-CaM依赖的蛋白激酶，Ca2+-CaM依赖的蛋白激酶使目标蛋白磷酸化。

31.请叙述DNA多态性的基本概念及其分子基础（序列/长度的多态性）

DNA的多态性指正常人群中，DNA分子或基因的某些位点可以发生中性改变，使DNA的一级结构各不相同，但并不影响基因的表达；DNA的多态性可以看作是在分子水平上的个体区别的遗传标志。

32.人工构建的哺乳动物细胞表达载体应具备哪些条件？

(1)原核DNA序列： 为了能在大肠杆菌中增殖，得到大量能转染哺乳动物细胞的重组DNA，哺乳动物表达载体中通常有一段原核序列，包括一个能在大肠杆菌中自身复制的复制子， 便于挑选含重组DNA细菌的抗生素抗性基因，以及便于把真核序列插入载体的少数单一性酶切位点。当具 备这些序列以后，外源的真核基因序列可由单一酶切位点插入载体中，形成的重组DNA可在大肠杆菌中增殖，经抗生素筛选后进行DNA提取，即可得到大量的所需的哺乳动物细胞表达载体。

(2)启动子：根据宿主细胞类型选择不同的启动子。

(3)增强子： 增强子是使启动子的基因转录效率显著提高的一类顺式作用元件，有多个核苷酸序列组成。许多增强子只能在特定的组织或细胞中起作用，即具有组织细胞的特异性，因此在构建真核表达载体的时候，应根据宿主细胞来选择增强子。

(4)剪接信号： 真核基因由许多内含子和外显子组成。被转录成mRNA前体以后，需通过剪除内含子、连接外显子才能成为成熟的mRNA。

(5)终止信号和多聚腺苷化的信号

(6)遗传标记： 从成千上万个哺乳细胞中，检测出极少数的含DNA重组体的转染细胞，并鉴定已导入外源DNA是哺乳动物细胞基因表达系统的一个关键内容。

33.DNA的保真性

1.子代DNA链以母链为模板按严格的碱基互补配对规律生成，保证子代DNA与母代DNA双链在碱基序列上的一致性，从而保留了亲代的全部遗传信息。

2.碱基选择功能，DNA聚合酶Ⅲ能保证选择正确配对的碱基合成子链。

3.复制中如出现错配，DNA聚合酶Ⅰ和Ⅲ均由及时校对功能，切除错配碱基后，重新连接正确的碱基。

4.原核及真核均存在对DNA分子中的错误或损伤进行修复的机制。

5.引物生成的作用还尽量减少DNA复制起始处的突变，因为复制起始最复杂也最容易出错，若引物出现错配，最终会被切除，被序列正确的DNA片段取代。

34.什么是基因表达中的顺式作用元件和反式作用因子，试举例说明他们对基因表达的影响。

反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子。

顺式作用元件：主要指真核生物中，与结构基因处于同一DNA分子的，可调节基因转录的DNA特殊序列，主要包括启动子、增强子、沉默子、和可诱导元件等。

。。。

35.蛋白质的延长过程。

1.进位：根据A位上密码引导，相应的氨基酰-tRNA进入A位，称为进位。

2.成肽：转肽酶催化P位上甲酰甲硫氨酰基或肽酰基转移给A位上进入的氨基酰-tRNA，形成肽键连接，生成的二肽酰-tRNA占据A位，P位连着空载tRNA，将迅速从核蛋白位脱落。

3.转位：转位酶催化A位二肽酰-tRNA进入P位，同时核蛋白体沿mRNA移动一个密码子，A位再次空缺，开始第3个氨基酰-tRNA进位，重复上述循环，肽链在C端加入一个氨基酸，使P位依次出现3肽、4肽。。

36.寻找未知基因的方法。

37.进行基因治疗的先决条件是什么，目前基因治疗尚需解决的主要问题有哪些？

先决条件是要了解特定疾病的相关基因。

问题：1.缺乏高效、靶向性的基因转移系统；2.对于多种疾病的相关基因认识有限，因而缺乏切实有效的治疗靶基因；3.目前真核生物表达机制尚未完全阐明，因而对治疗基因的表达还无法做到精准，也无法保证其安全性；4.缺乏准确的疗效评价以及伦理方面的问题。

38.试述大肠杆菌在含乳糖、葡萄糖培养基中生长时，基因表达的机制。

如大肠杆菌培养在含葡萄糖和乳糖的培养基上，在葡萄糖没有被利用完之前，乳糖操纵子就一直被阻遏，乳糖不能被利用，这是因为葡萄糖的分解物引起细胞内cAMP含量降低，启动子释放cAMP-CAP蛋白，RNA聚合酶不能与乳糖的启动基因结合，以至转录不能发生，直到葡萄糖被利用完后，乳糖操纵子才进行转录，形成利用乳糖的酶，这种现象称葡萄糖效应。又称葡萄糖阻遏或分解代谢产生阻遏作用。

39.如果一个突变株，聚合酶Ⅰ、Ⅲ。。蛋白复制原点都正常，为什么复制效率低？

40.与传统的诊断方法相比，基因诊断的优势何在？

基因诊断方法与传统的诊断方法相比，有着显著的优越性，它以基因的结构异常或表达异常为切入点，而不是从疾病的表型开始，因此往往在疾病出现之前就可作出诊断，为疾病的预防和早期及时治疗赢得了时间。另外，遗传病基因变异在全身各处细胞中均能一致体现，诊断取材极为方便，血液细胞及羊水脱落细胞等均可作为诊断材料，而不需要对某一特殊的组织或器官进行检测。

41.蛋白质组学的定义及其研究技术。

蛋白质组学：指一个细胞的全套蛋白质，反映了特殊阶段、环境、状态下细胞或组织在翻译水平上的蛋白质表达谱。可细分为结构蛋白质组学和功能蛋白质组学。

双向凝胶电泳技术、质谱技术和计算机图像分析与大规模数据处理仍然是蛋白质组学研究的三大基础支持技术。

如：1.双向电泳分离样品蛋白；2.蛋白质点的定位、切去；3.蛋白质点的质谱分析等。

42.什么是生物芯片（bio-chips）它包含了那些基本技术？请谈谈你对该项技术应用领域（可举例）及其应用前景的评价

生物芯片之通过原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针固化与支持物表面，形成二维DNA探针阵列，然后与带有标记的生物样品进行杂交，通过检测杂交信号对样品快速并行高效的检测或诊断。

包含技术：核酸杂交。PCR

应用：测序，基因诊断，药物筛选，个体化用药，基因表达水平检测

前景：

它将对我国生命科学研究，医学诊断，新药筛选具有性的推动作用，也将对我国人口素质、农业发展、环境保护等作出具大的贡献，同时带动我国科学整体进步，为各相关高科技产业创造机会。基因芯片将成为21世纪最令人注目的高新技术领域之一，将使人类早日进入生物信息时代，促进精准医疗的发展