薤白配方颗粒研究

薤白配方颗粒研究

概  述

薤白为百合科植物小根蒜Allium macrostemon Bge.或薤Allium chinensis G. Don果实。全国均有，主产于浙江、江苏等地。夏、秋二季采挖，洗净，除去须根，蒸透或置沸水中烫透，晒干。其性温，味辛苦，归肺、胃、大肠经。能够通阳散结，行气导滞，用于胸痹疼痛，痰饮咳喘，泄痢后重。2005年版《中国药典》规定其用量为5~9g。

薤白中的挥发油主要为含硫化合物，采用GC一MS法对含硫化合物进行鉴定，它们是甲基烯丙基三硫(MATS)、二甲基三硫(Me2S3 )、甲基正丙基三硫，乙烯撑二甲硫、甲基1-丙烯基二硫、甲基烯丙基二硫(MAS2 )、二正丙基二硫。挥发油中还含有噻吩、戊烯醛、烷烃化合物等。薤白中的含氮化合物也是其主要活性成分之一，包括腺苷、胸苷、2， 3， 4, 9-四氢-1-甲基-1H -吡啶并[3, 4 -b] 吲哚-3-羧酸、2, 3, 4, 9-四氢-1H-吡啶并[3, 4 -b] 吲哚-3-羧酸和丁香苷。薤白中含有大量的甾体皂苷，日本学者和中国学者对薤白中的皂苷进行了鉴定，命名为薤白苷A, B, C, D, E, F, G,H, I, J, K, L。薤白中还含有Asp, Thr, Ser等17种氨基酸和钙，镁，铬，锰等21种宏微量元素。

    薤白有抑菌抗炎作用。薤白煎剂对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用。薤白的抑菌消炎作用可能与其含有的含硫化物具有抗菌活性有关。薤白还有解痉平喘作用，可使痉挛的支气管平滑肌松弛，发挥平喘的作用。薤白挥发油中的含硫化合物对血小板聚集显示了强大的抑制作用。薤白原汁可以抑制大鼠血清中的抗坏血酸自由基，有抗氧化作用。薤白提取物能够抑制平滑肌细胞的增生，减少泡沫细胞的形成，具有抗动脉粥样硬化的作用。另外，薤白还具有抗肿瘤作用。

本课题是在中医药理论指导下，依照《中药饮片质量标准通则(试行)》和《中药配方颗粒质量标准研究的技术要求》的要求，根据现代药理研究发现薤白中醇提取物为主要活性成分，根据活性成分的理化性质，选择合理的工艺路线，采用水回流提取方式对薤白有效成分进行提取。对薤白的生产工艺和质量标准进行了研究。对配方颗粒的提取工艺参数进行了优选，并进行中试放大试验，以验证工艺的合理性及可行性。同时制定薤白配方颗粒的质量标准，建立质量控制方法，开展初步稳定性研究。

第1节  薤白配方颗粒制备工艺研究

   1. 工艺路线选择

根据中医药传统理论的指导和中药颗粒剂的实际工业生产中经济因素和颗粒剂的应用，采用水回流提取的方式对薤白进行提取，提取液减压浓缩，浓缩至一定密度，加适量辅料，制成颗粒。

   2.提取工艺条件的筛选   

2. 1  药材鉴定与前处理   试验所用药材均购于天津市中药饮片厂，经鉴定符合《中国药典》2005年版各药材项下有关规定。

2. 2   薤白提取工艺考察   薤白的化学成分非常复杂，种类较多，主要有挥发油、皂苷、含氮类化合物、含硫化合物、前列腺素、氨基酸类化合物等。但缺乏化学成分和其药理作用相关的直接报道。文献只报道了薤白水提取液和乙醇提取液均有较强的生理活性。因此正交试验以浸膏的水浸出物和乙醇浸出物为质量控制指标进行筛选。

2. 2. 1  薤白出膏率和醇浸出物含量测定   

2. 2. 1. 1   仪器和试药   仪器：DZG-401 电热真空干燥箱（天津天宇实验仪器公司），AS20500AT 超声波清理器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），SartoriusBS210S型电子天平（北京赛多利斯仪器公司），SZ-93 自动双重水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂），202型电热恒温干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司).

