薄层层析常用显色剂配制及显色方法

适用于不饱和或者芳香族化合物 

配制方法：在100ml广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。 或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶

高锰酸钾

适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛 

配制方法 ：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3个月

磷钼酸(PMA)

广谱 

配制方法 ：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇

紫外灯 

适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物

硫酸铈

生物碱 

配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液

氯化铁 

苯酚类化合物 

配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.

桑色素(羟基黄酮) 

广谱, 有荧光活性 

配制方法：0.1% 桑色素+甲醇

茚三酮 

适用于氨基酸 

配制方法：1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸

二硝基苯肼(DNP) 

适用于醛和酮 

配制方法：12g二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇

香草醛(香兰素) 

广谱 

配制方法：15g 香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 浓硫酸

溴甲酚绿

适用于羧酸，pKa<=5.0

配制方法 ：在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至。

钼酸铈

广谱

配制方法：235 mL 水 + 12 g 钼酸氨 + 0.5 g 钼酸铈氨 + 15 mL 浓硫酸

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1 

广谱 

配制方法：135 乙醇 + 5 mL 浓硫酸 + 1.5 mL of 冰醋酸 + 3.7 mL 茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2 

适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine) 

配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水 (1:10:20:80)

胺类物质常用的是：

（1）磷钼酸显色剂：磷钼酸 5%-10% 乙醇溶液，淡黄色，久置变为浅绿色，不影响使用。浸板或喷板，加热，浅黄色背景，还原性物质显蓝绿色斑点，如果斑点太浓，可能显深黄色。

（2）CAM显色剂:钼酸铵9.6g,硫酸铈0.4g,10%硫酸水溶液 200ml,混匀，极淡的黄色溶液，棕色瓶密闭保存，喷板，加热，白色背景，还原性物质显深蓝色斑点。 

显色的方法各种各样，主要根据化合物的性质选择不同的显色方法。许多关于植物有效成分提取与分离的书上都有介绍，通用的有碘、硫酸乙醇、香草醛－硫酸等，当然还有许多专用的显色剂，如：溴甲酚绿使有机酸显黄色，三氯化铁使酚羟基显蓝色，碘化铋钾使生物碱显桔黄色.....

显色剂化合物

苯胺邻苯二甲酸酯 碳水化合物，糖类

溴甲酚绿羧酸

二甲氨基苯甲醛 氨基酸，多肽

磷钼酸苯酚类

若丹明 类酯类

薄层层析常用显色剂配制及显色方法

附录

附录1 薄层层析及纸层析常用显色剂配制及显色方法

通用试剂

(1) 重络酸钾-硫酸:检查一般有机物.

喷洒剂:5克重络酸钾溶于100毫升40%硫酸中.

薄层检查:喷洒后加热到150℃至班点出现

(2) 荧光素-溴:检查不饱和化合物

喷洒剂:0.1克荧光素溶于100毫升乙醇中

溴试剂:5%的溴的四氯化碳溶液

喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检查荧光,荧光素与溴化和成曙红(Eosin)(无萤光),而不饱和化合物则成溴加成物,保留了原有荧光;若点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色.

(3) 碘:检查一般有机物.

  方法:a 层析谱放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕色斑点。

B 层析谱放碘蒸气中5分钟（或喷5％碘的氯仿溶液）取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后，喷1％淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。

（4）硫酸：通用

喷洒剂：5％的浓硫酸乙醇溶液，或15％浓硫酸正丁醇溶液，或浓硫酸－醋酸（1：1）

喷洒后处理：空气中干燥15分钟，再热至110℃直至出现颜色或荧光。

（5）银－氢氧化铵（Tollen-Zaffaroni）试剂：检查还原性物质。

溶液I : 0.1%N银; 溶液II: 5N氢氧化铵

喷洒剂: I和II以1:5混合(临用前混合)

喷洒后处理: 105℃加热5~10分钟,至深黑色斑点出现.

 (6)磷钼酸或磷钨酸,硅钨酸:检查还原性物质,类脂体,生物碱,甾体

喷洒剂: 5~10%磷钼酸或磷钨酸或硅钨酸乙醇溶液

喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现.

