微生物的分离纯化：平板分离法

分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。

平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

包括稀释涂布平板法

稀释混合平板法

平板划线法

土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地。

本实验采用三种不同的培养基和方法从土壤中分离细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。

操作步骤

采样：

选取校园内或校园附近地点，用无菌药匙，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样约30g，装入事先准备好的无菌瓶内并盖好。编号并记录地点、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。

制备土壤稀释液

土壤稀释液的制备和稀释液的取样（建议稀释到10-即可）

无菌操作

1.取三只无菌培养皿，在皿底用记号笔写上稀释度、组别观察分离出的真菌菌落形态。

稀释混合平板法

土壤稀释液的制备和稀释液的取样倒平板的无菌操作

将融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(

以手背能忍受的温度为准)，在酒精灯火焰

旁，右手掌心握住三角瓶的底部，左手拿平

皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指

、无名指夹住拔出，灼烧瓶口。用左手的大

拇子将皿盖掀开一缝，至瓶口刚好伸入，向

皿内注入培养基（约15 mL,铺满皿底），迅

速盖好皿盖。左手持培养皿稍加旋转摇动，

使培养基均匀分布于整个培养皿底部，然后

平置于桌面水平位置,待凝后即为平板。

也可将平皿放在火焰附近的桌面上

，用左手的食指和中指夹住管塞并打开

培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平

板。

取无菌培养皿涂布操作

平板划线法分离细菌

采用分区划线法

1.取无菌培养皿1只，在皿底用记号笔写上组别。

2.倒已煮溶的营养琼脂培养基使之铺满皿底，放在平坦的桌面上，待凝。

3.用接种环以无菌操作取10-1土壤稀释液1环，先在平板的第一区的培养基表面平

行划线3—4条。

4.转动培养皿约60。角，将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分

作第二区划线。同法依次作第三、四、五区划线。

5.倒置于28～300C恒温培养5～7d。

6.观察分离出的细菌菌落形态。

实验录像

稀释混合平板法及稀释涂布平板法平板划线分离法结果报告与思考题