试药:糊精为药用级，甲醇及其他试剂均为分析纯。薤白饮片购于天津中药饮片厂。

2. 2.1 2   薤白药材中醇浸出物的含量测定  取药材2g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加水50ml，密塞，称定重量，静置1h后加热回流1h，放冷后取下锥形瓶，密塞，称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25ml，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，再置于105℃真空干燥箱中干燥至恒重，称重，计算乙醇浸出物含量为21.4%。

2. 2. 2    因素水平表设定   以浸膏的水浸出物和乙醇浸出物为质量控制指标，以加水量、提取时问、提取次数为三因素进行正交试验，选择L9（34）正交表，对水提工艺的各参数进行考察，因素水平表如表41-1。

表41-1   薤白提取因素水平表

        

水平	因素
	A加水量（倍）	B提取时间（h）	C提取次数
1	8	0.5	1
2	10	1	2
3	12	1.5	3

2. 2. 3   试验方法及操作  取薤白25.0g，按表3进行正交试验，首次加水量增加3倍，将所得提取液用纱布过滤，合并滤液，分别取滤液10ml ,置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，再置于65℃真空干燥箱中干燥至恒重，称重，计算水浸出物得率;另取滤液50ml，水浴蒸干，加60%乙醇溶液50mL，充分搅拌，过滤，滤液置于已于燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，再置于65℃真空干燥箱中干燥至恒重，称重，计算乙醇浸出物含量。结果见表41-2、表41-3、表41-4及表41-5。

表41-2   正交试验结果

因素					水浸出物（%）
No.	A	B	C	D
1	1	1	1	1	17.2
2	1	2	2	2	34.4
3	1	3	3	3	52.7
4	2	1	2	3	28.3
5	2	2	3	1	55.3
6	2	3	1	2	19.8
7	3	1	3	2	38.7
8	3	2	1	3	22.7
9	3	3	2	1	48.3
K1	104.3	84.2	59.7	120.8
K2	103.4	112.4	111.0	92.9
K3	109.7	120.8	146.7	103.7
R	6.3	36.6	87	27.9

表41-3   出膏率方差分析表

方差来源	平方和	自由度	F	P
A	7.74	2	0.06	>0.05
B	245.04	2	1.86	>0.05
C	1275.02	2	9.66	>0.05
D	131.94	2		>0.05

   F0.05 （2,2）=19.00，F0.01（2,2）=99.00

表41-4   薤白醇浸出物正交试验结果

因素					乙醇浸出物（%）
No.	A	B	C	D
1	1	1	1	1	5.3
2	1	2	2	2	12.8
3	1	3	3	3	20.5
4	2	1	2	3	13.8
5	2	2	3	1	17.1
6	2	3	1	2	6.5
7	3	1	3	2	8.5
8	3	2	1	3	4.8
9	3	3	2	1	14.3
K1	38.53	27.56	16.46	36.7
K2	37.38	34.7	40.96	27.77
K3	27.59	41.24	46.08	39.03
R	10.94	13.68	29.62	11.26

表40-5   薤白醇浸出物方差分析

方差来源	平方和	自由度	F	P
A	24.09	2	1.02	>0.05
B	31.21	2	1.33	>0.05
C	167.09	2	7.09	>0.05
D	23.55	2

   F0.05 （2,2）=19.00，F0.01（2，2）=99.00

由方差分析结果可知：确定最佳工艺为加药材8倍体积水（首次增加2倍），提取3次，每次提取时间为1.5h。    

2. 2. 4   验证试验   为了进一步验证所选条件的正确性与科学性，增加所选的最佳工艺可信度，研究安排了三个验证实验，结果见表41-6。

表41-6   薤白提取工艺验证实验结果

实验编号	醇浸出物（%）	出膏率（%）
1	20.5	52.7
2	20.3	53.1
3	20.1	52.6
均值	20.3	52.8

3.制剂成型工艺研究

糊精是颗粒剂的优良成型剂 ，故糊精为本品制剂辅料，本品采用干浸膏加适量辅料制粒，加入一定浓度的乙醇为粘合剂的方式进行制粒，对影响颗粒成型的主要影响因素乙醇浓度进行考察，结果见表41-7。

表41-7   乙醇浓度考察

乙醇浓度（%）	60	80	95
加入浸膏（g）	60	60	60
加入辅料（g）	60	60	60
性状	稀，不成型	成型性好	干、膏、料混不匀

    结果表明:淀粉浆浓度在80%时，软材成型性好，可以直接制粒。

综上所述，确定薤白配方颗粒的最佳成型工艺为:取薤白1000g,分别加水1300ml，1000ml，煎煮3次，每次0.5 h ,药液用4层纱布过滤，合并3次滤液，水浴浓缩成浸膏，65℃下减压干燥成干浸膏，将干浸膏粉碎，过80目筛，称重，按照干浸膏和辅料比为1:0.9加入糊精，用90%的乙醇适量制成软材，软材过14目筛，65℃减压干燥4h，14目筛整粒，即得薤自配方颗粒1000g。