沉淀试剂: 1克硅钨酸溶于20毫升水中,加10%盐酸至强碱性. 

生物碱

  (7)硫酸=硫酸:检查生物碱及含碘化合物

  喷洒剂: 0.1克硫酸?混悬于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓硫酸至澄清.

  喷洒后处理: 110℃加热数分钟至斑点出现.

  (8)碘化铋钾(Dragendorff)试剂:检查生物碱及其他含氟化合物.

溶液I: 0.85克次铋溶于10毫升冰醋酸40毫升水中

溶剂II: 8克碘化钾溶于20毫升水中.

制备液I+II,等体积混合.可用于棕色瓶中保存较长时间,一般制备液可作沉淀试剂用.

喷洒液: 制备液1毫升与2毫升醋酸,10毫升水混合即得

(9).碘化汞钾(Mayer)试剂: 检查生物碱.

制备液: 13.55克氯化汞和49.8克碘化钾各溶于20毫升水中,等体积混合并用水稀释至1000毫升.

喷洒液: 制备液加1/10体积的17%盐酸.

喷洒后处理: 观察斑点,并于紫外线荧光分析灯下检出.

(10) ?酸纳-浓硫酸(Mandelin)试剂:检查生物碱.

1%>酸纳的浓硫酸溶液.与多种生物碱呈不同颜色.

(11)碘－碘化钾(Wagner)试剂:检查生物碱.

1克碘及10克碘化钾,溶于50毫升水中,加热,加2毫升醋酸,再用水稀释至100毫升.

可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂.

酚类,鞣质

 (12)三氯化铁:检查酚类及酸.

 喷洒剂:1~5%三氯化铁的水溶液或乙醇溶液.并加盐酸少许.酸呈红色斑点,酚类称蓝色或绿色斑点.

 (13)铁-三氯化钾:检查酚类,芳香胺类及还原性物质.

喷洒剂: 1%铁水溶液,2%三氯化铁水溶液.临用前等体积混合.

喷洒后处理: 喷洒后酚性物质呈蓝色斑点.再喷2N盐酸,能使颜色加深,纸谱可用烯盐酸洗去喷洒液.

(14) 4-胺基安替比林-铁(Emerson反应): 检查酚类.

喷洒剂: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液;

       II. 8%铁水溶液.

 或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁水溶液

方法: 先喷洒I,再喷洒II,即显色,或再放入密闭缸中,缸内放25%氢氧化铵,即产生橙色至深红色.

(15) 对氨基苯磺酸,重氮盐(Pauly试剂): 检查酚类,芳香胺类及能偶合的杂环化合物.

 喷洒剂: 4.5克对氨基苯磺酸,加热溶于45毫升12N盐酸中,用水稀释至500毫升,取10毫升稀释液用冰冷却,加10毫升冷4.5%亚钠水溶液,0℃放15分钟(此试剂于0℃可保存3天),用前加等体积1%碳酸钠水溶液.

一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等.

(16) 对甲苯磺酸: 检查甾体,黄酮,鞣质.

喷洒剂: 20%对甲苯磺酸氯仿溶液.

喷洒后处理: 100℃加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点.

含氧杂环及蒽醌类*

(17) 三氯化铝: 检查黄酮体.

喷洒1%三氯化铝乙醇液于紫外线荧光分析灯下检示,呈黄色荧光

(18)碱式醋酸铅: 检查黄酮体.

喷洒剂: 饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅)水溶液.

于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点.

(19)醋酸镁: 检查蒽醌甙,甙元及黄酮体

喷洒剂: 0.5%醋酸镁甲醇溶液

方法: 90℃加热5分钟,呈红色至紫色斑点.

(20)氢氧化钾: 检查香豆素,蒽醌甙及甙元

喷洒剂: 5~10%氢氧化钾的甲醇溶液.

于日光及紫外线荧光分析灯下检示斑点.

萜类,甾体

(21) 三氯化锑(Carr-Price试剂): 检查甾体,萜类,皂类.

喷洒剂: 25克三氯化锑溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的饱和溶液).

喷洒后处理: 100℃加热5分钟,于紫外线荧光分析灯下检示荧光.

(22) 五氯化锑: 检查甾体,萜类,皂甙.