    4. 三批中试成品的制备

为了验证试验的可行性，按确定的制备工艺，进行了放大试验，制备三批中试样品，分别测定投料所用薤白药材中出膏率的含量，结果见表41-8。

表41-8   中试成品试验结果

批号	060501	060502	060503
投药量/kg	10	10	10
药材醇浸出含量/%	21.3	21.5	21.4
干浸膏量/kg	5.28	5.27	5.27
辅料加入量/kg	4.72	4.73	4.73
理论成品量/g	10000	10000	10000
实际成品量/g	9914	9952	9967
成品醇浸出物含量/%	11.3	11.2	11.4
转移率/%*	52.6	52.3	53.1

     * 转移率=（1g成品中醇浸出含量）/（1g成品含药材量×0.214）×100%

第2节   薤白配方颗粒质量标准

    【名称】中文名称:薤白配方颗粒

    英文名称:Xiebaipeifangkeli

【来源】本品为百合科植物小根蒜Allium macrostemon  Bge.或薤Allium chinensis Don 果实制成的配方颗粒。

    【制法】取薤白1000g，分别加水1100ml, 800ml, 800ml,煎煮3次,每次1.5h,药液用4层纱布过滤，合并3次滤液，水浴浓缩成浸膏，65℃下减压干燥成于浸膏，将干浸膏粉碎，过80目筛，称重，按照干浸膏和辅料比为1: 0.9加人糊精，用90%的乙醇适量制成软材，软材过14目筛，65℃减压干燥4h, 14目筛整粒，即得薤白配方颗粒1000g。

【性状】本品为浅棕色颗粒，气微，味辛、苦。

【鉴别】取本品粉末4.5g,置具塞锥形瓶中，加正己烷20ml ,密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加正己烷1ml使溶解，滤液作为供试品溶液。取薤自对照药材粉末4g，按供试品溶液制备方法进行制备，即得对照药材溶液。取糊精2.3g ,按供试品溶液制备方法进行制备，即得阴性对照溶液。照《中国药典》薄层色谱法（附录B）试验，吸取供试品溶液、薤白对照药材溶液、阴性对照溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（10:1）为展开剂，展开，取出，晾干。用碘蒸气熏至斑点显色清晰，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。

    【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定。

【醇浸出物含量测定】取本品5.0g，加60%乙醇溶液50ml，充分搅拌，冷浸6h，并不时摇动，过滤，再用10ml 60%乙醇洗涤滤纸，合并滤液，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，再置于105℃烘箱中干燥至恒重，计算乙醇浸出物含量。      

本品1g含薤白以醇浸出物含量计，不得少于107mg。

    【功能主治】 用于胸痹症，脘腹痞满胀痛，泻痢里急后重等。

    【用法用量】 供配方用，5~9g或遵医嘱。

    【规格】 每袋1g相当于原生药材1g。

    【贮藏】置阴凉干燥处保藏。

【有效期】2年。

第3节  薤白配方颗粒质量标准的起草说明

    1. 名称

根据中药配方颗粒质量标准研究的技术要求命名原则，本品是由中药薤白制得的配方颗粒，故命名为薤白配方颗粒。

   2. 来源

    本品为百合科植物小根蒜Allium macrostemon Bge. 或薤Allium chinensisG. Don果实制成的配方颗粒。

   3. 制法

    取薤白1000g，分别加水1100ml， 800ml， 800ml，煎煮3次，每次1.5h，药液用4层纱布过滤，合并3次滤液，水浴浓缩成浸膏，65℃下减压干燥成干浸膏，将干浸膏粉碎，过80目筛，称重，按照干浸膏和辅料比为1:0.9加入糊精，用90%的乙醇适量制成软材，软材过l4目筛，65℃减压干燥4h, 14目筛整粒，即得薤白配方颗粒1000g。

    4.性状

    本品为浅棕色颗粒，气微，味辛、苦。

    5.鉴别

取本品粉末4.5g,置具塞锥形瓶中，加正己烷20mL，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加正己烷1mL使溶解，滤液作为供试品溶液。取薤白对照药材粉末4g，按供试品溶液制备方法进行制备，即得对照药材溶液。取糊精2.3g，按供试品溶液制备方法进行制备，即得阴性对照溶液。照中国药典薄层色谱法(附录B）试验，吸取供试品溶液、薤白对照药材溶液、阴性对照溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（10: 1)为展开剂，展开，取出，晾干。用碘蒸气熏至斑点显色清晰，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。

     6.检查

    本品剂型为颗粒剂，按《中国药典》2005年版一部附录C颗粒剂项下有关规定进行检查，应符合颗粒剂项下有关的各项规定，并进行砷盐、重金属考察。

6. 1  粒度  按《中国药典》2005年版一部附录C项下检查，不能通过一号筛和能通过五号筛的颗粒和粉末总和，不得过15%。结果见表41-9。

表41-9   三批样品粒度检查

批号	060501	0605002	060503
粒度	4.9%	5.2%	5.0%

6. 2  水分  按《中国药典》2005年版一部附录H项下第二法检查，不得过6.0%。结果见表41-10。

表41-10   三批样品水分检查

批号	060501	060502	060503
水分	5.7%	5.4%	5.5%

6. 3  溶化性  按《中国药典》2005年版附录C项下检查，应符合有关规定。结果见表41-11。

表41-11   三批样品溶化性检查

批号	060501	060502	060503
溶化性	全部融化	全部融化	全部融化

    6. 4  装量差异  按《中国药典》2005年版附录C项下检查，应符合有关规定。结果见表41-12。

表41-12   三批样品的装量差异

批号	060501	060502	060503
装量差异	符合规定	符合规定	符合规定

    6. 5  砷盐  取本品1g，加10%镁乙醇溶液l0ml，点燃，熄灭后，缓缓灼烧使之炭化，再在550℃灼烧使完全炭化，放冷，残渣加盐酸10ml溶解，移入检砷瓶中，坩埚用水13ml分次洗涤，洗液并入检砷瓶中，再加盐酸3ml，照砷盐检查法《中国药典》2005年版一部附录F检查，自“再加碘化钾试液5 ml”起，依法操作，结果见表41-13。

表41-13   三批样品砷盐限量检查

批号	060501	060502	060503
砷盐限量（ppm）	<2	<2	<2

    6.6  重金属  取本品1g,置坩埚内，缓缓灼烧至完全炭化，放冷至室温，加硫酸0.1ml，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，加0.5 ml ,蒸干，至氧化氮蒸汽除尽后，在550℃灼烧至完全炭化，放冷，照《中国药典》2005年版一部附录E重金属检查法检

查，结果见表41-14。

表41-14   三批样品重金属限量检查

批号	060501	060502	060503
重金属限量（ppm）	<10	<10	<10

6.7  微生物限度  照《中国药典》2005年版一部附录C微生物限度检查法检查，应符合有关规定。结果见表41-15。

表41-15   三批样品微生物限度检查

批号	060501	060502	060503
细菌数	25	24	25
霉菌数	0	0	0
大肠杆菌	未检出	未检出	未检出
活螨	未检出	未检出	未检出

   7.薤白配方颗粒乙醇浸出物的测定

    取本品5.0g，加60%乙醇溶液50ml，充分搅拌，冷浸6h，并不时摇动，过滤，再用10ml 60%乙醇洗涤滤纸，合并滤液，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，再置于105   烘箱中干燥至恒重，计算乙醇浸出物含量。结果见表41-16。

表41-16   乙醇浸出物含量

批号	乙醇浸出物含量（%）	平均含量（%）	RSD
060501	11.2	11.17	0.42
060502	11,1
060503	11.2

    本品测定结果表明:三批样品中薤白中乙醇浸出物含量均在110mg/g以上。本品中试成品的制备中薤白乙醇浸出物平均为11.1%， 2005年版中国药典没有对薤白的乙醇浸出物进行规定。根据成品中薤白药材所占比例(成品颗粒剂中每1g含薤白药材1g)，由公式:(薤白原料药材中薤白乙醇浸出物含量)×（成品颗粒剂中每1g含薤白生药量)×(薤白乙醇浸出物转移率)，即0.214 x 1(g/g )×52. 67%计算得，本品每1g醇浸出物不应少于113mg/g，再考虑中试与大生产的差异，下调10%后，暂定本品醇浸出物不应少于101. 4mg/g。本品三批成品中每1g醇浸出物含量均在110mg以上，因此，成品含量均高于本品所规定的最低含量，所测三批样品均符合规定。

    8. 功能主治

    用于胸痹证，脘腹痞满胀痛，泻痢里急后重等。

    9. 用法用量

    供配方用，5~9g或遵医嘱。

    10. 规格

    每袋1g相当于原生药量1g。

    11. 贮藏

    置阴凉于燥处保藏。

    12. 有效期

    2年。