喷洒剂: 五氯化锑-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鲜配制.

喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现,并于紫外线荧光分析灯下检示.

(23)香兰醛-硫酸: 检查高级醇类,酚类,甾体,萜类,芳香油.

喷洒剂: 1克香兰素溶于100毫升浓硫酸,或0.5克香兰醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中.

喷洒后处理: 室温或120℃加热观察显色斑点.

(24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.试剂): 检查? Azulene 及?前体 Proazulene.

喷洒剂: 0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存数月)

  ?:烃室温即成蓝紫色斑点,>前体于80℃加热10分钟出现蓝紫色斑点.

  (25) 氯胺T－三氯醋酸: 检查强心甙.

  喷洒剂: I. 3%氯仿T水溶液新鲜制备.

         II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存数天).

  10毫升I加40毫升II,用前混合.

 喷洒后处理: 110℃加热7分钟,紫外线荧光分析灯下检示呈蓝色或黄色荧光.

 (26) 亚基铁-氢氧化钠(Legal试剂): 检查不饱和内酯;甲基酮或活性次甲基,常用于强心甙

喷洒剂: 1克亚硝基铁溶于100毫升2N氢氧化钠-乙醇(1:1)的水溶液.

显红色或紫色斑点.

         (27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal试剂): 检查强心甙,α,β-不饱和内酯.

喷洒剂: 1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氢氧化钾50毫升.

强心甙呈紫红色斑点.

糖类

(28) 邻苯二甲基苯胺: 检查还原糖.

  喷洒剂: 0.93克苯氨,1.66克邻苯二甲酸溶于100毫升水饱和的正丁醇中.

  喷洒后处理: 105℃加热10分钟.

(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：检查还原糖及其他还原物质。

 溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液；  溶液II：1N氢氧化钠。

喷洒液：I，II，临用前等体积混合。

喷洒后处理：100℃加热5～10分钟，得红色斑点。

（30）Keller-Kiliani试剂：检查α－去氧糖，常用于强心甙。

试液：100毫升冰醋酸加三氯化铁试液0.5毫升混合均匀.

试样1毫克加试液2毫克溶解后,沿试官管壁滴入浓硫酸2毫升,接触面即显棕色,渐变浅绿,蓝色.最后冰醋酸层全部燃呈蓝色.

(31) 1,3-二羟基萘-磷酸: 检查糖类.

喷洒液: 0.2%1,3-二羟基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,与10毫升85%磷酸混合.

(32) 费林溶液(Fehling): 检查还原糖.

溶液I: 69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中.

上述二溶液如不清可滤过.临用前等体积混合.

氨基酸

(33) 茚三酮: 检查氨基酸及氨基糖.

喷洒剂: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).

喷洒后处理: 110℃加热至斑点出现.

(34) 吲哚醌: 检查氨基酸和一些肽.

喷洒剂: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.

喷洒后处理: 100~110℃加热10分钟.

(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin试剂): 检查氨基酸.

喷洒剂: 新鲜制备0.02克1,2-萘醌-4-磺酸钠,溶于100毫升5%碳酸钠中.

喷洒后处理: 室温放于,不同氨基酸出现不同颜色.

有机酸

(36) 酸碱指示剂: 检查有机酸.

喷洒剂: 0.05%溴酚蓝(或溴甲酚绿,或溴麝香草酚蓝)的乙醇溶液.

(37) 氧化还原显色剂: 检查有机酸.

喷洒剂: I. 0.075%溴甲酚绿及0.025%溴酚蓝的无水乙醇液.

II. 0.5%高锰酸钾及1%碳酸钠.10H2O的蒸馏水液.临用前,取I和II按1:1混合后喷酒.

喷酒后处理: 稳定时间为5~10分钟.对不同的有机酸在纸谱上呈现不同颜色.

(38)  (Acridine): 检查酸.

喷洒剂: 0.005%的乙醇溶剂.

紫外线分析灯下呈黄色荧光.

(39) 芳香胺-还原糖: 检查酸.

喷洒剂: 芳香胺(如苯氨5克)和还原糖(如木质糖5克)溶于50%含水乙醇中.

喷洒后处理: 125~130℃加热出现棕色斑点.